血清FOLR1蛋白檢測對上皮性卵巢癌的診斷效能

魚志琪，李紅雨，劉端，臧星卉，孫瑋，李玉光

(鄭州大學第三附屬醫(yī)院，鄭州 450052)

卵巢癌的高死亡率與早期診斷困難有關[1～3]，早期卵巢癌無明顯自覺癥狀，并且缺乏有效的早期診斷手段[4，5]，故發(fā)現(xiàn)時多已為晚期。尋找有價值的早期診斷卵巢癌的血液或組織生物標志物一直是臨床研究的熱點，但至今尚無突破。葉酸受體1(FOLR1)蛋白是一個糖基化磷脂酰肌醇(GPI)偶聯(lián)的糖蛋白，由FOLR1基因編碼，分子量為38～40 kD，對葉酸及其衍生物具有高度親和力[6]。研究顯示在特定上皮來源的惡性腫瘤中FOLR1呈高表達，但在正常組織中FOLR1的表達很低[6, 7]。并且FOLR1可以從細胞表面脫落至血液中[8, 9]。血清FOLR1水平可能在卵巢癌中的診斷、病情判斷、治療效果監(jiān)測和預后評估方面有臨床價值[10～12]，但相應研究缺乏。本研究觀察了上皮性卵巢癌患者血清FOLR1水平變化，探討其與患者臨床病理參數(shù)的關系，將其作為診斷標志物診斷上皮性卵巢癌的效果與CA125進行了比較?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年10月～2017年3月收治的懷疑卵巢惡性腫瘤的104例患者，均無其他腫瘤病史，術前均未接受放、化療。所有患者均接受手術治療，留取術中切除的組織并送病理檢查。根據(jù)術后病理結果分為上皮性卵巢癌組44例、交界性卵巢腫瘤組22例和良性卵巢腫瘤組38例。上皮性卵巢癌組FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期18例、Ⅲ～Ⅳ期26例，組織分化程度高分化23例、中分化9例、低分化12例，病理類型為漿液性囊腺癌36例、黏液性囊腺癌4例、透明細胞癌4例，有淋巴結轉(zhuǎn)移17例、無淋巴結轉(zhuǎn)移27例，腹水細胞學檢查結果陽性22例、陰性22例。交界性卵巢腫瘤組漿液性囊腺瘤16例，黏液性囊腺瘤6例。良性卵巢腫瘤組漿液性囊腺瘤7例，黏液性囊腺瘤20例，卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫5例，卵巢成熟型囊性畸胎瘤6例。

1.2 血清FOLR1蛋白檢測 留取所有患者術前晨起空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，4 ℃下2 000 g離心20 min，取上清分裝至EP管中，-80 ℃凍存。采用ELISA法檢測血清FOLR1蛋白，試劑盒購自武漢博士德生物有限公司，嚴格按說明書操作。于450 nm波長處測量吸光度值(OD450)，根據(jù)標準曲線計算血清FOLR1蛋白水平。

1.3 血清CA125檢測 采用微粒子化學發(fā)光法檢測血清CA125水平，試劑盒購自SIEMENS公司，使用SIEMENS ADVIA CentaurXP全自動化學發(fā)光免疫分析儀測量。

2 結果

2.1 3組患者血清FOLR1、CA125水平比較 3組患者血清FOLR1、CA125水平見表1。上皮性卵巢癌組患者血清FOLR1、CA125水平均高于交界性卵巢腫瘤組、良性卵巢腫瘤組(P均<0.05)，交界性卵巢腫瘤組患者血清FOLR1、CA125水平與良性卵巢腫瘤組相比(P>0.05)。

表1 3組血清FOLR1、CA125水平比較

注：與交界性卵巢腫瘤組相比，*P<0.05；與良性卵巢腫瘤組相比，#P<0.05。

2.2 上皮性卵巢癌組血清FOLR1水平與患者臨床病理參數(shù)的關系 上皮性卵巢癌組FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期者血清FOLR1水平分別為(278.94±372.59)、(725.10±629.62) pg/mL，二者血清FOLR1水平相比，P<0.05；組織分化程度高、中、低分化者血清FOLR1水平分別為(211.26±129.10)、(525.32±511.02)、(1190.56±630.00) pg/mL，三者血清FOLR1水平相比，P<0.05；病理類型為漿液性囊腺癌、非漿液性囊腺癌者血清FOLR1水平分別為(755.11±582.86)、(211.20±115.04) pg/mL，二者血清FOLR1水平相比，P<0.05；有、無淋巴結轉(zhuǎn)移者血清FOLR1水平分別為(973.63±696.26 )pg/mL、(271.18±238.89 )pg/mL，二者血清FOLR1水平相比，P<0.05；腹水細胞學檢查結果陽性、陰性者血清FOLR1水平分別為(879.36±659.16) pg/mL、(206.80±120.03 )pg/mL，二者血清FOLR1水平相比，P<0.05。

2.3 血清FOLR1、CA 125水平診斷上皮性卵巢癌的效能比較 血清FOLR1診斷上皮性卵巢癌的ROC曲線下面積為0.81(95 %CI：0.72～0.88)，截斷值為215 pg/mL，以截斷值為界診斷上皮性卵巢癌的靈敏度為61.4%、特異度為98.0%、約登指數(shù)0.51、陽性預測值為81.8%、陰性預測值為76.1%，診斷準確度77.9%；血清CA125診斷上皮性卵巢癌的ROC曲線下面積為0.72(95 %CI：0.72～0.88)，截斷值為73 U/mL，以截斷值為界診斷上皮性卵巢癌的靈敏度為59.1%、特異度為80.0%、約登指數(shù)0.39、陽性預測值為66.7%、陰性預測值為72.3%，診斷準確度70.2%。

3 討論

FOLR1是一種膜蛋白，與GPI偶聯(lián)于細胞膜上，通過內(nèi)吞過程介導葉酸進入細胞內(nèi)，對葉酸及其衍生物具有高度親和力。葉酸對細胞的增殖、分裂和組織生長具有重要調(diào)節(jié)作用[14, 15]。葉酸缺乏對腫瘤細胞中DNA復制、修復以及基因表達有重大影響。腫瘤細胞的快速生長需要足量的葉酸，有一種假說認為FOLR1在實性惡性腫瘤中的上調(diào)是由于葉酸的代謝需求增加，為了給核酸合成和細胞生長提供燃料[16]。已有研究表明FOLR1在不同類型的癌癥中表達增加，包括卵巢、子宮內(nèi)膜、肺、乳腺癌、高級別骨肉瘤和胸膜間皮瘤[6, 7]。O′Shannessy等[16]報道血清FOLR1是區(qū)分漿液性卵巢癌和正常對照的一個有潛力的生物標志物，這與本研究結果一致。

CA125是最廣泛使用的卵巢癌血清腫瘤標志物，F(xiàn)DA批準其用于監(jiān)測化療效果和對盆腔包塊患者的鑒別診斷。但血清CA125水平升高常與其他病理情況有關，如子宮內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌癥、子宮肌瘤、盆腔炎性疾病、卵巢良性腫瘤等，且在早期卵巢癌患者中僅有一半血清CA125升高。因此，CA125對早期卵巢癌敏感性較差，對卵巢癌總體特異性較差。由于這些原因，CA125既沒有作為卵巢癌的篩查的生物標志物，也沒有作為早期診斷卵巢癌的生物標志物。

本研究觀察到上皮性卵巢癌組患者血清FOLR1高，而交界性和良性卵巢腫瘤患者血清FOLR1呈低水平，血清FOLR1水平在早期上皮性卵巢癌患者中即升高，且隨FIGO分期逐步升高，提示FOLR1在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，有可能成為上皮性卵巢癌早期診斷的一個血清標志物。進一步進行ROC分析，結果顯示血清FOLR1、CA125水平診斷上皮性卵巢癌的曲線下面積分別為0.81、0.72，取截斷值時的約登指數(shù)分別為0.51、0.39，在診斷上皮性卵巢癌方面，與CA125相比，采用血清FOLR1水平有更高的特異度、陽性預測價值和診斷準確度，而沒有犧牲其敏感度，提示血清FOLR1的檢測有助于卵巢癌的診斷，可能是一個潛在的卵巢癌血清標志物。Kurosaki 等[17]的報道顯示血清FOLR1從盆腔腫塊患者中區(qū)分上皮性卵巢癌患者的檢驗效能優(yōu)于CA125，與本研究結果一致。目前，一些FOLR1靶向治療藥物正在進行臨床試驗，這可能對化療療效監(jiān)測有用。由于沒有對上皮性卵巢癌組患者隨訪到足夠長的時間，因此我們沒有對血清FOLR1的預后價值進行分析，這將在后續(xù)的研究中探討。

綜上所述，筆者推測，對于上皮性卵巢癌，血清FOLR1可能是一個高度特異性的診斷標志物，并且有望成為上皮性卵巢癌診斷、靶向治療及化療療效監(jiān)測的一個參考指標。

[1] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer Statistics, 2017[J]. CA Cancer J Clin, 2017,67(1):7-30.

[2] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016,66(2):115-132.

[3] Nakamura K, Sawada K, Yoshimura A, et al. Clinical relevance of circulating cell-free microRNAs in ovarian cancer[J]. Mol Cancer, 2016,15(1):48.

[4] Szajnik M, Czystowska-Kuomicz M, Elishaev E, et al. Biological markers of prognosis, response to therapy and outcome in ovarian carcinoma[J]. Expert Rev Mol Diagn, 2016,16(8):811-826.

[5] Elnakat H, Ratnam M. Distribution, functionality and gene regulation of folate receptor isoforms: implications in targeted therapy[J]. Adv Drug Deliv Rev, 2004,56(8):1067-1084.

[6] Basal E, Eghbali-Fatourechi GZ, Kalli KR, et al. Functional folate receptor alpha is elevated in the blood of ovarian cancer patients[J]. PLoS One, 2009,4(7):6292.

[7] Kelemen LE, Brenton JD, Parkinson C, et al. Conditions associated with circulating tumor-associated folate receptor 1 protein in healthy men and women[J]. PLoS One, 2014,9(5):96542.

[8] Vergote IB, Marth C, Coleman RL. Role of the folate receptor in ovarian cancer treatment: evidence, mechanism, and clinical implications[J]. Cancer Metastasis Rev, 2015,34(1):41-52.

[9] Notaro S, Reimer D, Fiegl H, et al. Evaluation of folate receptor 1 (FOLR1) mRNA expression, its specific promoter methylation and global DNA hypomethylation in type I and type II ovarian cancers[J]. BMC Cancer, 2016,16(5):589.

[10] Leung F, Dimitromanolakis A, Kobayashi H, et al. Folate-receptor 1 (FOLR1) protein is elevated in the serum of ovarian cancer patients[J]. Clin Biochem, 2013,46(15):1462-1468.

[11] Kurosaki A, Hasegawa K, Kato T, et al. Serum folate receptor alpha as a biomarker for ovarian cancer: Implications for diagnosis, prognosis and predicting its local tumor expression[J]. Int J Cancer, 2016,138(8):1994-2002.

[12] Youden WJ. Index for rating diagnostic tests[J]. Cancer, 2010,53(1):32-35.

[13] Holm J, Babol LN, Markova N, et al. The interrelationship between ligand binding and thermal unfolding of the folate binding protein. The role of self-association and pH[J]. Biochim Biophys Acta, 2014,1844(3):512-519.

[14] Holm J, Lawaetz AJ, Hansen SI. Ligand binding induces a sharp decrease in hydrophobicity of folate binding protein assessed by 1-anilinonaphthalene-8-sulphonate which suppresses self-association of the hydrophobic apo-protein[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2012,425(1):19-24.

[15] Kelemen LE, Sellers TA, Keeney GL, et al. Multivitamin and alcohol intake and folate receptor alpha expression in ovarian cancer.[J] Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2005,14(9):2168-2172.

[16] O′Shannessy DJ, Somers EB, Palmer LM, et al. Serum folate receptor alpha, mesothelin and megakaryocyte potentiating factor in ovarian cancer: association to disease stage and grade and comparison to CA125 and HE4[J]. J Ovarian Res, 2013,6(1):29.

[17] Kurosaki A, Hasegawa K, Kato T, et al. Serum folate receptor alpha as a biomarker for ovarian cancer: Implications for diagnosis, prognosis and predicting its local tumor expression[J]. Int J Cancer,2016,138(8):1994-2002.