不同基因型HCV感染患者血清Lp(a)水平檢測(cè)分析*

周曉艷，李　越，何　謙，姬　婧，劉佳麗，薛　麗，楊銳華

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安　710004)

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)屬人類黃病毒屬，是單股正鏈RNA病毒。HCV感染使肝細(xì)胞持續(xù)性損傷，肝臟代償功能紊亂，同時(shí)HCV感染與肝脂肪變性、肝硬化和肝癌等密切相關(guān)，在全球范圍內(nèi)嚴(yán)重危害人類的健康。肝臟損傷嚴(yán)重影響脂代謝[1]，大量研究表明脂代謝異常在心血管疾病以及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中起到了重要的作用，脂蛋白在HCV侵入人類肝細(xì)胞的過(guò)程中起到促進(jìn)作用[2]，故HCV感染可以間接的促進(jìn)心血管疾病。脂蛋白a[lipoprotein(a)，Lp(a)]是脂蛋白家族中一種特殊而又獨(dú)立的脂蛋白，同樣與冠心病及動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，具體作用機(jī)制報(bào)道較少。在近年來(lái)，有學(xué)者觀察到急慢性HBV感染患者血清Lp(a)水平均降低[3]，并且在急性肝炎恢復(fù)期又升高。目前對(duì)于HCV感染患者多采用干擾素治療，但Lp(a)對(duì)藥物作用的不敏感使其血清水平難以降低，并且不同基因型對(duì)其治療效果迥異。故本研究以Lp(a)作為治療HCV感染的靶點(diǎn)，首次研究各基因型HCV感染患者與血清Lp(a)水平的關(guān)系，擬對(duì)HCV不同基因型感染患者的治療及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

1　材料與方法

1.1臨床資料105例丙型肝炎患者(實(shí)驗(yàn)組)來(lái)源于2016年6月～2017年6月就診于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院的患者(根據(jù)2000年《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)[4])，男性59例，女性46例，平均年齡43.4±19.8歲。對(duì)照組為同期體檢健康正常者30例，男性17例，女性13例，平均年齡40.6±12.7歲。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)心、腦、腎等重要器官疾病。血清采集前所有病例均未接受干擾素等治療，實(shí)驗(yàn)中所有對(duì)象均簽訂知情同意書。

1.2方法

1.2.1HCV基因分型：采用PCR- 反向點(diǎn)雜交，對(duì)105例HCV感染患者進(jìn)行基因分型檢測(cè)，HCV基因分型檢測(cè)試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。

1.2.2Lp(a)檢測(cè)：真空采血管法抽取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者清晨空腹靜脈血3 ml，離心后吸取上層血清，上機(jī)進(jìn)行Lp(a)檢測(cè)并記錄檢測(cè)值。分析儀器為貝克曼(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)AU5800全自動(dòng)生化分析儀，脂蛋白a檢測(cè)試劑盒由英國(guó)朗道公司(原理：免疫比濁法)提供。

2　結(jié)果

2.1HCV感染患者基因分型HCV感染患者基因分型：1b基因型31例，2a基因型30例，3a基因型19例，3b基因型12例，6a基因型13例。兩組研究對(duì)象在性別構(gòu)成比和年齡間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.731 7，P=0.465 7)。

2.2HCV感染實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組血清中Lp(a)濃度比較HCV感染實(shí)驗(yàn)組(10.87±6.21 mg/L)與健康對(duì)照組(21.51±12.99 mg/L)血清中Lp(a)濃度相比較顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.281，P<0.000 1)。

2.3HCV各基因型血清中Lp(a)濃度與對(duì)照組比較及各基因型間Lp(a)濃度比較見表1。各基因型HCV感染患者血清中Lp(a)濃度與健康對(duì)照組濃度均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.888～4.355，均P<0.05)，5組基因型間Lp(a)濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.091，P=0.365 4)。

表1 各基因型HCV感染患者與正常對(duì)照組

3　討論

丙型肝炎病毒可經(jīng)輸血、靜脈注射毒品、母嬰、性接觸等多種途徑傳播，其基因組為單股正鏈RNA病毒且易變異，HCV基因型及亞型在世界不同地區(qū)存在很大差異。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全球有1.7億人感染HCV，其中我國(guó)約占40%。HCV感染遷延原因復(fù)雜，包括病毒生物學(xué)復(fù)雜性和宿主免疫功能差異性等多個(gè)方面，病毒往往難以被機(jī)體免疫有效清除，對(duì)肝臟損傷嚴(yán)重且易慢性化。根據(jù)Simmonds分型[5]，將HCV基因型分為1a，1b，2a，2b，3a，3b，4a，5a，6a共9型。HCV不同基因型感染引起的臨床過(guò)程和干擾素治療反應(yīng)表現(xiàn)不同，Simmonds 2a型感染臨床癥狀較重，有引起嚴(yán)重肝病傾向，但干擾素治療效果好，1b型感染對(duì)干擾素治療不敏感效果差。肝硬化患者中每年有1%～4%發(fā)展成為肝細(xì)胞癌癥，因此丙型肝炎的預(yù)防與治療正日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。

肝臟在人體能量代謝中發(fā)揮重要的作用，是脂類、脂蛋白(HDL，VLDL和LDL)以及載脂蛋白(ApoA，B，C，D和E)及相關(guān)酶類合成和代謝的中心，一切與脂類相關(guān)的活動(dòng)包括合成、釋放、轉(zhuǎn)化和分解，均與肝臟功能密切相關(guān)，HCV感染對(duì)肝臟脂代謝影響極大。脂蛋白Lp(a)作為脂蛋白中一種獨(dú)特的脂蛋白，其核心部分為中性脂質(zhì)和Apo B- 100分子，外圍包繞著親水性的Apo(a)，二者以二硫鍵共價(jià)連接[2，6]。最初在肝臟合成，分泌入血完成運(yùn)輸功能后最終又在肝臟降解，故Lp(a)高低水平可以反映肝臟的合成功能。其濃度高低由遺傳因素控制，不同個(gè)體間的Lp(a)水平可相差100倍以上。由于HCV與Lp(a)在形態(tài)學(xué)與生理學(xué)上的相似性，使得HCV感染與Lp(a)緊密聯(lián)系起來(lái)，并且已有相關(guān)研究指出，HCV是通過(guò)脂蛋白(LDL，VLDL，Lp(a))或者載脂蛋白感染肝細(xì)胞[2]。Lp(a)結(jié)構(gòu)又與LDL相似，使得HCV感染通過(guò)影響脂類代謝進(jìn)而與心血管疾病緊密聯(lián)系在一起[7]。Lp(a)還是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，與高血壓緊密相關(guān)。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[8]，不同程度的肝臟損傷，將導(dǎo)致血清Lp(a)的濃度降低，在本研究中亦發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比，HCV感染所致的肝臟損傷亦導(dǎo)致血清Lp(a)水平的降低(t=6.281，P<0.000 1)，與Orito等[3]人的研究結(jié)果一致，并且各基因型與對(duì)照組相比均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。何樹光等[9]通過(guò)不同基因型HBV感染患者血清Lp(a)檢測(cè)及其臨床意義分析發(fā)現(xiàn)，A，B，C，D四個(gè)基因型HBV感染患者的Lp(a)血清中表達(dá)水平與乙型肝炎的基因型相關(guān)，而且不同基因型HBV感染患者的最終治療轉(zhuǎn)歸率和治愈率不同，在HCV感染中還未見不同基因型HCV感染患者Lp(a)的相關(guān)臨床報(bào)道。并且不同的HCV基因分型感染對(duì)于干擾素的治療效果不佳，我們期待以Lp(a)作為靶標(biāo)，初步探索針對(duì)不同基因型HCV感染的個(gè)性化治療方案，從而針對(duì)性地應(yīng)用抗病毒藥物，為臨床制定合理的治療方案，同時(shí)預(yù)測(cè)丙型肝炎的轉(zhuǎn)歸和治愈率。分析結(jié)果表明，五個(gè)基因型HCV感染患者的Lp(a)均低于健康對(duì)照組(均P<0.05)，HCV可以降低Lp(a)的血清水平，但是HCV不同基因型間Lp(a)水平無(wú)差異(F=1.091，P=0.365 4)。

綜上所述，HCV感染可以導(dǎo)致患者血清Lp(a)水平的降低，與已有研究結(jié)果一致，但不同基因型HCV感染患者血清Lp(a)表達(dá)水平與丙型肝炎的基因分型不相關(guān)。分析原因也可能與檢測(cè)樣本數(shù)過(guò)少及不同型HCV在西安地區(qū)和人群分布特征有關(guān)，下一步我們將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本例數(shù)并結(jié)合西安地區(qū)HCV基因分型對(duì)此進(jìn)行更深入地研究，進(jìn)一步確定血清Lp(a)和不同HCV基因型的關(guān)系，進(jìn)而為不同HCV基因型的個(gè)體化治療提供強(qiáng)有力的依據(jù)。

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