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    木瓜蛋白酶用于選擇性去除齲壞組織的實(shí)驗(yàn)研究

    2018-03-27 05:50:33
    精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志 2018年1期
    關(guān)鍵詞:齲壞掃描電鏡牙本質(zhì)

    (1 南通市口腔醫(yī)院,江蘇 南通 226001; 2 南京醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院; 3 南通大學(xué)附屬醫(yī)院)

    齲病是導(dǎo)致牙體硬組織進(jìn)行性破壞的一種口腔常見病,臨床表現(xiàn)為牙齒齲壞組織的形成[1-3]。第四次全國口腔健康流行病學(xué)部分調(diào)查結(jié)果顯示,我國兒童患齲率呈上升趨勢,12歲兒童恒牙患齲率約為34.5%。雖然居民口腔保健水平在不斷提高,但齲病仍然是影響居民健康的普遍疾病之一[4]。在過去的傳統(tǒng)齲病治療中使用的非選擇性去齲、預(yù)防性擴(kuò)展等觀念已經(jīng)逐漸被選擇性去齲所替代[5-7]。陳智等[8]根據(jù)硬度,將齲壞牙本質(zhì)分為軟化牙本質(zhì)(soft dentin)、皮革化牙本質(zhì)(1eathery dentin)、韌化牙本質(zhì)(firm dentin)和硬化牙本質(zhì)(hard dentin);并詳細(xì)介紹了關(guān)于齲壞組織去除的新理念:已脫礦但結(jié)構(gòu)完整的牙本質(zhì)可以再礦化,應(yīng)予以保留,由于粘接修復(fù)技術(shù)的使用,故無需過多去除牙齒硬組織;去齲時(shí),窩洞側(cè)壁應(yīng)保留硬化牙本質(zhì),髓壁應(yīng)保留韌化牙本質(zhì),近髓處可保留軟化牙本質(zhì)防止露髓。

    目前,去除齲壞組織多采用渦輪機(jī)機(jī)械去齲和化學(xué)機(jī)械方法去齲[9-11]。與前者相比,結(jié)合齲齒指示劑的使用,化學(xué)機(jī)械法去齲更精準(zhǔn)、微創(chuàng)、無痛。最新研究發(fā)現(xiàn),齲壞牙本質(zhì)中的膠原纖維斷裂破壞,木瓜蛋白酶可使破壞的膠原纖維水解,進(jìn)而軟化齲壞組織,使用手工器械即可刮除[12]。因此,本研究對不同濃度的木瓜蛋白酶去齲能力進(jìn)行了檢測,并通過掃描電鏡觀察了慢速球鉆去齲和木瓜蛋白酶去齲后牙本質(zhì)表面的不同情況?,F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料和設(shè)備

    離體牙(江蘇省口腔醫(yī)院頜面外科),木瓜蛋白酶(都萊生物公司),殼聚糖(美國HARVEY),齲齒指示劑(美國皓齒公司Sable Seek),低速切割機(jī)(美國標(biāo)樂公司IsoMet),標(biāo)準(zhǔn)型磁力攪拌器(北京大龍公司MS-S),掃描電鏡(美國FEI)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1木瓜蛋白酶凝膠的制備 配制40 g/L殼聚糖凝膠后,在上述凝膠中加入不同量的木瓜蛋白酶后充分?jǐn)嚢?,分別制成10、30、50、100 g/L的木瓜蛋白酶凝膠,4 ℃避光保存。

    1.2.2實(shí)驗(yàn)牙的選擇及分組處理 在江蘇省口腔醫(yī)院頜面外科門診,收集50例因牙周炎、牙體大面積缺損或阻生而拔除的有牙本質(zhì)齲壞的前磨牙或磨牙(已獲患者知情同意),且均為活髓牙。新鮮離體牙清潔干凈牙周組織后放入提前預(yù)冷的無菌雙蒸水中,4 ℃保存并盡快用于實(shí)驗(yàn)。將50例牙本質(zhì)齲離體牙隨機(jī)分成40 g/L殼聚糖凝膠組、10 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、30 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、50 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、100 g/L木瓜蛋白酶凝膠組5組,每組10例??焖贉u輪機(jī)去除牙釉質(zhì)齲后,用低速切割機(jī)沿著牙本質(zhì)齲壞部分的中心將每組牙齒縱切為兩半,一半為對照組,使用慢速球鉆去齲;另一半為實(shí)驗(yàn)組,使用不同濃度的木瓜蛋白酶凝膠去齲。

    1.2.3慢速球鉆去齲 使用慢速球鉆去除軟化牙本質(zhì)、皮革化牙本質(zhì)、韌化牙本質(zhì),保留硬化牙本質(zhì)。

    1.2.4木瓜蛋白酶凝膠去齲 將不同濃度的木瓜蛋白酶凝膠分別注入齲洞內(nèi),凝膠與齲壞牙本質(zhì)充分作用30 s,使齲壞牙本質(zhì)軟化,并使用小刮匙用很小的力量即可輕輕刮除,反復(fù)注入凝膠3~4次,直至木瓜蛋白酶凝膠不再使牙本質(zhì)軟化為止,最后通過所用的力度評估剩余牙本質(zhì)的硬度。軟化牙本質(zhì):在牙科器械加壓時(shí)發(fā)生變形,使用尖銳的手用挖器用很小的力量即可刮除軟化牙本質(zhì)。皮革化牙本質(zhì):在牙科器械加壓時(shí)不變形,無需太大力量即可被去除。韌化牙本質(zhì):在手用挖器刮除時(shí)有抵抗力,需要一定的力量才能去除。硬化牙本質(zhì):在牙科器械探查時(shí)需要加壓,僅鋒利器械或牙鉆可以去除。探針加壓劃過牙本質(zhì)時(shí)可以聽到刺耳的刮擦音。

    1.2.5掃描電鏡樣本的制作與觀察 對照組和實(shí)驗(yàn)組離體牙經(jīng)去齲處理后干燥24 h,將標(biāo)本用導(dǎo)電膠固定于樣品臺(tái)上,真空噴金后,進(jìn)行掃描電鏡觀察、攝片。

    2 結(jié) 果

    2.1 不同濃度木瓜蛋白酶軟化去除牙本質(zhì)齲后剩余牙本質(zhì)硬度的比較

    使用小刮匙輕輕刮除軟化牙本質(zhì)后,40 g/L殼聚糖凝膠和10 g/L木瓜蛋白酶凝膠無法使韌化牙本質(zhì)齲繼續(xù)軟化(圖1A、B);30 g/L木瓜蛋白酶凝膠作用于韌化牙本質(zhì)后可使其軟化,使用小刮匙輕輕刮除被軟化的牙本質(zhì)后,牙本質(zhì)硬度介于韌化牙本質(zhì)和硬化牙本質(zhì)之間(圖1C);50 g/L木瓜蛋白酶凝膠作用于牙本質(zhì)齲,使用小刮匙輕輕刮除被軟化的牙本質(zhì)后,余牙本質(zhì)層為硬化牙本質(zhì)(圖1D);100 g/L木瓜蛋白酶凝膠作用于牙本質(zhì)齲,使用小刮匙輕輕刮除被軟化的牙本質(zhì)后,剩余牙本質(zhì)層也為硬化牙本質(zhì)(圖1E)。各組剩余牙本質(zhì)使用齲齒指示劑染色后發(fā)現(xiàn),40 g/L殼聚糖凝膠和10 g/L木瓜蛋白酶凝膠組剩余牙本質(zhì)被齲齒指示劑著色;30 g/L木瓜蛋白酶凝膠組剩余牙本質(zhì)部分著色;而50 g/L和100 g/L木瓜蛋白酶凝膠組剩余牙本質(zhì)不著色。

    2.2 掃描電鏡下觀察

    掃描電鏡下,慢速球鉆去齲和50 g/L木瓜蛋白酶凝膠化學(xué)機(jī)械去齲后,慢速球鉆組牙本質(zhì)表面較平坦(圖2A),牙本質(zhì)玷污層較明顯(圖2C);木瓜蛋白酶凝膠組牙本質(zhì)表面凹凸不平(圖2B),牙本質(zhì)玷污層較少(圖2D)。

    3 討 論

    長期以來,去除齲壞組織常規(guī)采用單純的機(jī)械方法,即使用高速或低速渦輪機(jī)機(jī)械磨除牙體組織,并預(yù)備出一定的固位形和抗力形[13-14]。這種方法雖然能夠快速地去除齲壞組織,但磨牙時(shí)不能準(zhǔn)確區(qū)分齲壞與健康的組織,常常過多地磨除健康牙體組織,并且容易對牙髓組織造成損傷[15]。磨牙時(shí)還會(huì)出現(xiàn)令病人恐懼的疼痛感。而化學(xué)機(jī)械方法去齲在一定程度上能夠避免單純機(jī)械磨除法產(chǎn)生的上述問題[16-18]?;瘜W(xué)機(jī)械法通過化學(xué)材料作用于齲壞組織后,選擇性地軟化齲壞的牙本質(zhì),利用比較銳利的手工牙科器械就可將軟化的齲壞牙本質(zhì)刮除干凈,并且不破壞健康的牙體組織,它是一種精準(zhǔn)的、微創(chuàng)的去除齲壞組織方式,代表了口腔醫(yī)學(xué)精準(zhǔn)治療的未來發(fā)展的趨勢[19-21]。

    本研究結(jié)果表明,50 g/L和100 g/L濃度的木瓜蛋白酶可以軟化韌化牙本質(zhì),而對硬化牙本質(zhì)無顯著影響。對于牙本質(zhì)淺層齲、中層齲,可以使用含有50 g/L的木瓜蛋白酶去除齲壞至硬化牙本質(zhì)層,有效防止過多的破壞健康牙體組織。而對于近髓的牙本質(zhì)深齲,應(yīng)予以保留近髓處的軟化牙本質(zhì),通過氫氧化鈣間接蓋髓術(shù)使牙本質(zhì)再礦化,盡可能地保護(hù)牙髓組織,避免露髓的發(fā)生[22]。研究表明,軟化牙本質(zhì)冠方的嚴(yán)密充填可以有效阻止齲損的進(jìn)行性發(fā)展,這可能與粘結(jié)材料嚴(yán)密充填冠方的窩洞后,控制了剩余軟化牙本質(zhì)的生物膜和齲活性有關(guān),使齲損不再進(jìn)一步發(fā)展,軟化牙本質(zhì)得以再礦化[23]。

    A、B、C、D、E分別為40 g/L殼聚糖凝膠組、10 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、30 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、50 g/L木瓜蛋白酶凝膠組、100 g/L木瓜蛋白酶凝膠組。

    圖1不同濃度木瓜蛋白酶去齲后牙本質(zhì)著色程度

    A、B、C、D分別為慢速球鉆組(放大1 000倍)、50 g/L木瓜蛋白酶凝膠組(放大1 000倍)、慢速球鉆組(放大2 000倍)、50 g/L木瓜蛋白酶凝膠組(放大2 000倍)。

    圖2恒牙去齲后牙本質(zhì)表面形態(tài)

    本研究掃描電鏡結(jié)果表明,木瓜蛋白酶去齲后,牙本質(zhì)表面凹凸不平。粗糙的表面加大了粘結(jié)面積,使粘結(jié)劑、樹脂與牙面間形成更加牢固的結(jié)合,這些情況更有利于窩洞側(cè)壁的粘結(jié)修復(fù),使充填更加嚴(yán)密[24]。本研究還發(fā)現(xiàn),經(jīng)木瓜蛋白酶處理后的牙本質(zhì)表面玷污層較少。眾多研究表明,去除玷污層后有利于增加粘結(jié)強(qiáng)度。但也有研究認(rèn)為,隨著粘結(jié)技術(shù)的發(fā)現(xiàn),玷污層不會(huì)對樹脂粘結(jié)造成顯著影響[25-27]。

    綜上所述,木瓜蛋白酶能夠選擇性地去除齲壞牙本質(zhì),對硬化牙本質(zhì)無顯著影響,能夠最大限度地保存健康牙體組織,可以成為一種精準(zhǔn)、微創(chuàng)、安全無痛的去齲方式。

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