蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制

劉召部++李建平++尹星懿

摘要 基于部分地區(qū)極易出現(xiàn)的影響酶抑制率法蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測準確度、精密度的操作問題，闡述了包括與農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)管追溯系統(tǒng)聯(lián)網(wǎng)在內(nèi)的酶抑制率法蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測實驗室的內(nèi)部質(zhì)量控制，涵蓋了從取樣到數(shù)據(jù)上傳研判全環(huán)節(jié)，以期為速測技術(shù)在一線食用農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)經(jīng)營者與監(jiān)管人員中的應用與推廣提供更好的技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞 蔬菜；農(nóng)藥殘留；快速檢測；酶抑制率法；準確性

中圖分類號 S481+.8 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）03-0133-02

Abstract Many existing problems，which affect accuracy and precision in rapid detection of pesticide residues，were exposed significantly during some districts.The internal quality control of rapid detection for vegetable pesticide residues in laboratory by enzyme inhibition rate method was summarized in this paper，including the agricultural products supervision system.It covered the whole process quality control from sampling to data uploading and data analysis，so as to provide scientific support for the application and promotion of rapid detection with high sensitivity at grass root level.

Key words vegetable；pesticide residue；rapid detection；enzyme inhibition rate method；accuracy

食品安全問題不僅關(guān)系到人們的身體健康，而且隨著經(jīng)濟發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，也越發(fā)受到輿論的普遍關(guān)注[1]。對蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品進行農(nóng)藥殘留等質(zhì)量安全檢驗檢測，是加強農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)管、保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要技術(shù)支撐和基礎(chǔ)，也是助力農(nóng)業(yè)供給側(cè)結(jié)構(gòu)性改革持續(xù)深入推進的重要抓手。

測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶抑制率法自20世紀60年代問世，目前研究已相對成熟，能夠?qū)@兩大類常用農(nóng)藥殘留進行定性快速檢測[2-3]，已列入國家標準GB/T5009.199—2003[4]。由于其具有操作簡單、速度快、成本低等優(yōu)點，已成為當前基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構(gòu)采用頻率較高的農(nóng)藥殘留檢測方法[5]。

在日常快速檢測活動中，要開展有效的質(zhì)量控制，保障檢測結(jié)果的準確性[6]。實驗室的質(zhì)量控制包括室間質(zhì)量評價和室內(nèi)質(zhì)量控制。目前，室間質(zhì)量評價已在定量檢測實驗室中制度化、規(guī)范化、程序化應用，而在快速檢測實驗室中罕見應用；實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制可以反映檢測質(zhì)量的穩(wěn)定性、速測的準確度及精密度，發(fā)現(xiàn)檢測中出現(xiàn)的非正常問題并及時進行修正。內(nèi)部質(zhì)量控制的好壞，直接影響著例行速測工作，影響著農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測能力。影響內(nèi)部質(zhì)量控制的主要因素包括人員的控制、試劑及樣品的控制、對檢測儀器設備的質(zhì)量控制、室內(nèi)環(huán)境條件的質(zhì)量控制、結(jié)果的質(zhì)量控制等幾個方面。

1 人員的控制

采樣人員、檢測人員應當積極參加上級主管部門組織的業(yè)務培訓[7]，熟悉農(nóng)藥殘留快速檢測的原理、步驟、試劑的作用、儀器組裝等理論知識，并能踏實做試驗。已經(jīng)配套了檢測數(shù)據(jù)監(jiān)管追溯平臺的，還需要檢測人員熟悉基本電腦操作，并能保持人員的相對穩(wěn)定性。

2 試劑及樣品的質(zhì)量控制

2.1 試劑

2.1.1 試劑配制的要求。配制提取液（緩沖液）時以蒸餾水、去離子水為佳，瓶裝純凈水在預試驗結(jié)果樂觀的條件下也可以進行推廣。不允許使用礦泉水、自來水配制，以免其中的礦物離子等影響提取液的pH值。直接將粉劑倒入水中配制提取液時，室溫下短時間內(nèi)不易溶解，會影響反應過程中酶的活性。應先加適量的水使粉劑完全溶解，冷卻后再定容至所需體積。

2.1.2 試劑保存的要求。酶抑制率法不同于速測卡法，其試驗中需要用到幾種試劑充分反應才能得出結(jié)果。部分試劑可以直接購買，而部分試劑需要檢測人員自己動手配制，并進行恒溫保存。粉劑化的酶及底物粉末應該放置于-18 ℃左右的冰箱冷凍室中冷凍保存；液態(tài)酶應置于0～4 ℃的冰箱冷藏室中恒溫保存[8]。

2.1.3 防止試劑受到污染的要求。保證試劑從瓶中吸出后“只出不進”的原則。多數(shù)速測實驗室由于經(jīng)費限制，微量移液器（微量移液槍）的吸頭（槍頭）不能做到一次性使用。這更需要保證一個槍頭在清洗干凈前只能接觸單獨某一種試劑，杜絕槍頭交叉使用引起試劑污染[9]。同種試劑須用一瓶開啟一瓶，直到用完或試劑失效后才可以打開下一瓶。

2.2 樣品

蔬菜樣品的正確采集、保存和處理意義重大。樣品是否合格關(guān)系到速測結(jié)果的準確性。

2.2.1 樣品的采樣。速測所需樣品較少，一般不需要按照NY/T789—2004農(nóng)藥殘留分析樣本的采樣方法進行，但所采樣品依舊需要符合統(tǒng)計學要求的抽樣方法，在盡可能符合農(nóng)產(chǎn)品采收實際要求的情況下[10]，確保樣品的代表性[11]。

從筆者的監(jiān)管經(jīng)驗看，如果是從生產(chǎn)環(huán)節(jié)抽取蔬菜樣品，不宜從田地的邊沿抽樣，以盡量杜絕其他地塊種植者以噴霧、噴粉、施粒、熏煙等方法施用農(nóng)藥時“漂移”[12]到所抽采樣品上，導致樣品不具有代表性，進而影響后續(xù)跟進執(zhí)法處罰；如果是從市場環(huán)節(jié)采樣，散裝樣本應從上、中、下分層采樣，包裝產(chǎn)品采樣應按堆垛采樣或甩箱采樣[13]。endprint

采樣前均應清洗或擦拭采樣工具。采樣過程中應及時、準確地記錄采樣相關(guān)信息，做好抽樣記錄，并及時進行樣品預處理。

2.2.2 特殊樣品的處理方法。有些蔬菜中含有大量的植物次生物質(zhì)，對酶的活性有直接影響，例如芹菜、蔥、香菜、蒜等；有些蔬菜中葉綠素的含量很高，彼此之間產(chǎn)生比色反應，容易出現(xiàn)假陽性（本身合格而判定為不合格）；另外，蔬菜的辛辣味越濃，出現(xiàn)假陽性的頻率越高。對于這些性質(zhì)特殊的果蔬來說，最好是采用表面測定法或整體浸提法盡可能地消除干擾[14-15]。

2.2.3 樣品預處理。樣本按四分法縮分到適量后，保存待測。未配置不銹鋼取樣器的實驗室，在剪切蔬菜時不宜剪切得太碎，否則比色皿中的沉渣、肉眼看不到的顆粒容易影響正常比色[14]。將樣品水洗后再進行檢測，同樣會影響樣品檢測質(zhì)量。

3 儀器設備的質(zhì)量控制

3.1 正確使用和維護天平

天平在使用前應按說明書的要求先進行通電預熱，然后才能使用。輕取托盤保護蓋，將天平置于平穩(wěn)無風、無震動的環(huán)境使用。放置大于標定重量的物體于托盤上可能造成傳感器損壞。放置物體時應輕拿輕放，不可沖擊托盤，以免損壞天平的內(nèi)部零件或?qū)е路Q重不準確。

部分天平工作時，不允許在其周圍若干距離內(nèi)使用收音機、手機或電視等移動電話、有輻射的電子產(chǎn)品，否則會影響精準度。

3.2 速測儀使用

使用前最好按照說明書要求進行預熱，在農(nóng)藥殘留速測儀穩(wěn)定后再開展測定工作，以保證試驗的可重復性。使用時應保證速測儀各個孔位內(nèi)無雜物，確保光路通暢。

3.3 器皿使用原則

加各種試劑時，不同吸頭（槍頭）要分工明確，不可用同一器具吸取不同試劑，以免污染試劑。試管、比色皿、提取瓶等器皿每次使用后應及時清洗干凈，晾干待用。比色皿上的頑固污漬可用乙醇清洗。

3.4 微量移液器（微量移液槍）的使用

在使用過程中，需慢吸慢排，吸液時使用第一檔（第一個停動點），排液時使用第二檔（第二個停動點）。原則上，微量移液器（微量移液槍）不應水平放置或倒置；并在每次試驗結(jié)束后，將其調(diào)節(jié)到最大量程[16]。

4 實驗室環(huán)境條件的質(zhì)量控制

4.1 防護設施

為了保障檢測人員人身安全和實驗室財產(chǎn)安全，實驗室必須完善安全防護措施，防火防電。另外，嚴禁在實驗室進食飲料、食物或吸煙等；不得存放大量易燃試劑，并由專人進行定期檢查。

4.2 溫度控制

由于酶的活性受溫度影響較大，因而無論是否配置恒溫水浴鍋、恒溫箱，在晝夜溫差大、冬季溫度較低的地區(qū)，實驗室均可設置空調(diào)機，將室溫控制在20 ℃以上。室溫過高或過低都會顯著降低酶的活性，甚至導致失活，影響試驗的正常進行。

5 結(jié)果質(zhì)量控制

5.1 空白試驗

在做空白對照試驗時，如果儀器提示酶的活性較低，可能的原因：一是酶失活；二是反應溫度較低。酶的活性下降，不利于降低催化反應的“活化能”[17]，需要重新做對照試驗。

國內(nèi)不同廠家生產(chǎn)的酶因酶源、敏感度和穩(wěn)定性不同，恒溫培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間也不盡相同，使用時應注意查看使用說明書[2]。

5.2 樣品測定

加入底物和上機測試一定要迅速，并且同一批樣品放入速測儀中的時間間隔盡量一致，否則儀器測試的是不同的反應時間段，這樣會帶來較大的誤差。3 min后便可讀出試驗數(shù)據(jù)（部分儀器可以在軟件里調(diào)整設置，適當減少或延長放入時間）。樣品培養(yǎng)溫度和時間、放入的速度應與空白對照溶液保持相同的條件，這樣速測儀基于酶抑制率計算公式進行運算后，結(jié)果才有可比性。

對照采樣記錄，及時將結(jié)果錄入系統(tǒng)。帶有嵌入式微型打印機的速測儀可直接打印結(jié)果，但打印出的熱敏紙易褪色，需做好數(shù)據(jù)記錄備份工作。

部分農(nóng)殘速測儀器開發(fā)公司開發(fā)了與之配套的檢測數(shù)據(jù)監(jiān)管平臺、追溯管理系統(tǒng)。這種速測儀具備檢測數(shù)據(jù)同步上傳入庫功能，避免人為修改檢測結(jié)果的可能性。

6 結(jié)語

在當前農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)經(jīng)營主體、基層檢驗檢測機構(gòu)的人力、物力、財力仍難以維護先進大型儀器長期滿負荷運轉(zhuǎn)的現(xiàn)狀下，成本低、速度快、對操作人員素質(zhì)要求相對較低的酶抑制率法快速檢測具有定量檢測方法無法比擬的優(yōu)勢[18]，仍然是當前乃至今后一定時期內(nèi)農(nóng)殘檢測的重要方式[19]。在這種客觀情況下，更需控制好快速檢測實驗室的各項內(nèi)部質(zhì)量，并長期程序化、規(guī)范化操作，以把誤差降低到最小，減少誤判和漏檢的幾率，確保數(shù)據(jù)的準確性。發(fā)現(xiàn)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率大于50%的樣品，可進行定量分析，確定具體農(nóng)藥品種和含量，并及時追溯處理，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全保駕護航。

7 參考文獻

[1] 鄧旭禧.東莞市石排鎮(zhèn)蔬菜農(nóng)藥殘留檢測體系的研究[D].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學，2012.

[2] 杜美紅，孫永軍，汪雨，等.酶抑制-比色法在農(nóng)藥殘留快速檢測中的研究進展[J].食品科學，2010，31（17）：462-466.

[3] 楊曉燕.農(nóng)貿(mào)市場免費檢測室建設成效初探[J].中國市場監(jiān)管研究，2017（3）：28-30.

[4] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測方法[S].北京：中國標準出版社，2003.

[5] LEE H S，KIM Y A，CHO Y A，et al.Oxidation of organophosphorus pes-ticides for the sensitive detection by cholinesterase-based biosensor[J].Chemosphere，2002，46（4）：571-576.

[6] 成都市市場監(jiān)督管理學會，成都市錦江區(qū)市場和質(zhì)量監(jiān)管局聯(lián)合課題組.問題導向 專業(yè)監(jiān)管 社會共治建立“三個結(jié)合”快速預警監(jiān)管機制[J].中國市場監(jiān)管研究，2017（3）：22-23.

[7] 丁國強.對上海蔬菜農(nóng)藥殘留速測工作的再思考[J].上海蔬菜，2008（1）：17-18.

[8] 趙艷華.農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留速測中常見影響因素的探討[J].吉林農(nóng)業(yè)：（學術(shù)版），2012（3）：14.

[9] 金曉輝.淺談農(nóng)藥殘留速測法的實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制[J].科技世界，2014（2）：328-329.

[10] 錢傳范，劉豐茂，潘燦平.農(nóng)藥殘留分析原理與方法[M].北京：化學工業(yè)出版社，2011：34.

[11] 楊劍波，張劍峰，章雪明，等.蘇州市農(nóng)藥殘留快速檢測工作現(xiàn)狀與展望[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2015，43（27）：236-237.

[12] 徐漢虹，吳文君，沈晉良，等.植物化學保護學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007：14-38.

[13] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.NY/T789-2004農(nóng)藥殘留分析樣本的采樣方法[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[14] 劉定喜，鄒征歐.蔬菜農(nóng)藥殘留速測結(jié)果異常的原因及對策[J].作物研究，2015，29（4）：441-442.

[15] 楊靜，王歡，謝偉強.等.酶抑制法速測技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測中的應用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（17）：161-164.

[16] 史紅珍，薛福元.蔬菜農(nóng)藥殘留速測技術(shù)及應用[J].蔬菜，2013（6）：53-55.

[17] 郭藹光，王憲澤，王曉云，等.基礎(chǔ)生物化學（第2版）[M].北京：高等教育出版社，2009：73-74.

[18] 金曉輝.淺析GB/T5009.199-2003農(nóng)殘速測酶抑制率法[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)，2014（5）：36-38.

[19] 王曉燕.農(nóng)殘速測技術(shù)在基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中的應用及發(fā)展建議[J].中國果蔬，2015，35（8）：28-30.endprint