豬藍(lán)耳病弱毒苗對(duì)豬的免疫效果分析

李娟

（榮縣樂(lè)德鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，四川自貢643100）

豬藍(lán)耳?。≒RRS）屬于一種高度接觸性的傳染性，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株所引起的。目前，尚無(wú)特效藥能徹底治愈此病，主要以預(yù)防為主。該病主要感染妊娠母豬與30日齡內(nèi)的仔豬，可導(dǎo)致母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、早產(chǎn)等問(wèn)題，可導(dǎo)致仔豬呼吸困難，甚至死亡。據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，仔豬發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率不低于40%，母豬流產(chǎn)率大于35%[1]。生長(zhǎng)豬與育肥豬雖然病情較為緩和，但死亡率仍較高。可見(jiàn)，PRRS對(duì)養(yǎng)豬業(yè)會(huì)造成巨大的損失。近年來(lái)國(guó)家相關(guān)部門正致力于推廣高致病性豬藍(lán)耳病疫苗預(yù)防PRRS，雖然學(xué)術(shù)界與養(yǎng)豬業(yè)對(duì)使用疫苗預(yù)防存在不少爭(zhēng)議，但是PRRS疫苗對(duì)控制病情仍是主要措施之一?；诖?，本次以某豬場(chǎng)90頭仔豬為研究對(duì)象，分為三組，觀察豬藍(lán)耳病弱毒疫苗的免疫效果，以期為防控PRRS提供一些參考資料。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)耗材

本次試驗(yàn)所使用的檢測(cè)試劑為美國(guó)愛(ài)德士生物有限公司制造的豬藍(lán)耳病病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、一次性采血器等。PRRS滅活疫苗 （CH-1R）由哈爾濱維科生物有限公司生產(chǎn)，PRRS弱毒疫苗（R98株）由南農(nóng)高科技股份有限公司制造。

1.2 試驗(yàn)對(duì)象

從大屋村許君澤養(yǎng)豬場(chǎng)挑選90頭健康仔豬作為研究對(duì)象，日齡均為50d左右，仔豬體質(zhì)量、體形與批次等基本一致，無(wú)差異，且均未接種過(guò)關(guān)于豬藍(lán)耳病的疫苗。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)分組

將90頭仔豬按隨機(jī)分組法分為A組、B組、對(duì)照組，各30頭。把三個(gè)豬群分別安排在相鄰的圈舍中，從左到右，依次為A組、對(duì)照組、B組。對(duì)比三組仔豬在體質(zhì)量、體形、日齡等情況，基本相同（P＞0.05），差異無(wú)顯著性，有可比性。

2.2 免疫方法

對(duì)照組仔豬從頸部肌肉注射適量生理鹽水，作對(duì)照，劑量為每頭3ml。A組接種高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗，從頸部肌肉注射，劑量為每頭1.5頭份。B組接種高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗，接種方法與劑量參照A組。

2.3 血清樣品

把試驗(yàn)豬全部編號(hào)，從1號(hào)～90號(hào)，便于觀察記錄。在免疫前與免疫后28d、60d、90d分別于仔豬前腔抽取靜脈血，將血清分離出來(lái)，放置在-20℃的冰箱內(nèi)。隨后，可分批對(duì)這些血清進(jìn)行PRRS抗體檢測(cè)。

2.4 PRRS檢測(cè)方法

將待檢測(cè)的血清樣品先進(jìn)行40倍稀釋處理，然后取100μL稀釋好的血清樣品，將其加入酶標(biāo)版反應(yīng)孔，再將兩孔陰陽(yáng)性對(duì)照血清加入其中，用量為100μL。將其放置在室溫下0.5h，再用洗滌劑清洗3～5次。待孔內(nèi)液體基本沒(méi)有后，在濾紙上拍干。之后在每個(gè)孔內(nèi)加入TMP溶液100μL，15min后加入等量的終止液，并分析處理得到的數(shù)據(jù)。

表2 對(duì)比三組PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果 [n（%）]

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次通過(guò)SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包完成數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用t進(jìn)行檢驗(yàn)，并用（±s）表示；計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，用百分比表示。若P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果分析

3.1 對(duì)比三組免疫后血清抗體水平S/P值

試驗(yàn)結(jié)果顯示，A組免疫后28d、60d時(shí)，S/P值均大于2.0，待免疫90d時(shí)，S/P值雖然有所下滑，但仍大于1.1，表示抗體水平較好。B組免疫后28d與60d時(shí)的S/P值均維持在低水平，不到0.4。對(duì)比兩組28d與60dS/P值水平，P＜0.05，組間差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組免疫90d后，S/P值迅速上升，約為 （1.8±0.7），與A組水平無(wú)明顯差異（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組給予生理鹽水，未接受任何高致病性豬藍(lán)耳病疫苗免疫，在28d后S/P值低于 0.4，而在免疫 60d時(shí)，S/P值約為（1.6±0.5），且保持繼續(xù)增高趨勢(shì)，在免疫90d時(shí)，該組S/P值仍保持較高水平（見(jiàn)表1）。

3.2 對(duì)比三組PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)表2可知，A組在免疫60d、90d時(shí)，PRRS抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均為100%。B組在免疫28d后只有三分之一為陽(yáng)性，大多數(shù)PRRS抗體為陰性；待免疫90d時(shí)，大多數(shù)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，陽(yáng)性檢測(cè)了高達(dá)96.7%。對(duì)照組在免疫28d時(shí)，全部仔豬PRRS抗體檢測(cè)均是陰性，在免疫90d時(shí)大約93.3%的仔豬檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性?？梢?jiàn)B組與對(duì)照組抗體檢測(cè)結(jié)果相當(dāng)（P＞0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 對(duì)比免疫副反應(yīng)

接種疫苗后A組仔豬無(wú)1例出現(xiàn)明顯的副反應(yīng)，B組仔豬中有一部分出現(xiàn)副反應(yīng)，表現(xiàn)為食欲減退、體溫增加、精神沉郁。不過(guò)，上述反應(yīng)很快就消失，仔豬全部恢復(fù)正常。

4 討論

本次試驗(yàn)顯示，PRRS弱毒疫苗的免疫效果更佳，明顯好于滅活苗。弱毒疫苗抗體生成速度明顯快于滅活苗，在首免28d左右抗體合格率達(dá)到93.3%，滅活苗則在33.3%左右。此外，滅活苗免疫一次是無(wú)法達(dá)到理想的免疫效果，需加強(qiáng)免疫，而弱毒疫苗通常只需免疫一次便可達(dá)到農(nóng)業(yè)部的規(guī)定要求。這是因?yàn)樵诳筆RRSV感染免疫過(guò)程中細(xì)胞免疫占據(jù)主導(dǎo)地位，而滅活苗采用的是以誘導(dǎo)體液免疫為主的方式。弱毒苗不僅能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，而且同時(shí)還能誘導(dǎo)體液免疫，從而形成高效價(jià)的PRRS特異性中和抗體。這能明顯抑制豬體內(nèi)藍(lán)耳病病毒的復(fù)制活動(dòng)[2]。

目前，市場(chǎng)上銷售的PRRS抗體檢測(cè)試劑盒能夠檢測(cè)不同PRRS毒株，且敏感性較好，但是只能反映豬是否感染PRRSV，卻無(wú)法鑒別是自然感染還是人工免疫疫苗[3]。因此，在臨床實(shí)踐中需根據(jù)病豬臨床表現(xiàn)，如母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)以及繁殖障礙等情況來(lái)制定PRRS的豬場(chǎng)控制方案。豬場(chǎng)應(yīng)根據(jù)周邊地區(qū)豬藍(lán)耳病流行特點(diǎn)及主要毒株類型來(lái)挑選疫苗，避免由于疫苗選擇不當(dāng)而導(dǎo)致免疫效果差，引起疫病流行。弱毒活苗安全性高，副反應(yīng)小，免疫應(yīng)答好，臨床使用效果好，通常在接種3～4周便會(huì)形成抗體，產(chǎn)生免疫效果，免疫作用可持續(xù)120d[4]。因此，在豬藍(lán)耳病流行區(qū)域首先應(yīng)考慮選用弱毒活疫苗。此外，一個(gè)豬場(chǎng)只能挑選一種毒株疫苗使用，禁止同時(shí)使用多種毒株疫苗。因?yàn)楹笳邥?huì)導(dǎo)致病毒毒株重組，從而使病毒毒性增強(qiáng)。若附近有豬藍(lán)耳病疫情出現(xiàn)，豬場(chǎng)可選用弱毒活疫苗免疫進(jìn)行預(yù)防。種豬場(chǎng)、豬藍(lán)耳病疫情較輕的豬場(chǎng)可選用滅活苗。

豬藍(lán)耳病是生豬的一種常見(jiàn)疫病，一旦防控不及時(shí)會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)此，各豬場(chǎng)除了要做好免疫工作外，還應(yīng)將關(guān)口前移，做好日常預(yù)防工作。首先，要加強(qiáng)對(duì)豬場(chǎng)的消毒工作，合理選擇消毒劑，凈化整個(gè)豬場(chǎng)。同時(shí)，做好運(yùn)輸環(huán)節(jié)的消毒管理，嚴(yán)防疫病從外傳入。其次，要嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出的飼養(yǎng)原則，改善飼養(yǎng)環(huán)境，以盡量減少豬的應(yīng)激反應(yīng)[5]。對(duì)從外部引進(jìn)豬只要先進(jìn)行隔離，用血清學(xué)與病原學(xué)檢測(cè)健康后方可入群。最后，要注意預(yù)防副豬嗜血桿菌、鏈球菌引起的繼發(fā)感染，可選用頭孢類藥劑防治，但禁用氟苯尼考等氯霉素藥劑，慎用磺胺藥物。