延安地區(qū)婦女HPV基因分型及臨床相關(guān)研究*

杜偉平，米思蓉，王　麗，張寧梅，呼志西，李芳芹　

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西延安　716000)

近年來臨床觀察發(fā)現(xiàn)中國宮頸癌的發(fā)生有明顯上升和年輕化趨勢(shì)，宮頸病變是育齡女性常見的疾病，廣泛存在于育齡期婦女當(dāng)中，廣義的宮頸病變有炎癥、損傷、畸形、癌前病變及腫瘤等，其中宮頸癌危害最大，已成為僅次于乳腺癌的惡性腫瘤。宮頸癌的發(fā)生經(jīng)歷了一個(gè)漫長的過程，經(jīng)過慢性炎癥、不典型細(xì)胞增生、細(xì)胞內(nèi)瘤變等多個(gè)階段發(fā)展而成。臨床病因?qū)W研究證實(shí)HPV在侵犯人體皮膚與黏膜后引起增殖性乳頭狀瘤狀病變。大量研究已經(jīng)證實(shí)高危型HPV感染是引起宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及宮頸癌的必要條件[1]，選擇合理高效的篩查方法對(duì)早期診斷、有效降低宮頸癌的發(fā)生具有重要的價(jià)值。目前臨床進(jìn)行HPV檢測(cè)的方法包括質(zhì)譜、基因分型、PCR定量等，由于方法學(xué)的差異和檢出效率存在差別，臨床多采用基因分型和PCR定量檢測(cè)[2]。不同人群感染情況差異較大，為了給臨床提供更多的數(shù)據(jù)支持，本研究探討針對(duì)不同人群的篩查手段，對(duì)2 014例延安地區(qū)女性HPV感染情況進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)其基因分型結(jié)果及臨床相關(guān)研究進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)道如下：

1　材料與方法

1.1研究對(duì)象選取2015年6月～2017年6月在延安大學(xué)附屬醫(yī)院體檢科、婦科門診以及住院就診的健康體檢者及患者共2 014例，年齡18～69歲，平均年齡37歲。

1.2試劑與儀器試劑盒：HPV基因分型試劑盒由廣州凱普生物公司提供。主要儀器：PCR擴(kuò)增儀由博日提供，生物安全柜由鑫貝西提供，高速離心機(jī)由湘儀離心機(jī)有限公司提供，干式恒溫器由杭州奧森儀器廠提供，振蕩器由其林貝爾儀器廠提供。

1.3研究方法

1.3.1采樣：采用專用宮頸脫落細(xì)胞采集器進(jìn)行采樣。用生理鹽水沖洗宮頸口，用專用宮頸刷置于宮頸口，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲取足量的上皮細(xì)胞樣本，然后將宮頸刷頭部放入洗脫管中，沿刷柄折痕處折斷，關(guān)蓋后進(jìn)行標(biāo)識(shí)。

1.3.2HPV分型檢測(cè)：進(jìn)行樣本DNA提取后PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行結(jié)果的判讀。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。樣本率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1基因分型特點(diǎn)見表1。HPV高危型中HPV- 16，52，53居于前三位；HPV低危型以HPV- 81，6，44為主。檢出陽性332例，總陽性率為16.48%。

表1 HPV基因分型結(jié)果構(gòu)成比[n(%)]

2.2基因分型感染類型特點(diǎn)2 014例分析標(biāo)本中共檢出陽性標(biāo)本332例，單純高危型感染219例，單純低危型感染74例，混合感染39例，構(gòu)成比分別為65.96%，22.29%和11.75%。

2.3不同年齡段的分布特點(diǎn)見表2。隨年齡增長呈現(xiàn)先增長后下降的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=34.238，P<0.01)。

表2 不同年齡段的受檢者HPV陽性率

2.4不同職業(yè)人群感染特點(diǎn)見表3。HPV陽性檢出率也存在差異，醫(yī)療保障相對(duì)全面和條件好的職業(yè)感染率低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=50.35，P<0.01)。

表3 不同職業(yè)HPV基因分型檢測(cè)陽性率

2.5不同地域人群感染特點(diǎn)見表4。不同地域檢出率也存在差異，反映出經(jīng)濟(jì)水平差異與保健意識(shí)和在醫(yī)療保健中的投入水平也存在差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.084，P<0.01)。

表4 HPV感染情況的區(qū)域性差異

2.6HPV感染性質(zhì)特點(diǎn)見表5。單一感染占比最高，其次是二重感染和三重感染。

表5 HPV多重感染情況

—：表示無數(shù)據(jù)。

3　討論

研究表明HPV感染是引發(fā)宮頸癌的重要致病因子[2]，宮頸癌是目前少有的明確病因的腫瘤。在宮頸癌患者中HPV 檢出率很高，目前臨床進(jìn)行HPV檢測(cè)的方法多樣，包括質(zhì)譜、基因分型、PCR定量等，在健康婦女中，HPV的感染率較低，而在存在宮頸病變的患者當(dāng)中感染率較高，不同地區(qū)報(bào)道的結(jié)果存在差異。高危型HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌患病的關(guān)鍵病因，如能早期對(duì)HPV進(jìn)行檢測(cè)對(duì)宮頸癌的早期防治有非常重要的意義。

本研究顯示，延安地區(qū)婦女HPV總感染率與徐州地區(qū)的20.92%和廣州東莞的28.04%相比感染率低[3，4]，與張曉艷等[5]報(bào)道的延安地區(qū)不同采樣人群HPV陽性率(18.09%)相比相差不大，而同原榮等[6]報(bào)道的延安地區(qū)其他數(shù)據(jù)相差很大，這與臨床檢測(cè)面向的人群有很大的關(guān)系。所有樣本檢出陽性332例，其中單純高危型感染的構(gòu)成比最高，這也表明高危型單獨(dú)進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于宮頸癌的篩查是完全可行的，對(duì)于經(jīng)濟(jì)和條件有限的地區(qū)可以進(jìn)行單純主要高危型的篩查。其中危害最大的HPV- 16型構(gòu)成比最高，這與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。高危型中HPV- 16，52，53居于前三位，這與文獻(xiàn)報(bào)道存在差異。由于不同地區(qū)存在經(jīng)濟(jì)、文化等多因素差異，感染率及基因型別也就存在差異。在HPV低危型中以HPV- 81，6，44為主，與文獻(xiàn)報(bào)道的有差異[7]。隨著年齡的增長高危HPV的感染持續(xù)增加，到達(dá)一定年齡后又開始下降，這與文獻(xiàn)研究相似，文獻(xiàn)有報(bào)道在20～30歲年齡段感染率最高。本研究發(fā)現(xiàn)41～50歲年齡段感染率最高，這與文獻(xiàn)有差異，但與南京地區(qū)數(shù)據(jù)相似[7]。在不同群體中感染率也存在明顯的差異，在干部組當(dāng)中HPV感染率最低，而在農(nóng)民工群體當(dāng)中感染率最高，這也表明衛(wèi)生保健水平、人員認(rèn)知及文化水平素養(yǎng)的高低與疾病的發(fā)病有一定的相關(guān)性。在分地域的研究中發(fā)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)文化和人員流動(dòng)性等多種因素的存在導(dǎo)致感染率存在明顯差異，如在相對(duì)經(jīng)濟(jì)多元化、人口流動(dòng)性強(qiáng)的寶塔區(qū)相對(duì)而言感染率最高，與其他區(qū)縣比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究顯示多重感染主要為二重感染，以高危型和混合型多見[8]，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致，這也提示進(jìn)行HPV檢測(cè)時(shí)單純檢測(cè)可能導(dǎo)致漏檢，或者無法明確型別的問題，應(yīng)該進(jìn)行分型檢測(cè)，提高檢出率的同時(shí)提高正確度，保證臨床獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

廣州凱普HPV檢測(cè)試劑為陜西省普查專用試劑，科室儀器設(shè)備都是經(jīng)過國家認(rèn)證的儀器，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人員經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，并獲得PCR證書。此方法為HPV篩查的有效方法。宮頸癌患者從感染HPV到宮頸癌的潛伏期時(shí)間很長。所以實(shí)現(xiàn)HPV早期篩查對(duì)宮頸癌有重要意義，對(duì)早期診斷、規(guī)范治療以及預(yù)測(cè)病變進(jìn)展等具有重要價(jià)值[9]。充分掌握HPV感染情況及亞型分布，對(duì)發(fā)現(xiàn)HPV感染的高危人群進(jìn)行HPV感染的控制和有效治療有重要意義，進(jìn)而對(duì)降低宮頸癌的發(fā)生率產(chǎn)生積極的影響。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊二姣，潘琪，江虹，等．兩種高危型HPV檢測(cè)技術(shù)診斷宮頸病變的臨床價(jià)值比較[J]．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，15(4)：653- 655，695．

Yang EJ，Pan Q，Jiang H，et al．Comparison of the clinical significances of two kinds of high- risk type HPV detection technology in the diagnosis of cervical lesions[J]．Progress in Modern Biomedicine，2015，15(4)：653- 655，695．

[2]溫旺榮，李莉．HPV基因檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38(8)：514- 516．

Wen WR，Li L．Progresses in HPV gene detection technology[J]．Chin J Lab Med，2015，38(8)：514- 516．

[3]任玲，石啟明．徐州地區(qū)39 997例女性生殖道人乳頭瘤病毒檢測(cè)結(jié)果分析[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)．2015，42(11)：1996- 1998，2002．

Ren L，Shi QM．Analysis of detection of human papilloma virus in 39 997 cases in Xuzhou[J]．Modern Preventive Medicine，2015，42(11)：1996- 1998，2002．

[4]張七二，鐘錦開，蒲榮，等．東莞地區(qū)2 960例女性宮頸脫落細(xì)胞HPV基因分型結(jié)果分析[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33(3)：374- 376．

Zhang QE，Zhong JK，Pu R．et al．Analysis 2 960 cases of female cervical exfoliated cells HPV genotyping results in Dongguan region[J]．Experimental and Laboratory Medicine，2015，33(3)：374- 376．

[5]張曉艷，曹云，薛樂，等．陜西延安地區(qū)婦女人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)及人群分布特征[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13(5)：641- 643．

Zhang XY，Cao Y，Xue L，et al．Detection of human papillomavirus genotype and its population distribution characteristics in Yan’an area of Shaanxi[J]．Lab Med Clin，2016，13(5)：641- 643．

[6]原榮，李軍，南星，等．陜西省安康和延安兩地區(qū)婦女HPV感染及型別分布對(duì)比研究[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，32(2)：64- 66．

Yuan R，Li J，Nan X，et al．Comparative study on HPV infection and hypotype distribution between Ankang and Yan’an area of Shaanxi province[J]．J Mod Lab Med，2017，32(2)：64- 66．

[7]王麗君，吳江平，成建，等．2 686例已婚女性宮頸細(xì)胞中人乳頭瘤病毒基因型分析[J]．現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2014，23(9)：728- 731．

Wang LJ，Wu JP，Cheng J，et al．Genotype analysis for 2 686 cases of married women in cervical cells papilloma virus[J]．Progress in Obstetrics and Gynecology，2014，23(9)：728- 731．

[8]才仁卓瑪，張建青，魏春梅．青海省26 622名臨床就診婦女宮頸人乳頭瘤病毒感染情況及亞型分布[J]．中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2013，21(12)：812- 816．

Cairen ZM，Zhang JQ，Wei CM．Human papillomavirus infection in 26 622 women in Qinghai[J]．Chinese Journal of Family Planning，2013,21(12)：812- 816．

[9]Wheeler CM，Hunt WC，Cuzick J，et al．The influence of type- specific human papillomavirus infections on the detection of cervical precancer and cancer：A population based study of opportunistic cervical screening in the United States[J]．International Journal of Cancer,2014，135(3)：624- 634．