孫玉花 葉延芬(通訊作者) 袁會成 趙良存
(甘肅省武威腫瘤醫(yī)院 甘肅 武威733000)
丙戊酸鈉為廣譜抗癲癇藥,其抗癇譜廣、療效高,是較理想的抗癲癇藥物。近年來,臨床用于治療偏頭痛、原發(fā)性三叉神經(jīng)痛、遲發(fā)性運(yùn)動障礙等也有較好療效[1-2],但其在臨床上的治療指數(shù)低,安全有效血藥濃度范圍較窄,而且服藥周期長,容易發(fā)生不良反應(yīng)[3]?;颊唛L期服用丙戊酸鈉治療的過程中,密切注意影響丙戊酸鈉血藥濃度波動的因素,必須綜合考慮各方面的因素,實(shí)行個體化給藥,以血藥濃度為依據(jù),而確?;颊叩挠盟幇踩1痉ㄍㄟ^優(yōu)化血漿中丙戊酸鈉提取方法,減少干擾因素,通過HPLC法測定腫瘤患者血漿中丙戊酸鈉的含量,其專屬性強(qiáng)、結(jié)果可靠,為臨床使用丙戊酸鈉做好藥學(xué)監(jiān)護(hù)提供了依據(jù)。
LC100高效液相色譜儀(上海伍豐科學(xué)儀器有限公司);BSM電子天平(上海卓精電子科技有限公司),HX-03超聲波清洗器(武漢恒信世紀(jì)科技有限公司)。
丙戊酸鈉對照品由中國食品藥品生物制品檢定研究所提供(批號:100963-201302);乙腈為色譜純;水為娃哈哈純凈水;正己烷、甲醇、三乙胺均為分析純;空白血漿由血庫供應(yīng)。
色譜柱:PronaosEP-C18柱(4.6mm×250mm);流動相:乙腈-水(75:25)[1],流速:1.0mL?min-1,柱溫:35℃,檢測波長:248nm;理論板數(shù)應(yīng)不低于3000。
精密稱取105℃干燥至恒重的丙戊酸鈉對照品57.5mg,置于50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,得1.15mg?mL-1丙戊酸鈉對照品溶液,4℃儲存?zhèn)溆谩?/p>
精密吸取待測血清樣品180μL于10mL試管中,加20μL甲醇,振搖混勻,加入1mol/L硫酸200μL,再加入正己烷5mL,旋渦振蕩2min,取上清液至試管中,加入10g/L α-溴苯乙酮200μL,10%三乙胺50μL,超聲2min,置55℃水浴中衍生化反應(yīng)15min,揮干有機(jī)溶劑,殘渣用乙腈200μL溶解,0.45μm濾膜濾過,取20μL進(jìn)樣。
取健康人血清180μL于10mL小試管中,加入丙戊酸鈉對照品溶液20μL,振搖混勻,加入1mol/L硫酸200μL,按照“2.3”項(xiàng)下處理,取20μL進(jìn)樣。
空白血清、空白血清加丙戊酸鈉對照品、待測血清樣品色譜圖見圖1。由圖可見在此色譜條件下丙戊酸鈉的色譜峰能夠完全分離,峰形對稱,無雜質(zhì)峰干擾,丙戊酸鈉對照品的保留時間為12.86min,樣品保留時間為12.76min。
精密量取對照品貯備液1、2、4、6、8、10mL,分別加入10mL量瓶中,加流動相稀釋制成0.115、0.230、0.46、0.69、0.92、1.15mg?mL-1對照品溶液,搖勻,分別精密量取20μL加入6只5mL具塞試管中,加健康人血清150μL。按照“2.3”項(xiàng)下處理,取20μL進(jìn)樣,以丙戊酸鈉濃度(X)與丙戊酸鈉峰面積(Y)進(jìn)行線性回歸得回歸方程:Y=12.4235X-1.2536(r=0.9999)。結(jié)果表明:丙戊酸鈉濃度(X)為11.5~115μg?mL-1間呈良好線性關(guān)系。
分別配制11.5、46、115μg/mL 3種濃度的對照品+血清各5份,置于5mL具塞試管中,按照“2.3”項(xiàng)下處理,分別于1d內(nèi)連續(xù)檢測5次及5d內(nèi)每天檢測1次,記錄峰面積。計算日內(nèi)和日間精密度,結(jié)果見表1。
表1 血清中丙戊酸鈉的精密度(n=5,±s)
表1 血清中丙戊酸鈉的精密度(n=5,±s)
樣品中丙戊酸鈉含量(μg/mL)日內(nèi)精密度 日間精密度檢測值(μg/mL)RSD(%) 檢測值(μg/mL) RSD(%)11.511.44±0.0712.4211.38±0.142.71 46.045.86±0.841.0846.12±0.981.42 115.0115.5±0.680.61114.97±1.261.05
分別配制11.5、46、115μg/mL3種濃度的對照品血清樣品各5份,按照“2.3”項(xiàng)下處理,測定色譜峰面積,計算回收率,結(jié)果見表2。
表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5,±s)
表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5,±s)
加入丙戊酸鈉對照品量(μg/mL) 檢出量(μg/mL) 相對回收率(%)RSD(%)11.511.55±0.1698.262.62 4645.68±0.8599.351.12 115113.68±1.2199.471.34
取丙戊酸鈉貯備液,用流動相分別配制成11.5、46、115μg/mL3種濃度的對照品血清樣品溶液,于4℃冰箱保存,分別在0、1、3、5d進(jìn)樣,記錄峰面積,三種不同濃度丙戊酸鈉的照片峰面積的RSD分別為1.05%、1.84%、2.21%,n=4。表明丙戊酸鈉對照品溶液在5天內(nèi)穩(wěn)定。
4.1 丙戊酸鈉為一種不含氮有機(jī)酸鹽,有效血藥濃度為50~100μg/mL,血藥濃度超過100μg/mL,毒副作用增加療效無明顯增加[4],主要引起血清堿性磷酸酶和氨基轉(zhuǎn)移酶升高,倦睡、眩暈、疲乏、頭痛、共濟(jì)失調(diào)、輕微震顫、異常興奮、不安和煩躁等反應(yīng)[5],因此在用藥過程中檢查血藥濃度來為臨床治療提供依據(jù)。
4.2 目前,有關(guān)丙戊酸鈉在人體血漿中濃度檢測方法主要采用熒光偏振免疫分析法(FPIA),其精密度與準(zhǔn)確度均較高,在臨床抗癲癇治療中,可有效的指導(dǎo)臨床合理用藥,但FPIA法儀器設(shè)備昂貴,各醫(yī)療機(jī)構(gòu)FPIA不能普遍使用,部分欠發(fā)達(dá)地區(qū)的用藥人群不能提供藥學(xué)監(jiān)護(hù),本文丙戊酸鈉藥物濃度測定方法為有關(guān)資料[6-7]報道的高效液相色譜法,用α-溴苯乙酮柱前衍生化反應(yīng),丙戊酸鈉的保留時間和分離效果比較理想。
4.3 丙戊酸鈉經(jīng)柱前衍生化后與血漿中其他成分分離效果好,其他成分對測定無干擾,有文獻(xiàn)報道[8],HPLC法檢測結(jié)果略高于FPIA法,我們采用HPLC法和FPIA法進(jìn)行檢測比較,兩種方法無顯著差異,本文HPLC法樣品處理步驟簡便、方法簡單、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確,適用于丙戊酸鈉的血藥濃度測定及臨床藥代動力學(xué)研究。
【參考文獻(xiàn)】
[1]陳新悅.丙戊酸鈉的臨床新用途[J].中國農(nóng)業(yè),2006,15(10):62.
[2]劉智.丙戊酸鈉治療精神病患者的攻擊行為[J].重慶醫(yī)學(xué),2007,36:490-491.
[3]朱斌.1214例丙戊酸血藥濃度監(jiān)測的回顧性分析[J].藥物流行病學(xué)雜志,2008,17:48-49.
[4]王宏虹.丙戊酸鈉血藥濃度監(jiān)測研究概況[J].齊魯藥事,2012,31:10.
[5]何思陸.丙戊酸鈉致不良反應(yīng)39例文獻(xiàn)分析[J].中國藥房,2010,21:40.
[6]陳艷,袁君.柱前衍生HPLC法測定丙戊酸鈉的血藥濃度及其臨床應(yīng)用[J].安徽醫(yī)藥,2010,14:289-290.
[7]馮惠平,陳宜峰.柱前衍生-高效液相色譜法測定人血清中丙戊酸鈉的濃度[J].中國藥師,2009,12:1755-1757.
[8]張浩,李金德.FPIA法與HPLC法監(jiān)測癲癇患兒外周血丙戊酸鈉濃度差異的比較[J].中國生化藥物雜志,2017,1:37.