胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中血管表皮生長因子的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系及意義

樂 靜 趙 濤 劉愛林

胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(gastroenteropancreafic neuroendocrine neoplasm,GEP-NEN)發(fā)病率由1973年的1.09/10萬增長到2004年的5.25/10萬，患病率在消化系惡性腫瘤中占第2位，僅次于大腸癌[1-2]。診斷時(shí)多數(shù)為轉(zhuǎn)移性晚期NENs，在治療方式上，主要有手術(shù)、藥物、介入、靶向等[3]。血管表皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作為一種能誘導(dǎo)受體酪氨酸激酶Flt4細(xì)胞內(nèi)酪氨酸殘基磷酸化的因子，于1996 年被分離純化[4]。在成人某些組織中，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)VEGF 是淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物，參與了淋巴管的發(fā)育過程[5]。本研究通過檢測(cè)胃腸胰腺NENs中VEGF、淋巴管密度(LVD)水平的變化，分析其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月在我院住院通過病理診斷為GEP-NEN的60例患者作為試驗(yàn)研究對(duì)象，男性30例、女性30例，年齡30～70歲，平均年齡(52.5±4.8)歲，包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者38例、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者22例。淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移患者在性別、年齡等方面無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及器材

VEGF ELISA試劑盒，VEGF封閉液+一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；離心機(jī)(上海飛鴿)；顯微鏡(日本Olympus)；酶標(biāo)儀(英國TECNA)；脫水機(jī)(日本TIYODA)；切片機(jī)(德國Leica)；計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)(美國惠普)。

1.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)組織中VEGF、淋巴管密度(LVD)的表達(dá)

福爾馬林固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復(fù)；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗(濃度1∶100)50 μl靜置1 h；加二抗(濃度1∶100)50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復(fù)染、分化；封片。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

VEGF陽性結(jié)果判定以細(xì)胞核不染色，胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，染色細(xì)胞數(shù)陰性(-)：≤10%；弱陽性(+)：10%～25%；陽性(++)：26%～50%；強(qiáng)陽性(+++)：>50%。

LVD的判定及計(jì)數(shù)：在腫瘤區(qū)域內(nèi)，未成腔但內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)含棕黃色顆?；蛘咭殉汕坏珒?nèi)皮細(xì)胞呈單層形態(tài)不規(guī)則均為淋巴管。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，多因素用Logistic回歸模型，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 入組GEP-NEN患者VEGF表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

對(duì)入組GEP-NEN患者VEGF的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽性率為55.26%(21/38)，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組VEGF陽性率為13.64%(3/22)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.789,P=0.035)。

2.2 入組GEP-NEN患者LVD的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

對(duì)入組GEP-NEN患者LVD的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的LVD均值達(dá)(0.83±0.14)，較淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組(0.23±0.11)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.163,P=0.038)。

2.3 入組GEP-NEN患者VEGF表達(dá)與LVD的關(guān)系

對(duì)入組GEP-NEN患者VEGF表達(dá)與LVD的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VEGF陽性表達(dá)者的LVD為(1.33±0.15)，較VEGF陰性者的(0.43±0.11)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.987,P=0.022)；VEGF的表達(dá)與LVD呈正相關(guān)(γ=0.36,P=0.012)。

3 討論

胃腸NET源于胃腸道組織，胰腺NET源于胰島細(xì)胞[6]，患者可出現(xiàn)包括疼痛、惡心、嘔吐、貧血等一系列非特異癥狀[7]。VEGF參與了胚胎時(shí)期淋巴管的形成及發(fā)育過程，并在機(jī)體處于病理狀態(tài)調(diào)節(jié)淋巴管的生成，能夠增加淋巴管壁的通透性，促進(jìn)新生淋巴管的形成，促進(jìn)惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的發(fā)生[8]。在本研究中，選取GEP-NEN患者，檢測(cè)其VEGF的表達(dá)，分析其與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

在本研究中，首先對(duì)入組的GEP-NEN患者是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為2組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組出現(xiàn)VEGF陽性20例，占55.26%；淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組VEGF陽性4例，占13.64%。進(jìn)一步對(duì)入組GEP-NEN患者的LVD進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的GEP-NEN患者其LVD均值較未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者明顯升高。這提示，對(duì)于出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的GEP-NEN患者，其VEGF表達(dá)陽性率顯著升高，LVD值明顯升高。VEGF在機(jī)體多種不同類型的惡性腫瘤均有表達(dá)，如肺癌、胃癌、結(jié)腸癌等，在這其中，VEGF-C由于能夠特異性地作用于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，又稱之為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子[9]。既往曾有研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與惡性腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，以及新生淋巴管的生成過程關(guān)系密切[10]。

本研究分析VEGF表達(dá)與LVD的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，對(duì)于VEGF陽性表達(dá)的GEP-NEN患者，其LVD均值較VEGF陰性表達(dá)的GEP-NEN患者顯著升高，VEGF的表達(dá)與LVD呈正相關(guān)。VEGF-C結(jié)合其特異性的受體，促進(jìn)酪氨酸激酶發(fā)生磷酸化，激活細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分化、增殖、遷移，抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡，刺激新生淋巴管的形成。

綜上所述，對(duì)于出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者，其VEGF表達(dá)陽性率升高，LVD值明顯升高，VEGF的表達(dá)與LVD呈正相關(guān)。二者之間的具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步基礎(chǔ)研究證實(shí)，但VEGF可能成為判斷胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤預(yù)后的新指標(biāo)。

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