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      壓實(shí)度對(duì)玉米青貯開窖后營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響

      2018-04-16 01:07:01王旭哲張凡凡馬春暉李菲菲王樹林
      關(guān)鍵詞:有氧乳酸線性

      王旭哲,張凡凡,馬春暉,李菲菲,王樹林

      (石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,石河子 832003)

      0 引 言

      玉米青貯是畜牧業(yè)最重要的飼料來源之一[1],制作青貯的主要目的是通過厭氧條件下的乳酸菌發(fā)酵,最大限度地保護(hù)飼料作物中的原始營(yíng)養(yǎng)素。開窖后,青貯飼料的好氧變質(zhì)便啟動(dòng),空氣滲透是有氧變質(zhì)的主要原因,造成干物質(zhì)和養(yǎng)分流失,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損耗,青貯溫度的上升以及有害菌的增殖,大量好氧微生物的活動(dòng)變得活躍,腐敗進(jìn)程開始[2-4]。因此,在青貯飼料生產(chǎn)中快速降低殘余空氣同時(shí)防止空氣滲透是控制好氧變質(zhì)的關(guān)鍵。而增加壓實(shí)度能降低青貯原料間隙的殘余空氣,從而提高青貯發(fā)酵品質(zhì)的有效方法[5]。良好的青貯飼料質(zhì)量的前提是迅速去除飼料中的氧氣,使青貯處于壓實(shí)狀態(tài)[6]。高壓實(shí)度青貯其目的是消除空氣通道,組織氧氣的流動(dòng),防止空氣滲透。通過控制適當(dāng)?shù)那噘A壓實(shí)度進(jìn)而降低有機(jī)物的氧化作用,即壓實(shí)度是影響青貯干物質(zhì)的保存的關(guān)鍵參數(shù)[7]。很多牛奶場(chǎng)均發(fā)現(xiàn)壓實(shí)密度可能成為影響青貯飼料有氧穩(wěn)定性的主要原因之一[8]。因此,對(duì)于提高青貯的品質(zhì)而言,青貯壓實(shí)度的控制顯得尤為重要。鑒于青貯壓實(shí)度對(duì)于開窖后青貯品質(zhì)的影響,建立開窖時(shí)間,青貯壓實(shí)度以及開窖后青貯溫度與青貯營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)間的多元線性回歸關(guān)系,可在生產(chǎn)實(shí)踐中針對(duì)已知條件(開窖時(shí)間、壓實(shí)度、溫度)快速預(yù)測(cè)開窖后青貯品質(zhì)。

      本研究設(shè)置不同壓實(shí)度的青貯處理,探究壓實(shí)度對(duì)開窖后玉米青貯品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響,對(duì)壓實(shí)度與青貯品質(zhì)進(jìn)行擬合分析,對(duì)開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度與營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)進(jìn)行多元線性回歸分析,建立回歸模型。旨在明確青貯開窖后壓實(shí)度與營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性間的關(guān)系,通過建立的多元線性回歸模型進(jìn)行青貯品質(zhì)的預(yù)測(cè),為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考。

      1 材料與方法

      1.1 材料與樣地

      試驗(yàn)選用新飼玉10號(hào)作為青貯原料。試驗(yàn)選定在石河子大學(xué)的牧草試驗(yàn)站(44°20′N,88°30′E,海拔 420 m)開展。其生長(zhǎng)期:4月10日~7月20日(2015年),共計(jì) 101 d,青貯玉米的刈割期定于乳熟末期/蠟熟初期進(jìn)行,將青貯玉米切碎至1~2 cm。發(fā)酵罐采用PVC直筒管材設(shè)計(jì),高102 cm,直徑19.4 cm,壁厚0.6 cm,容積為30.2 L。全株玉米青貯前原料化學(xué)成分見表1。

      表1 玉米青貯原料營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Nutrients composition of corn ensiling material

      1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

      試驗(yàn)將發(fā)酵裝料密度設(shè)計(jì)為5個(gè)梯度,分別為350、400、500、600、700 kg/m3,其填裝量分別為 10.57、12.08、15.10、18.12、21.14 kg。每個(gè)梯度3次重復(fù),此外各處理填裝量各做一罐用于模型驗(yàn)證。分別在青貯裝罐完成后50 d時(shí)開窖,同時(shí)檢測(cè)發(fā)酵罐開窖后第0、12、24、36、60、108 h青貯的變化。全程動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)各處理青貯溫度變化。對(duì)青貯pH值、干物質(zhì)(DM)、粗蛋白(CP)、中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF),水溶性碳水化合物(WSC)、乳酸(LA)、乙酸(AA)、氨態(tài)氮(NH3-N)進(jìn)行分析。對(duì)開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度與營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)進(jìn)行多元線性回歸分析,并采集不同開窖時(shí)間的各處理青貯樣品30份進(jìn)行模型合理性分析。

      1.3 測(cè)定方法

      DM 采用 105 ℃烘干法測(cè)定[9];pH 值利用酸度計(jì)(PHS-3C,上海雷磁)測(cè)定;CP測(cè)定采用凱氏定氮法[9];NDF和ADF采用范氏法(Van Soest)[9];WSC測(cè)定采用蒽酮比色法測(cè)定[10];有機(jī)酸(乳酸、乙酸、丙酸、丁酸)用液相色譜法測(cè)定[11],氨態(tài)氮采用苯酚-次氯酸鈉比色法測(cè)定[2];有氧穩(wěn)定性測(cè)定在發(fā)酵50 d后打開全部實(shí)驗(yàn)室青貯發(fā)窖罐,罐口用雙層紗布包裹,防止果蠅等其他雜質(zhì)污染和水分散失,空氣可自由進(jìn)入發(fā)酵罐中,置于室溫條件下保存。將多點(diǎn)式溫度記錄儀(i500-E3TW,玉環(huán)智拓儀器科技有限公司)的多個(gè)探頭分別放置于發(fā)酵罐的幾何中心,同時(shí)在環(huán)境中放置3個(gè)探頭,用于測(cè)定環(huán)境溫度,溫度記錄儀測(cè)量時(shí)間間隔設(shè)置為 5 min,每個(gè)處理放置 3個(gè)溫度探頭。如果樣品溫度高于環(huán)境溫度 2 ℃,說明青貯開始腐敗變質(zhì),此時(shí)記錄時(shí)間即為有氧穩(wěn)定時(shí)間[2]。

      1.4 數(shù)據(jù)處理

      在Excel中作數(shù)據(jù)的基本處理,用SPSS 20.0對(duì)各處理的DM、pH值、CP、NDF、ADF、WSC、NH3-N、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸濃度以及氧穩(wěn)定時(shí)間進(jìn)行方差分析,通過 Duncan法對(duì)各處理間的差異進(jìn)行比較。采用Origin 8.0進(jìn)行繪圖。運(yùn)用SPSS 20.0進(jìn)行多元線性回歸分析,多元線性回歸建立因變量 y(pH值、DM、CP、NDF、ADF、WSC、乳酸、乙酸、NH3-N)與多個(gè)自變量x(開窖時(shí)間,壓實(shí)密度,發(fā)酵溫度)間的多元線性回歸模型。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 不同壓實(shí)度下有氧穩(wěn)定性變化

      青貯壓實(shí)度的增加,使有氧穩(wěn)定時(shí)間延長(zhǎng)(圖1),處理350~700 kg/m3有氧暴露后穩(wěn)定的時(shí)間分別為15、49、62、100和 73 h。各處理間均存在顯著差異(P<0.05),其中600 kg/m3處理組有氧穩(wěn)定時(shí)間最長(zhǎng)達(dá)到100 h。運(yùn)用ExpDec 1模型對(duì)青貯壓實(shí)度和有氧穩(wěn)定性進(jìn)行擬合發(fā)現(xiàn)二者呈現(xiàn)顯著非線性關(guān)系(P<0.05),其關(guān)系式為式(1)。

      y =-3 739.145e(-x/87.704)+85.197(R2=0.688)(1)

      圖1 不同壓實(shí)度玉米青貯的有氧穩(wěn)定性Fig.1 Aerobic stability of different compaction corn silage

      2.2 不同壓實(shí)度下營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)動(dòng)態(tài)變化

      玉米青貯開窖108 h后各處理DM濃度較開窖0 h下降0.6%~5.5%(除350 kg/m3,壓實(shí)度為350 kg/m3玉米青貯DM濃度在開窖108 h后較開窖0 h未見顯著差異(P>0.05)),結(jié)果見表2。開窖期間,350 kg/m3青貯壓實(shí)度處理其DM濃度始終顯著低于500、600和700 kg/m3青貯壓實(shí)度2.6%~11.9%(P<0.05)。

      各青貯壓實(shí)度處理CP濃度,在開窖108 h后較開窖0 h下降13.7%~17.0%(表2)。開窖后,青貯壓實(shí)度為350 kg/m3處理的CP濃度,始終顯著低于600和700 kg/m3青貯壓實(shí)度處理 22.8%~37.0%(P<0.05)。開窖 108 h時(shí) 600 kg/m3壓實(shí)度的青貯 CP濃度顯著高于其余處理(P<0.05)。

      各壓實(shí)度玉米青貯處理NDF和ADF的濃度在開窖108 h后,分別較開窖0 h增加了6.7%~9.5%和8.3%~16.4%。其中青貯壓實(shí)度350 kg/m3處理的NDF濃度除開窖 24 h外,其余開窖時(shí)間均顯著高于 500、600和 700 kg/m3壓實(shí)度處理1.2%~4.6%(P<0.05)。壓實(shí)度350 kg/m3的ADF濃度在開窖后始終顯著高于500、600和700 kg/m3青貯壓實(shí)度處理6.2%~14.1%(P<0.05)。

      表2 開窖后不同壓實(shí)度下玉米青貯營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)變化Table 2 Change of nutritive value of corn silage at different compaction after silos opened

      開窖后各玉米青貯處理的WSC濃度逐步降低,開窖108 h后部分壓實(shí)度處理WSC濃度較開窖0 h下降23%~51%(表2)。玉米青貯壓實(shí)度為700 kg/m3處理其WSC濃度分別在開窖0 h,12 h和60 h顯著比壓實(shí)度為350 kg/m3的處理高32.7%~66.1%(P<0.05)。其余開窖時(shí)間各處理間的WSC濃度差異不顯著(P>0.05)。

      2.3 不同壓實(shí)度下發(fā)酵品質(zhì)動(dòng)態(tài)變化

      青貯開窖后,各玉米青貯壓實(shí)度處理pH值在開窖108 h時(shí)較開窖0 h時(shí)上升了14.0%~96.6 %(圖2a)。350 kg/m3壓實(shí)度處理的玉米青貯其pH在開窖后始終顯著高于壓實(shí)度為500、600和700 kg/m3的處理組3.1%~39.9%(P<0.05)。開窖60 h后青貯壓實(shí)度350和400 kg/m3的 pH值均超過劣質(zhì)青貯(腐敗)規(guī)定值 4.80,而開窖108 h時(shí)壓實(shí)度為600和700 kg/m3的玉米青貯處理pH值差異不顯著(P>0.05)。

      圖2 開窖后不同壓實(shí)度下玉米青貯pH值,乳酸,乙酸,氨態(tài)氮變化Fig.2 Change of pH value, lactic acid, acetic acid, NH3-N, of corn silage at different compaction after silos opened

      各玉米青貯壓實(shí)度乳酸和乙酸濃度在青貯開窖108 h后較開窖 0 h分別減少 67.2%~99.8%和 66.3%~98.8%(圖2b、2c)。除開窖后24和60 h外,其余時(shí)間壓實(shí)度為600和700 kg/m3處理組的乳酸濃度顯著高于350 kg/m3的壓實(shí)度處理17.0%~84.9%(P<0.05)。青貯壓實(shí)度350 kg/m3處理的乙酸濃度分別在開窖24、36和108 h顯著低于壓實(shí)度為700 kg/m3的處理0.4%~2.2%(P<0.05)。開窖后各壓實(shí)度玉米青貯丙酸和丁酸的濃度均低于最低檢出限。

      各壓實(shí)度處理組NH3-N濃度在開窖后108 h較開窖0 h時(shí)增加了11.1%~44.8 %(圖2d)。其中350 kg/m3壓實(shí)度處理的玉米青貯NH3-N濃度在開窖后顯著高于500、600和700 kg/m3的壓實(shí)度處理14.1%~37.4%(P<0.05)。除開窖0和60 h外其余時(shí)間500、600和700 kg/m3的壓實(shí)度處理間差異不顯著(P>0.05)。

      2.4 壓實(shí)度及開窖時(shí)間對(duì)玉米青貯品質(zhì)的交互作用

      除WSC濃度外,開窖時(shí)間對(duì)其余指標(biāo)均產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01,表3),不同的青貯壓實(shí)度對(duì)所有指標(biāo)均產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01),從表3中可知開窖時(shí)間與壓實(shí)度的交互作用對(duì)CP、ADF和WSC濃度變化無顯著影響(P>0.05),但對(duì)其余指標(biāo)均產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01)。

      表3 開窖后玉米青貯品質(zhì)雙因素方差分析Table 3 Double factor variance analysis on quality of corn silage after silos opened

      2.5 開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度與營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)間的多元線性回歸分析

      將開窖時(shí)間(x1)、壓實(shí)度(x2)和青貯溫度(x3)同營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì)(y)進(jìn)行多元線性回歸分析(表4)。結(jié)果表明,除乙酸濃度與開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度間的多元線性回歸模型不顯著外(P>0.05),其余指標(biāo)多元線性回歸模型顯著性極強(qiáng)(P<0.01),并且模型擬合度達(dá)到76.8%~92.3%,R2達(dá)到0.590~0.853。其中,CP濃度與開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度間的多元線性回歸模型擬合度和R2最高,即可用該模型進(jìn)行92.3%的預(yù)測(cè)。對(duì)確定的模型進(jìn)行了基于實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)的有效性分析,結(jié)果表明:除乙酸外其余指標(biāo)多元回歸模型計(jì)算值與實(shí)測(cè)值誤差在0.281~1.321。其中CP濃度與開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度間的多元線性回歸模型誤差最小,具有較高實(shí)用性。

      表4 開窖后玉米青貯品質(zhì)與開窖時(shí)間、壓實(shí)度和發(fā)酵溫度間的多元線性回歸分析Table 4 Multiple linear regression analysis between silage quality and silos opened time, compaction, and silage temperature after silos opened

      3 討 論

      3.1 壓實(shí)度對(duì)玉米青貯有氧穩(wěn)定性的影響

      青貯開窖后,好氧微生物的活動(dòng)性增強(qiáng),其利用青貯發(fā)酵底物產(chǎn)生水、CO2和熱量[3],即開窖后青貯溫度隨開窖時(shí)間延長(zhǎng)而上升。而高壓實(shí)度的青貯提供相對(duì)穩(wěn)定的pH值環(huán)境,更好的抑制腐敗菌的生長(zhǎng)[12]。開窖后,高壓實(shí)度的玉米青貯可有效的阻止氧氣的滲入[13],減緩開窖后大量好氧微生物的活動(dòng),減緩青貯溫度的上升時(shí)間,有效提高青貯有氧穩(wěn)定性。本研究證明所設(shè)置的青貯壓實(shí)度有效提高玉米青貯的有氧穩(wěn)定性。但壓實(shí)度600 kg/m3處理其有氧穩(wěn)定性優(yōu)于700 kg/m3處理,可能是壓實(shí)度過高造成青貯發(fā)酵液也多引起的[14],汁液中含有大量的碳水化合物被微生物利用,使各類微生物活動(dòng)性增強(qiáng)。同時(shí),開窖后700 kg/m3壓實(shí)度下的玉米青貯乳酸濃度始終最高,刺激酵母菌的增殖[15],導(dǎo)致青貯溫度較600 kg/m3處理有所提高。

      3.2 壓實(shí)度對(duì)玉米營(yíng)養(yǎng)青貯品質(zhì)的影響

      伴隨著青貯的開窖,玉米青貯 DM 逐步減少[16]。本研究中將營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)與開窖時(shí)間、青貯壓實(shí)度以及開窖后青貯溫度進(jìn)行多元回歸分析,證明DM、CP和WSC濃度與上述三者呈顯著的多元線性回歸關(guān)系,該關(guān)系可滿足87.1~92.3%的預(yù)測(cè)。開窖時(shí)間的延長(zhǎng),增加了青貯中氧氣的濃度,提高各類腐敗微生物的代謝,青貯溫度在一定程度上有所提高。好氧微生物在開窖初期有氧條件下活動(dòng)性增強(qiáng),分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生 NH3-N,同時(shí)消耗利用大量WSC和乳酸,繼而青貯DM濃度損失較高[17]。為降低青貯飼料開窖后的損失,提高青貯飼料壓實(shí)度可以顯著減少有氧的惡化,高壓實(shí)度創(chuàng)造低孔隙度,從而減少氧氣擴(kuò)散進(jìn)入青貯飼料[18],腐敗微生物的活性降低,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失減少。WSC濃度在青貯開窖后減少,歸咎于微生物在有氧暴露后的代謝增加造成 DM的損失[19]。壓實(shí)度的增加利于提高WSC濃度,開窖初期乳酸菌利用WSC產(chǎn)生乳酸、乙酸,維持了pH值的穩(wěn)定[20],抑制好氧微生物對(duì)WSC的分解,因此可減少對(duì)WSC的消耗量。但隨著有氧暴露時(shí)間的延長(zhǎng),氧氣不斷滲入,好氧微生物逐步占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位,活躍的活動(dòng)分解大量的WSC[3]。

      NDF及ADF在青貯開窖后其濃度逐步增加[17],在開窖初期細(xì)胞呼吸作用以及隨開窖時(shí)間的增加,青貯溫度的升高促進(jìn)酶的水解,可能引起部分WSC的分解,造成不消化成分濃度的相對(duì)增加,其中,WSC發(fā)酵轉(zhuǎn)化為CO2,這種以氣體的形式損失的DM以一定比例增加了纖維的濃度[21]。本研究中發(fā)現(xiàn)青貯壓實(shí)度通過減少消化成分濃度的相對(duì)損失量,有利于降低NDF和ADF的濃度。結(jié)合開窖時(shí)間與開窖后青貯的溫度建立的多元回歸方程可對(duì)87.3%和83.0%的預(yù)測(cè)進(jìn)行分析。說明開窖時(shí)間、壓實(shí)度以及開窖后青貯溫度對(duì)NDF及ADF濃度具有顯著影響。

      3.3 壓實(shí)度對(duì)玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響

      青貯發(fā)酵過程中,乳酸菌通過將WSC轉(zhuǎn)化為有機(jī)酸降低pH值使得青貯得以保存[14]。pH值的快速下降是青貯飼料發(fā)酵過程中最重要的因素[22],以避免增加腐敗微生物的數(shù)量,pH值的下降反映了乳酸的濃度[23]。同樣,在開窖后 pH值體現(xiàn)了青貯是否保存較好及其被腐敗菌分解的程度。隨著開窖時(shí)間的延長(zhǎng)青貯的pH值會(huì)出現(xiàn)緩慢回升[24]。好氧微生物利用乳酸和乙酸的代謝增強(qiáng),直接導(dǎo)致pH值升高,引發(fā)其他好氧微生物的增殖,這與開窖后青貯溫度升高有關(guān)[25]。青貯溫度升高歸因于飼料壓實(shí)不足[26]。本研究表明,壓實(shí)度的增加可適度提高乳酸、乙酸濃度,降低pH值。較高青貯壓實(shí)度對(duì)乳酸的產(chǎn)生具有積極的影響[27],最終可提高青貯品質(zhì)[28]。利用青貯開窖時(shí)間、壓實(shí)度以及開窖后青貯溫度與乳酸和pH值進(jìn)行多元回歸分析得到88.8%和79.4%的預(yù)測(cè),可用于該模型。而本研究中乙酸的多元線性回歸模型不顯著(P>0.05),可能是由于開窖后乙酸的含量并未隨壓實(shí)度的增加產(chǎn)生明顯的變化規(guī)律,影響回歸模型建立。

      NH3-N濃度是評(píng)價(jià)青貯飼料品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo),通過多元回歸分析發(fā)現(xiàn),隨著開窖時(shí)間的延長(zhǎng)和青貯壓實(shí)度的增加以及青貯溫度的增加可顯著影響NH3-N濃度變化,呈極顯著的多元回歸關(guān)系(P<0.01),可滿足76.8%的預(yù)測(cè)。一般來說,NH3-N濃度反映了蛋白質(zhì)和氨基酸的降解程度;動(dòng)物對(duì)其利用價(jià)值較低,在青貯飼料中其濃度與青貯飼料的品質(zhì)呈負(fù)相關(guān)[29]。青貯開窖后,由于不良微生物的活動(dòng),氨基酸被分解成氨、硫化氫和胺類,降解率增大[3],使得NH3-N濃度增加[30]。高壓實(shí)度青貯減弱氧氣滲入,減緩腐敗微生物分解青貯中的氨基酸、含氮鹽類等物質(zhì)產(chǎn)生 NH3-N[3]。蛋白分解酶的活性隨著pH值的升高而升高,并且,溫度的提升也增加了蛋白酶的活性。

      4 結(jié) 論

      通過增加青貯壓實(shí)度,可改善開窖后青貯營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵品質(zhì),提高有氧穩(wěn)定性。緊實(shí)度為600 kg/m3的玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性最好,建議600 kg/m3為全株玉米最佳青貯緊實(shí)度。青貯開窖時(shí)間、壓實(shí)度以及開窖后青貯溫度與營(yíng)養(yǎng)及發(fā)酵指標(biāo)的多元線性回歸模型的擬合度在76.8%~92.3%,干物質(zhì)、粗蛋白、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、水溶性碳水化合物和乳酸濃度的回歸模型預(yù)測(cè)均達(dá)到80%以上,其中CP濃度多元線性回歸模型擬合度和R2(0.853)最高,對(duì)該模型進(jìn)行了基于實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)的有效性分析表明計(jì)算值與實(shí)測(cè)值誤差最低(0.281)。建立的多元線性回歸模型可進(jìn)行青貯品質(zhì)的預(yù)測(cè),同時(shí)最佳青貯緊實(shí)度的確定為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考。

      [參考文獻(xiàn)]

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