復(fù)合微生物制劑對(duì)豬生產(chǎn)性能、免疫功能和肉質(zhì)影響

石寶明，孟祥宇，蔡建成，滕 騰，白廣棟，單安山，申漢彬，王 麗，蔣宗勇

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，哈爾濱 150030；2.黑龍江省蘭西縣種豬場(chǎng)，黑龍江 蘭西 151500；3.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，廣州 510640）

抗生素作為飼料添加劑在養(yǎng)殖業(yè)中存在藥物殘留、耐藥性等問(wèn)題?？股貫E用，導(dǎo)致畜禽對(duì)病原體產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重影響畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，多國(guó)已明令禁止抗生素作為飼料添加劑使用。飼料中添加益生菌替代抗生素可增強(qiáng)畜禽免疫能力，為生產(chǎn)安全、優(yōu)質(zhì)畜產(chǎn)品開(kāi)辟新途徑。

動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液以新鮮蔬菜、水果為原料，經(jīng)多種益生菌發(fā)酵而成，是富含酶、維生素、礦物質(zhì)和次生代謝產(chǎn)物復(fù)合微生物制劑，由乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌等有益微生物組成，目前動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液生豬應(yīng)用研究樣本較少，張艷梅等發(fā)現(xiàn)仔豬階段添加0.5%動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液可有效防治呼吸道疾病[1]。王景芳等研究表明，母豬飼料中添加復(fù)合微生物制劑可以提高受孕率和仔豬成活率，在小梅山豬二元雜交仔豬保育期飼喂復(fù)合微生物制劑可以提高仔豬成活率，減少疾病發(fā)生[2]。目前尚無(wú)復(fù)合微生物制劑對(duì)豬飼料中抗生素替代作用全程觀察試驗(yàn)。本試驗(yàn)以27日齡二元雜交豬為試驗(yàn)動(dòng)物，添加復(fù)合微生物制劑飼至出欄，記錄生產(chǎn)性能、測(cè)定相關(guān)指標(biāo)，研究動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液替代抗生素對(duì)豬生產(chǎn)性能、免疫功能、肉質(zhì)影響及復(fù)合微生物制劑效用，為其替代抗生素奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試制劑

動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液（主要成分為枯草芽孢桿菌4×108cfu·mL-1、釀酒酵母菌4×108cfu·mL-1），黑龍江省京福龍農(nóng)牧科技開(kāi)發(fā)有限公司提供。

1.1.2 供試動(dòng)物

27日齡斷奶仔豬（長(zhǎng)白×大白）72頭，由黑龍江省蘭西縣種豬場(chǎng)提供。

1.1.3 供試飼糧

試驗(yàn)飼糧配方見(jiàn)表1，由蘭西種豬場(chǎng)配制提供。

表1 豬基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levelsof basal diets

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取健康且體重相近27日齡斷奶仔豬（長(zhǎng)白×大白）72頭，按體重與性別隨機(jī)分為3組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭豬，各組公母比例一致?？瞻讓?duì)照組飼喂無(wú)抗基礎(chǔ)飼糧，抗生素組在基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合抗生素（仔豬料：硫酸粘桿菌素20 mg·kg-1，吉他霉素40 mg·kg-1，喹乙醇75 mg·kg-1；肥豬料：吉他霉素20 mg·kg-1），復(fù)合微生物制劑組在基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%動(dòng)物酵素營(yíng)養(yǎng)液。

1.2.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于同一封閉豬舍。自由飲水，飼喂粉料，每日飼喂4次，迅速投放飼料以減少應(yīng)激。按豬場(chǎng)免疫程序接種各種疫苗，保持舍內(nèi)清潔衛(wèi)生，加強(qiáng)仔豬保溫措施。

1.2.3 生產(chǎn)性能指標(biāo)

試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)以欄為單位，每日稱重飼料，記錄采食量。每日清晨觀察并記錄腹瀉情況。試驗(yàn)第1、55天及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱重并統(tǒng)計(jì)相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.2.3.1 平均日采食量

記錄每欄豬總采食量，平均日采食量（ADFI）=（投料總數(shù)-所剩飼料）/試驗(yàn)天數(shù)。

1.2.3.2 平均日增重

分別于各階段開(kāi)始與結(jié)束時(shí)稱取每欄豬重量。平均日增重（ADG）=（試驗(yàn)?zāi)┢谄骄w重－試驗(yàn)初期平均體重）/試驗(yàn)天數(shù)。

1.2.3.3 料肉比

料肉比（F/G）=平均日采食量（ADFI）/平均日增重（ADG）。

1.2.3.4 腹瀉率

試驗(yàn)期間每日記錄腹瀉仔豬頭數(shù)與日期。腹瀉率=腹瀉總天數(shù)/（飼養(yǎng)天數(shù)×頭數(shù)）×100%

1.2.4 血液采集與分析

分別于55日齡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)清晨飼喂前每個(gè)重復(fù)取1頭豬前腔靜脈采血5 mL，3 000 r·min-1離心，分離血清，分裝于1.5 mL EP管中，-20℃冰箱待測(cè)。

采用Unicel DxC 800全自動(dòng)生化分析儀（Beck?man Coulter，USA）測(cè)定血漿中總蛋白TP、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、堿性磷酸酶（AKP）、乳酸脫氫酶（LDH）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）。

1.2.5 腸黏膜免疫因子采集與測(cè)定

屠宰后取空腸，生理鹽水沖洗腸道內(nèi)容物后，刮取空腸粘膜，分裝于1.5 mL凍存管中，-80℃冰箱保存待測(cè)。采用ELISA酶聯(lián)免疫法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自上海勁馬公司。使用352型酶標(biāo)儀（Labsystems Multiskan MS，F(xiàn)inland），具體操作按照豬酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定。

1.2.6 肉質(zhì)指標(biāo)檢測(cè)

出欄后，每欄取1頭豬屠宰，取背腰最長(zhǎng)肌檢測(cè)肉質(zhì)指標(biāo)。分別測(cè)定胴體重，肉色，pH，剪切力以及滴水損失。肉色利用NR10QC色差儀測(cè)定，pH利用哈納HI8424測(cè)試儀測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel整理并初步計(jì)算，SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)作單因素方差分析（One-Way ANOVA），Tukey法多重比較，各組以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SEM）表示。P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，仔豬階段（27～55日齡），各組仔豬平均日增重、平均日采食量以及料肉比差異不顯著（P＞0.05），復(fù)合微生物制劑組腹瀉率極顯著低于空白對(duì)照組和抗生素組（P＜0.01），55日齡3組平均重差異不顯著。肥豬階段（56日齡至出欄），抗生素組豬平均日增重顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。復(fù)合微生物制劑組與其他兩組差異不顯著。抗生素組平均日采食量極顯著高于復(fù)合微生物制劑組和空白對(duì)照組（P＜0.01）。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)抗生素組和復(fù)合微生物制劑組平均體重顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。3組料肉比差異不顯著（P＞0.05）。全階段（27日齡至出欄），抗生素組平均日增重顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05），復(fù)合微生物制劑組與其他兩組差異不顯著。抗生素組平均日采食量極顯著高于復(fù)合微生物制劑組和空白對(duì)照組（P＜0.01）。復(fù)合微生物制劑組和抗生素組平均重顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05），兩組之內(nèi)差異不顯著（P＞0.05）。3組全程料肉比差異不顯著（P＞0.05）。

表2 微生物制劑對(duì)豬生產(chǎn)性能影響Table 2 Effect of compound probiotics on the growth performance of pigs

2.2 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬血液生化指標(biāo)影響

由表3可知，仔豬階段復(fù)合微生物制劑組血液中堿性磷酸酶含量顯著高于抗生素組（P＜0.05），其他組血液生化指標(biāo)各組間差異均不顯著（P＞0.05）。育肥豬階段，3組血液生化指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 復(fù)合微生物制劑對(duì)仔豬腸道免疫因子影響

由表4可知，復(fù)合微生物制劑組空腸黏膜中SIgA含量極顯著高于抗生素組（P＜0.01），與空白對(duì)照組之間差異不顯著（P＞0.05）。復(fù)合微生物制劑組空腸黏膜中IgG含量極顯著高于抗生素組和空白對(duì)照組（P＜0.01）。復(fù)合微生物制劑組空腸黏膜中IL-1含量極顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.01）。

2.4 復(fù)合微生物制劑對(duì)育肥豬肉品質(zhì)影響

由表5可知，復(fù)合微生物制劑組和抗生素組的胴體重顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05），兩組差異不顯著。3組肉質(zhì)品質(zhì)指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 微生物制劑對(duì)豬血液生化指標(biāo)影響Table 3 Effects of compound probiotics on serum biochemical indexes of pigs

表4 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬腸道免疫因子影響Table 4 Effect of compound probiotics on the Intestinal immune factorsof pigs （μg·mL-1）

表5 復(fù)合微生物制劑對(duì)育肥豬肉品質(zhì)影響Table 5 Effect of compound probiotics on the meat quality of pigs

3 討論與結(jié)論

3.1 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬生產(chǎn)性能影響

本研究發(fā)現(xiàn)，仔豬階段添加復(fù)合微生物制劑可顯著降低仔豬腹瀉率，對(duì)其他生產(chǎn)性能影響不顯著。肥豬階段，與空白對(duì)照組相比平均日增重和平均日采食量均顯著提高。周盟等研究發(fā)現(xiàn)，仔豬飼糧中添加復(fù)合菌制劑（植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌及其復(fù)合菌）可顯著降低仔豬腹瀉率[3]；王華等研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加乳菌寶益生菌制劑（乳酸菌、酵母菌）可降低仔豬腹瀉指數(shù)[4]。本研究表明，仔豬階段添加復(fù)合微生物制劑顯著降低仔豬腹瀉率，與上述研究結(jié)果一致，由于斷奶后仔豬處于生長(zhǎng)發(fā)育敏感時(shí)期，消化系統(tǒng)免疫系統(tǒng)等尚未發(fā)育完全，微生物易在仔豬胃腸道內(nèi)定植，增強(qiáng)仔豬腸道功能，減少仔豬腹瀉率。但生產(chǎn)性能，各時(shí)期料重比與平均日增重并未優(yōu)于抗生素組，劉虎傳等研究表明仔豬飼料中添加復(fù)合益生菌粉，可顯著提高斷奶仔豬平均日增重，降低料肉比[5]。劉金陽(yáng)等研究表明，飼料中添加糞腸球菌和枯草芽孢桿菌可顯著提高蘇淮豬料重比[6]，可能是復(fù)合微生物制劑改變飼料適口性，進(jìn)而影響生產(chǎn)性能。

3.2 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬血液生化影響

血液生化指標(biāo)表征機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝情況。堿性磷酸酶為反映成骨細(xì)胞活性、骨生成狀況和鈣、磷代謝重要生化指標(biāo)。年幼動(dòng)物血液堿性磷酸酶主要來(lái)自骨骼，隨動(dòng)物成熟和骨骼成年化，骨骼堿性磷酸酶逐漸減少[7]。本試驗(yàn)仔豬階段血液生化中添加復(fù)合微生物制劑組血液中堿性磷酸酶含量顯著提升，反映該階段仔豬骨骼細(xì)胞活性較高，骨骼發(fā)育旺盛。但目前尚無(wú)研究表明飼料中添加益生菌可促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體骨骼發(fā)育，復(fù)合微生物制劑添加對(duì)仔豬骨骼發(fā)育影響機(jī)理有待研究。

3.3 復(fù)合微生物制劑對(duì)豬免疫能力影響

本試驗(yàn)中，添加復(fù)合微生物制劑組中腸道黏膜分泌型免疫球蛋含量均顯著提高。SIgA為外分泌液中重要抗體，主要由腸道黏膜固有層中IgA漿細(xì)胞分泌，參與粘膜局部免疫，與相應(yīng)病原微生物結(jié)合，組織病原體粘附到細(xì)胞表面，在局部抗感染中發(fā)揮重要作用[8-9]。胡興義等研究發(fā)現(xiàn)，仔豬飼糧中添加干酪乳酸菌、釀酒酵母菌和枯草芽孢桿菌組成復(fù)合益生菌制劑可顯著增加仔豬空腸黏膜SIgA含量[10]。李云峰等研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌可顯著提高仔豬腸道黏膜SIgA含量[11]。本試驗(yàn)中，復(fù)合微生物制劑組腸粘膜中SIgA和IgG顯著高于抗生素組，與以上研究結(jié)果一致，表明添加復(fù)合微生物可提高仔豬免疫能力。

IL-1是一種細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素，由活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，刺激參與免疫反應(yīng)細(xì)胞增殖、分化并提高其功能，在調(diào)節(jié)腸道炎癥時(shí)發(fā)揮重要作用[12-14]。李云峰等研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌添加可顯著促進(jìn)腸道中細(xì)胞因子IL-1表達(dá)[11]。蔣宗勇等研究發(fā)現(xiàn)不同酵母可提高仔豬血清中細(xì)胞因子水平[15]。本試驗(yàn)中，復(fù)合微生物制劑添加顯著提高腸黏膜IL-1含量，與以上研究結(jié)果一致，表明復(fù)合益生菌制劑可刺激細(xì)胞因子分泌。

綜上所述，復(fù)合微生物制劑可提高仔豬免疫能力，降低仔豬腹瀉率，提高豬胴體重，可一定程度上替代抗生素。

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