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      乙肝病毒血清學(xué)檢驗中化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗的應(yīng)用效果

      2018-03-15 05:57:29郭躍文張勇軍丁超通訊作者
      醫(yī)藥前沿 2018年10期
      關(guān)鍵詞:表面抗原化學(xué)發(fā)光乙肝病毒

      郭躍文 張勇軍 丁超(通訊作者)

      (哈密市第二人民醫(yī)院檢驗科 新疆 哈密 839001)

      乙肝是臨床對乙肝病毒性肝炎的簡稱,其主要是由乙肝病毒(HBV)導(dǎo)致的,患者主要臨床表現(xiàn)為惡心嘔吐、厭油、乏力、肝功能異常、肝大等,少數(shù)病例還同時會出現(xiàn)黃疸、發(fā)熱癥狀。其病程呈現(xiàn)遷延慢性發(fā)展的特點,病情嚴(yán)重者會逐漸發(fā)展成重型肝炎、肝硬化甚至肝癌。乙型肝炎是一種全球流行性病毒感染性疾病類型,在國內(nèi)部分地區(qū)具有較高的發(fā)病率。隨著病情的持續(xù)發(fā)展和惡化,患者的生命安全也會受到嚴(yán)重威脅[1]。目前臨床方面尚未尋找到治療乙肝的特效藥物或方法,這在一定程度上增加了患者的精神壓力和患者家庭、社會負(fù)擔(dān)。如何在發(fā)病初期對乙型肝炎患者做出準(zhǔn)確診斷,以便盡快采取針對性治療和處理是臨床診斷工作的重點所在[2]。免疫學(xué)和乙型肝炎血清標(biāo)志物檢驗是臨床檢測診斷乙型肝炎的常用方法,為評定ECLIA、ELISA兩種檢測方式的診斷價值,本文選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象,現(xiàn)評析報道如下。

      1.資料與方法

      1.1 一般資料

      選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象,入選患者均符合《病毒性肝炎防治方案》(中華醫(yī)學(xué)會傳染病、肝病學(xué)會、寄生蟲病學(xué)分會)中乙型肝炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。其中男患者83例,女患者37例,患者最小年齡24歲,最大年齡50歲,平均年齡(46.8±5.8)歲,

      1.2 方法

      要求所有患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下接受檢驗,抽取10mL肘部靜脈血,進行10min左右的3000r離心處理,將血清分離出來待檢。將血清樣本均分成2分,采用ELISA、ECLIA先后進行檢驗,每次檢驗時都將定值參考比作為質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn),涉及到的相關(guān)操作均按照試劑盒上的要求進行。

      1.2.1 ELISA檢驗方法的具體操作和標(biāo)準(zhǔn) 選擇雙抗原夾心法測定血清樣本,采用去離子水稀釋的方式促使50mL的濃縮洗滌液至1000mL,并將其放置在專門的洗液瓶中,調(diào)整酶標(biāo)試劑達到試劑預(yù)頂位置,并對吸光度值等進行讀取,臨界值為陰性對照平均吸光度(A)值為依據(jù),其中陽性:S/OD(標(biāo)本OD值和臨界OD值的比值)在1.00以上;陰性:S/OD在1.00以下。

      1.2.2 ECLIA檢驗方法的具體操作和標(biāo)準(zhǔn) 選擇雙抗體夾心法測定血清樣本,在預(yù)定位置將洗液、吸頭、配套反應(yīng)杯等放置好,使用濃度為75%的酒精棉球?qū)υ噭┻M行擦洗,需共同培育的不僅僅是待測樣本,還有經(jīng)過生物素標(biāo)記的HBsAb和乙肝表面抗原(HBsAg),然后再與親和素標(biāo)記的磁微粒共同進行孵育,通過反復(fù)洗滌的方式,分離出游離的抗原、抗體以及復(fù)合物等,將三丙胺加入,并將ECL反應(yīng)啟動,依據(jù)其激光強度對乙肝表面抗原(HBsAg)濃度進行判定,其中陽性:乙肝表面抗原(HBsAg)在10mIU/mL以上;陰性:乙肝表面抗原(HBsAg)在10mIU/mL以下。

      1.2.3 重復(fù)性檢驗 選擇20份低、中、高濃度的乙肝表面抗原(HBsAg)陽性血清進行冷凍保存處理,每天進行1次測量,選擇其中10份對批間重復(fù)性進行計算,另外10份則對批內(nèi)重復(fù)性進行計算。

      1.3 觀察指標(biāo)

      將乙肝核心抗體(HBcAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗體(HBeAb)作為檢測內(nèi)容。其中的參考上限值為0.15ng/mL,乙肝表面抗體(HBsAb)參考上限值為10mIU/mL,乙肝e抗原(HBeAg)的參考上限值為0.25NCU/mL,乙肝e抗體(HBeAb)參考上限值在3.0NCU/mL以上,乙肝核心抗體(HBcAb)參考值在2.0NCU/mL以上。測定值在參考值上限以上則可確定為陽性[4]。

      1.4 統(tǒng)計學(xué)處理方法

      選擇SPSS22.0版本的統(tǒng)計學(xué)軟件對得到的所有數(shù)據(jù)進行分析處理,檢測結(jié)果中的計數(shù)資料采用百分率(%)加以描述,對比行χ2檢驗,如果P<0.05,則代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2.結(jié)果

      2.1 對兩種方法的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計比較

      在乙肝核心抗體(HBcAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)檢測結(jié)果比較上,ECLIA、ELISA兩種檢測方法差異不存在統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但在乙肝e抗體(HBeAb)檢驗結(jié)果比較上,ELISA與ECLIA之間差異顯著,具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),詳細(xì)數(shù)據(jù)見下表所示。

      2.2 對兩種檢測方法的重復(fù)性進行比較

      比較ECLIA、ELISA兩種檢測方法的重復(fù)性,除高濃度乙肝表面抗原(HBsAg)含量差異不明顯外(P>0.05),ECLIA檢測到低濃度、中濃度乙肝表面抗原(HBsAg)含量的重復(fù)性與ELISA具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

      表2 對兩種檢測方法的重復(fù)性進行比較

      3.討論

      乙型肝炎病毒是一種在全世界各個地區(qū)均廣泛存在的一種傳染性的多發(fā)病,我國屬于該病的高發(fā)國之一,其中攜帶乙肝表面抗原(HBsAg)患者的百分比在7%~11%范圍內(nèi)。乙肝表面抗原(HBsAg)主要指的是人體發(fā)生乙型病毒性肝炎感染后,針對HBV特點,機體免疫系統(tǒng)自發(fā)形成的一種特異性抗體[5]。截止到目前為止,臨床方面和相關(guān)研究學(xué)者尚未尋找到特效治療藥物或方法,故早發(fā)現(xiàn)乙肝表面抗原(HBsAg)異常并盡早作出明確診斷具有至關(guān)重要的作用。

      酶聯(lián)免疫吸附試驗可準(zhǔn)確反映出乙型肝炎病毒血清學(xué)指標(biāo),其顯著性特點為操作簡單方便,準(zhǔn)確率高,但其不存在定量分析的能力,無法動態(tài)觀察到患者病情變化和臨床療效進展,對乙型肝炎病毒感染復(fù)制情況不能進行準(zhǔn)確判斷[6]。ECLIA屬于生物素-親和素技術(shù)之一,通過電化學(xué)在電極表面形成特異性化學(xué)發(fā)放反應(yīng),其是當(dāng)前最為科學(xué)先進的一種化學(xué)發(fā)光免疫測定系統(tǒng)。ECLIA技術(shù)使用的載體是一種順磁性微粒,其是由電磁鐵控制的,其可使檢測的標(biāo)準(zhǔn)化和自動化轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實,從而有效減少人工操作過程中導(dǎo)致的各種誤差,實現(xiàn)精準(zhǔn)的定量、定性分析,使批內(nèi)、批間誤差大幅度減少。與此同時,還可在一定程度上降低因游離抗體導(dǎo)致的假陰性結(jié)果,使ECLIA檢測的特異性明顯提高[7]。本組研究對照性研究分析了ECLIA、ELISA檢驗方法,結(jié)果顯示,兩種方式在乙肝核心抗體(HBcAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)標(biāo)志物檢測結(jié)果上無差異(P>0.05),在乙肝e抗原(HBeAg)標(biāo)志物檢測結(jié)果上,差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。究其原因:ELISA是基層醫(yī)院檢測乙肝的常用方法,其已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床中,雖價格低廉且檢驗迅速,但檢測乙肝病毒血清標(biāo)志物時,定性分析價值尚可,但定量分析還存在一定的不足之處,特別是當(dāng)血清樣本濃度過高的情況下,假陰性現(xiàn)象十分常見,再加上實際的檢測過程中,抗體和抗體試劑生產(chǎn)差異性導(dǎo)致的誤差,會對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響。而ECLIA主要通過電磁鐵對順磁性微粒進行控制,完全實現(xiàn)了自動化操作檢驗,可避免人為操作引起的各種失誤。與此同時,電磁鐵產(chǎn)生的電磁擁有的快速消失性可對抗體和復(fù)合抗體分離進行有效游離抵抗,可大大減少游離抗體形成的陽性影響,提高陰性檢出率[8]。本組研究還發(fā)現(xiàn),在批內(nèi)、批間重復(fù)性檢測中,ECLIA與ELISA檢出率的差異在低濃度上進行比較,差異顯著(P<0.05),但高濃度上比較,差異則不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),這充分證明,ELISA對高濃度乙肝表面抗原(HBsAg)的檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確,對低濃度乙肝表面抗原(HBsAg)的檢測結(jié)果則不理想,但ECLIA因為檢測方法比較廣泛,故檢測結(jié)果顯示其檢出率的差異以低濃度最為明顯,高濃度不明顯(P>0.05),這充分說明ELISA在高濃度乙肝表面抗原(HBsAg)中更為適用,ECLIA的檢測范圍更加廣泛,對低濃度乙肝表面抗原(HBsAg)加大檢測力度,可對傳染源進行更加科學(xué)有效的控制[9]。

      綜合上述分析,ECLIA在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中具有較高的診斷價值,其對乙肝表面抗原(HBsAg)的陽性檢出率高于ELISA,值得臨床優(yōu)先選擇和使用推廣。

      [1]程育春.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用[J].中國實用醫(yī)藥,2016,11(15):53-54,55.

      [2]李平.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用分析[J].東方食療與保健,2016,09(5):9-9.

      [3]黃懌箐.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用分析[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2017,21(23):3102-3103.

      [4]張怡莎.乙肝病毒血清學(xué)檢驗采用化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法的效果對比[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2014,56(32):32-33.

      [5]寧進.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學(xué)檢驗中的應(yīng)用效果[J].中國保健營養(yǎng),2017,27(19):317.

      [6]胡曉丹.目前乙肝病毒不同臨床檢測方法的對照研究[J].國際病毒學(xué)雜志,2015,22(z1):142-143.

      [7]王澤民.時間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝病毒血清學(xué)檢測中的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,38(6):455-458.

      [8]陳海雁,張桂花,羅錦彬,等.熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA和乙肝病毒標(biāo)志物檢測的臨床價值分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,07(16):2216-2217.

      [9]段海萍,王俠.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應(yīng)用分析[J].國際病毒學(xué)雜志,2016,23(1):57-59,63.

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