高效液相色譜在化學(xué)藥物分析中的實(shí)際應(yīng)用

厲芬 陳褚建 王新財(cái) 張誠(chéng)賢

（湖州市食品藥品檢驗(yàn)研究院 浙江 湖州313000）

薄層色譜TLC為早前藥物分析較為常見(jiàn)的方法，就研究初期分析化學(xué)藥物的藥理起著重要的影響和作用，但經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)存在分離難問(wèn)題，使得最終檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問(wèn)題。而HPLC為藥物分析的先進(jìn)方法，本次調(diào)查主要針對(duì)阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素三種抗生素作為調(diào)查分析對(duì)象。現(xiàn)將報(bào)告闡述如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

分析樣品選取阿奇霉素（國(guó)藥準(zhǔn)字H20000197，東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司，規(guī)格0.5g/片）、克拉霉素（國(guó)藥準(zhǔn)字H20033513，江西匯仁藥業(yè)有限公司，規(guī)格0.25g/片）、羅紅霉素（國(guó)藥準(zhǔn)字H20067998，長(zhǎng)春長(zhǎng)慶藥業(yè)集團(tuán)有限公司，規(guī)格0.3g/粒）,同時(shí)將檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)檢驗(yàn)方法分為TLC組和HPLC組，對(duì)于兩組化學(xué)藥物的一般資料發(fā)現(xiàn)無(wú)明顯差距（P＜0.05）。

1.2 方法

1.2.1 TLC組 將參加實(shí)驗(yàn)的三種藥物研磨成粉，每份樣本取適量溶解到50ml量杯中，搖勻2min并靜置5min，分別經(jīng)過(guò)淋洗、上樣、復(fù)淋洗、洗脫以及分離程序提取化學(xué)藥物成分，并采用高效硅膠色柱檢測(cè)，分別記錄色譜。

1.2.2 HPLC組 前期處理方法與TLC相同，聯(lián)合濾過(guò)并采用紫外線掃描，波長(zhǎng)保持在200～400nm，將掃描后標(biāo)本注入液相色譜儀，記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

分別觀察兩組檢測(cè)結(jié)果在不同溫度下色譜柱的化學(xué)藥物分析時(shí)間，以及兩組藥物的純度、分離率以及回收率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次調(diào)查采用SPSS19.0軟件計(jì)算處理，以及t和χ2檢驗(yàn)計(jì)量和計(jì)數(shù)資料，當(dāng)P＜0.05時(shí)說(shuō)明對(duì)比數(shù)據(jù)差距有意義。

2.結(jié)果

2.1 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本30°色譜柱圖結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本30°色譜柱圖結(jié)果（±s，min）

表1 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本30°色譜柱圖結(jié)果（±s，min）

TLC315.53±0.5915.39±0.8114.39±0.89 HPLC32.14±0.412.09±0.392.09±0.31 t/38.10530.02923.274 P/0.0020.0010.001

2.2 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本90°色譜柱圖結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本90°色譜柱圖結(jié)果（±s，min）

表2 對(duì)比兩組檢測(cè)樣本90°色譜柱圖結(jié)果（±s，min）

TLC31.28±0.271.39±0.411.29±0.37 HPLC314.01±0.3914.02±0.6914.11±0.79 t/52.19628.27428.964 P/0.0010.0010.001

2.3 對(duì)比兩組樣本藥物成分分離率、純度對(duì)比詳見(jiàn)表3。

表3 2對(duì)比兩組樣本藥物成分分離率、純度對(duì)比

2.4 對(duì)比兩組樣本化學(xué)藥物回收率詳見(jiàn)表4。

表4 對(duì)比兩組樣本化學(xué)藥物回收率[n(%)]

3.討論

藥物成份的快速分離、提取可提升對(duì)于藥物成份快速檢測(cè)的敏感度。對(duì)于色譜法為傳統(tǒng)的分離辦法，主要作用機(jī)制為通過(guò)不變的固定相和流動(dòng)相分析藥物成份中混合物，快速分離藥物內(nèi)各成分的比例，在色譜中逐層的呈現(xiàn)出來(lái)，快速分離和分析藥物成分[1]。TLC主要檢測(cè)重點(diǎn)在于分離，但實(shí)驗(yàn)證明分離速度較慢使得分離效果并不敏感。對(duì)于成份復(fù)雜的藥物無(wú)法實(shí)現(xiàn)。近些年，HPLC為應(yīng)用廣泛的藥物分析方法，相比TLC檢測(cè)整體效果分離速度有所提升，所以在分析藥物成份中具有較高價(jià)值[2]。

通過(guò)本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，根據(jù)不同檢測(cè)方法將其樣本分為TLC組和HPLC組。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)色譜柱在30°和90°兩種條件下，HPLC檢測(cè)速度均較TLC檢測(cè)速率高，相比差距顯著（P＜0.05）；對(duì)比兩組樣本純度和分離率發(fā)現(xiàn)，HPLC檢測(cè)純度和分離率均在98%以上，明顯高于TLC檢測(cè)法，差距顯著（P＜0.05）；以及對(duì)比兩組樣本的回收率發(fā)現(xiàn)，HPLC組分別為97.%、99%、99%，而TLC組為63%、64%、65%，相比HPLC組明顯高于TLC組，差距顯著（P＜0.05）。綜上所述，HPLC檢測(cè)法可對(duì)普通和復(fù)雜成份的化學(xué)藥物進(jìn)行快速分離，且檢測(cè)敏感度和回收率高。

】

[1]程軍,劉延.高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法在藥物分析中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2017(20):1753-1771.

[2]鄭勤琴,項(xiàng)勛,段綱,等.高效液相色譜和超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用研究[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2017(2):57-59.