G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷價(jià)值

李璐，柳楠楠

侵襲性真菌病即指真菌侵入人體組織、血液，在這些部位生存、繁殖，致使器官和組織損壞或產(chǎn)生炎癥反應(yīng)的一類疾病[1]。肺侵襲性真菌病即真菌侵襲肺部，損傷了肺部功能，造成肺部出現(xiàn)病理變化[2]。患者常表現(xiàn)為咳嗽、干嘔、頭暈、失眠、無力、胸悶等癥狀。國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)以念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌為最常見的病原菌[3]。為探討G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷價(jià)值，本研究選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者設(shè)為觀察組，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組（非感染組），對(duì)兩組人員各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了檢測，同時(shí)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)在肺侵襲性真菌病中的診斷價(jià)值進(jìn)行觀察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者60例為觀察對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在真菌感染的高危因素；②存在臨床感染的證據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不全者；②不愿參與本項(xiàng)研究者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入侵襲性真菌肺感染者60例，男35例，女25例，年齡36～68歲，平均（54.15±5.25）歲。對(duì)照組納入病例數(shù)60例，男30例，女30例，年齡35～70歲，平均（54.18±5.41）歲，其中40例疑似侵襲性真菌感染，20例排除肺部感染，兩組患者的臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測系統(tǒng)，MK3酶標(biāo)儀，T02智能恒溫儀，高速離心機(jī)，振蕩器。（1，3）-β-D葡聚糖檢測試劑盒，血清半乳甘露聚糖試劑盒。

1.3 方法 G試驗(yàn)：通過振蕩將100μL血清與0.9 ml樣品處理液混勻，加熱10 min（70℃），放置冷卻槽內(nèi)5 min，同時(shí)在主劑中加入600μL主劑溶解液進(jìn)行溶解，混勻之后放置一邊，做待用準(zhǔn)備。將100μL冷卻完畢的處理液與100μl主劑移至試管內(nèi)，將兩者混勻，插入MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測系統(tǒng)中反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后儀器自動(dòng)計(jì)算出血清中（1,3-β）-葡聚糖的含量。

GM試驗(yàn)：將100μl處理液加至300μl待測血清中，將兩者混勻，水浴3 min（100℃），然后對(duì)其進(jìn)行離心，離心10 min后取上清液，進(jìn)行備用。在每個(gè)ELISA檢測孔中添加50μl結(jié)合液和經(jīng)過處理的50μl上清液，在37℃環(huán)境下放置60 min。各孔加入350μl清洗液后，將其吸干，每孔再次加入200μL顯色液，常溫下避光放置半小時(shí)，每孔加入100μl終止液；在450 nm波長下，在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料用“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果的比較 肺侵襲性真菌感染組患者的血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果高于對(duì)照組（t=-7.390、-16.462、-84.653，P＜0.001），見表1。

表1 兩組患者BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果的比較（x±s）Table 1 Comparison of BALFGM,Gtest results in two groups of patients(x±s)

2.2 不同檢測方法對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較 血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)聯(lián)合檢測的特異性和靈敏度明顯高于單項(xiàng)檢測，見表2。

表2 不同檢測方法對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較Table2 Diagnostic specificity and sensitivity of different detection methods for pulmonary invasive mycosis

2.3 肺侵襲性真菌病患者血實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果的相關(guān)性 肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)單相和聯(lián)合檢測的準(zhǔn)確性正相關(guān)，見表3。

3 討論

真菌通過感染氣管、支氣管和肺部組織等途徑，在氣道黏膜和肺部引發(fā)炎癥，進(jìn)而造成肺部組織出現(xiàn)病理性損害的現(xiàn)象，稱之為肺侵襲型真菌病[4-6]。在該疾病中較為常見的病原菌為念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌，常見于重癥監(jiān)護(hù)室的患者、器官移植者及血液系統(tǒng)腫瘤患者[7]。隨著近年來廣譜抗生素和糖皮質(zhì)激素應(yīng)用的增加，導(dǎo)致侵襲性真菌的發(fā)病率逐年增高[8-11]。傳統(tǒng)的診斷方法如針吸或病理組織活檢，由于其操作有創(chuàng)傷性、敏感度低、檢出率低等因素，給臨床早期診斷帶來了一定困難。

表3 肺侵襲性真菌病患者血實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測準(zhǔn)確性的相關(guān)分析Table3 Correlation Analysis of blood laboratory indicators of patients with pulmonary invasive fungal disease and the accuracy of BALFGM and Gtest

肺部經(jīng)受真菌感染時(shí)，（1,3-β）-葡聚糖通過釋放作用，出現(xiàn)在體液中，常通過G試驗(yàn)進(jìn)行侵襲性真菌（念珠菌屬、曲霉屬、毛孢子菌等）感染的早期診斷，但只能提示有無真菌侵襲性感染，并不能確定為何種真菌。而且抗生素的應(yīng)用和輸注白蛋白會(huì)使患者體內(nèi)葡聚糖含量增高，造成G試驗(yàn)假陽性率增高。GM檢測的原理為：曲霉菌的菌絲在生長過程中，GM抗原從最薄弱的菌絲頂端釋放，是一類最早釋放的抗原，其釋放的多少與菌量呈正相關(guān)。GM試驗(yàn)對(duì)診斷侵襲性曲霉感染特異性高，?？稍诨颊吲R床癥狀出現(xiàn)前幾天就獲得陽性結(jié)果，也可以作為治療效果的參考指標(biāo)之一。但是免疫功能正常的患者，白細(xì)胞會(huì)吞噬半乳甘露聚糖抗原，造成GM試驗(yàn)假陰性率增高。血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)聯(lián)合檢測特異性和靈敏度明顯高于單項(xiàng)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），降低了假陽性和假陰性率，彌補(bǔ)了各自的缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中G試驗(yàn)的敏感度高于GM試驗(yàn)，GM試驗(yàn)的特異度高于G試驗(yàn)。若兩者聯(lián)合檢測均陰性，可以排除侵襲性真菌感染。若兩者聯(lián)合檢測均陽性，則侵襲性真菌感染的可能性很大，尤其是曲霉菌感染。此外實(shí)驗(yàn)室檢測WBC、NEU%和CRP三項(xiàng)指標(biāo)的水平越高，代表其遭受病原菌侵襲的可能性越大，因此肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)單相和聯(lián)合檢測的準(zhǔn)確性呈正相關(guān)。

通過以上討論分析，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測在對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷中具有較高敏感性和特異性，可作為臨床重要的輔助診斷指標(biāo)。

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