定性糞檢寄生蟲的幾種方法

張 穎，金美花，杜玉玲

（ 吉林省延邊州動物疫病預(yù)防控制中心，吉林 延邊 133002）

定性檢查就是對研究對象進行“本質(zhì)”方面的檢查，即確定是什么，而不注重量的多少。很多方法可以診斷出動物患何種或哪些寄生蟲病。

1 直接涂片法

直接涂片法是將少量糞便搗碎涂布于1滴生理鹽水中，該方法簡單、快速。門診檢查時，許多小動物從業(yè)者通常將黏附在直腸溫度計上的糞便直接涂在載玻片上，并加蓋玻片以提高光學(xué)效果、抑制液體流動并防止沾污顯微鏡的物鏡。利用鹽水（而不是水）是為了防止原蟲滋養(yǎng)體的溶解，因為當(dāng)滲透壓改變時蟲體容易變形。由于制成的混懸液必須稀薄到足以允許顯微觀察的程度，故只能檢查少許糞便，該方法的唯一缺點就是檢出率低。陰性結(jié)果不可靠，但陽性結(jié)果與其他更有效的濃集技術(shù)獲得的結(jié)果一致。實際上，當(dāng)處理脆弱的蟲體如線蟲幼蟲和原蟲滋養(yǎng)體時，其會受漂浮液的影響而變形或被破壞，或者相對密度大的蟲卵在漂浮液中無法漂浮，在此情況下涂片法比濃集法更具優(yōu)勢。新鮮糞便的直接涂片可以觀察到阿米巴蟲、鞭毛蟲、線蟲幼蟲等蟲體的運動。因此，濃集技術(shù)應(yīng)該是作為補充而不是替代直接涂片法，但在實際操作中，通常采用其中一種方法作為常規(guī)的檢測方法。

2 糞便中寄生蟲抗原的檢測

利用各種抗原捕獲免疫試驗來檢測糞便中的抗原（糞抗原）越來越普遍。寄生蟲糞抗原的檢測，特別是賈第蟲和隱孢子蟲的檢測方法已存在較長時間了。目前，常規(guī)的檢測犬、貓糞便中賈第蟲囊壁抗原的方法是愛德士SNAP Giadia Test，許多實驗室利用類似的平板試驗對送檢樣品進行檢測。

為了將危險的細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲蟲卵與豆?fàn)顜Ы{蟲及其他帶科絳蟲蟲卵進行區(qū)分，則需要研制檢測這些寄生蟲糞抗原的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。該方法的建立使某些實驗室檢測寄生蟲抗原成為可能，有可能區(qū)分細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲，并與其他帶科絳蟲種類和其他腸道寄生蟲及病原體區(qū)分開來。從而也表明這類抗原試驗可用于犬棘球絳蟲病實驗性感染的追蹤和療效的監(jiān)測。目前，該方法已用于犬群中細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲的檢測，以及此類疾病控制效果的監(jiān)測。

關(guān)于通過糞抗原診斷牛毛圓線蟲病的有效性，目前正在進行研究。用初篩?；蚱渌雌c獸的藥敏試驗已證實糞抗原具有較高的實用性。糞抗原捕獲ELISA用于牛實驗性感染奧氏奧斯特線蟲的結(jié)果非常理想，在感染過程中糞抗原水平升高。遺憾的是在感染早期，ELISA值與剖檢查到的蟲體數(shù)量并不完全一致，但有某種程度的相關(guān)性。近期研究發(fā)現(xiàn)用ELISA檢測綿羊寄生的環(huán)紋背板線蟲也取得了預(yù)期的效果，且糞便樣品熱處理可使交叉反應(yīng)減至最小。完全有理由相信糞抗原ELISA檢測技術(shù)的應(yīng)用將越來越普遍，正如檢測賈第蟲一樣成為一種常規(guī)方法。

3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）

在幾種原蟲檢測中，選擇不同的遺傳標(biāo)記檢測糞便中不同寄生蟲已成為常規(guī)技術(shù)。其中，應(yīng)用最為普遍的是目前檢測賈第蟲和隱孢子蟲的多種技術(shù)。這些技術(shù)的迅速發(fā)展得益于對不同水源性人獸共患病中寄生蟲的溯源。最近，不同毛圓線蟲的檢測工作已開始進行。一旦這些工作與定量試驗相結(jié)合，采用糞便中提取的DNA，就可以確定反芻動物體內(nèi)不同蟲體的相對蟲荷。反向線點雜交也于最近用于馬圓線蟲的鑒定，如果該方法能應(yīng)用于宿主糞便以及對其各自寄生蠕蟲的檢測，將會成為多數(shù)家畜感染診斷的一個強有力的工具。

4 蟲卵和包囊的漂浮濃集

所有的漂浮技術(shù)均是利用寄生蟲與相關(guān)食物殘渣之間浮力的差異。如果將糞便混于水中，蟲卵和糞渣將沉淀下來，這樣便可以去除上清液中的脂肪以及溶解的色素。然后將此沉淀物重懸于密度介于蟲卵和碎糞渣之間的溶液中，蟲卵將浮于上層而碎糞渣將沉于下層?；谄≡淼募夹g(shù)可以有效用于檢測線蟲、絳蟲卵和一些原蟲包囊，但是不能用于檢測某些吸蟲卵，且可使原蟲滋養(yǎng)體和某些線蟲幼蟲變形并使原蟲包囊難以辨別。硫酸鋅（相對密度1.18）對于漂浮原蟲包囊和線蟲幼蟲來說優(yōu)于蔗糖，原因是硫酸鋅使包囊和幼蟲皺縮變形的速度比蔗糖慢。

糞便攪勻并不意味著就能得到精確的結(jié)果。重視其基本原理要比實際操作步驟更為重要。重力可以代替離心力，但由于力量很弱，因此需要較長時間。許多商業(yè)化生產(chǎn)的一次性糞便分析試劑盒便是基于重力原理而設(shè)計的，也獲得了滿意的結(jié)果。如果用硝酸鈉溶液（相對密度1.20）作為漂浮溶液，制作的玻片樣本10 min內(nèi)即可檢查完畢。而飽和蔗糖溶液需要在15～20 min才能檢查完畢，原因是蔗糖黏性較大。但使用硝酸鈉的一個缺點是載玻片必須及時檢測，否則可能由于滲透壓破壞蟲體形態(tài)而使蟲體很難辨認(rèn)，或者由于硝酸鈉的結(jié)晶可能使顯微鏡視野模糊不清。