厚樸飲片不同濃度乙醇浸出物的研究

李文惠，翁德會

(武漢華夏理工學院 生物與制藥工程學院，湖北 武漢 430223)

厚樸為木蘭科植物厚樸(Magnolia officinalis Rehd. et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮[1]。厚樸中含酚類、生物堿類和揮發(fā)油類等成分，厚樸酚、和厚樸酚是其主要活性成分[2-3]。但是不同產(chǎn)地、不同生長年限的厚樸飲片中所含有的厚樸酚、和厚樸酚的含量有極大的差異，從而影響臨床療效[4-6]。藥典中厚樸醇浸出物是考核厚樸質(zhì)量的一個重要指標，因而本實驗是以恩施道地厚樸為研究對象，對其醇浸出物進行研究。文獻研究表明[7-8]，不同的醇濃度提取的浸出物的含量是不一樣的，通過采用不同濃度的醇分別對厚樸進行提取，從而來制定厚樸的質(zhì)量控制指標提供參考，并為厚樸飲片的質(zhì)量分級管理提供依據(jù)。

1 實驗試劑、儀器設(shè)備與藥材

1.1 儀器、試劑與樣品

FC204 電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司)；TU-1900 雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；數(shù)字顯示電子恒溫水浴鍋(HW·SY11-KP2鞏義市予華)；電熱恒溫鼓風干燥箱(101-OEBS北京市醫(yī)療儀器廠)；乙醇(分析純，天津市大陸化學試劑廠)。

厚樸酚對照品；中國食品藥品檢查研究院，含量為98.8%，批號：110729-201513；和厚樸酚對照品；中國食品藥品檢查研究院，含量為99.3%，批號：110730-201614。

1.2 實驗材料

實驗所用樣品是采購于武漢市劉天保中藥飲片廠，產(chǎn)地為湖北恩施，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學張林碧教授鑒定為木蘭科厚樸(Magnolia officinalis Rehd．et Wils)的樹皮。

2 實驗方法

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的厚樸酚對照品3.0 mg、和厚樸酚對照品3.0 mg分別至10 mL容量瓶，用乙醇溶解并稀釋定容到規(guī)定的刻度，振搖并搖勻，即為厚樸酚、和厚樸酚的對照品貯備液。

2.2 測定波長的選擇

準確吸取厚樸酚對照品溶液1.5mL置于 25mL量瓶中，和厚樸酚對照品溶液1.0 mL置于 25 mL量瓶中，乙醇定容搖勻。以乙醇為參比，于紫外200～400 nm波長范圍內(nèi)進行波長掃描，測定其紫外吸收曲線。結(jié)果如圖1、2所示，厚樸酚最大吸收波長為292 nm，和厚樸酚最大吸收波長為294 nm。

圖1 厚樸酚紫外光譜圖(λmax=292 nm ，A=0.556)

圖2 和厚樸酚紫外光譜圖(λmax=294 nm ，A=0.493)

2.3 線性關(guān)系考察

2.3.1 厚樸酚標準曲線的繪制

精密吸取厚樸酚對照品貯備液0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 mL置于25 mL量瓶中，以乙醇定容搖勻，得對照品的溶液。以乙醇為參比，置于紫外儀器中在292 nm條件下測其吸光度，線性回歸方程y=0.0308x(r2=0.9999)。表明厚樸酚的吸光度和濃度在6～18μg/mL濃度范圍時，具有較好的線性關(guān)系。

2.3.2 和厚樸酚標準曲線的繪制

精密吸取和厚樸酚對照品貯備液1，1.25，1.5，1.75，2.0mL置于50mL量瓶中，用乙醇定容搖勻，得對照品的溶液。以乙醇為參比，置于紫外儀器中在294 nm條件下測其吸光度，線性方程y=0.0413x(r2=0.9995)。表明和厚樸酚的吸光度和濃度在6～12μg/mL濃度范圍時，具有較好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度實驗

精密移取厚樸酚對照品溶液1.5 mL，置于10 mL量瓶中，用乙醇稀釋定容至刻度，在上述光譜條件下進行分析，連續(xù)測定其吸收度，并計算RSD為2.88%，表明本儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實驗

稱取65%乙醇提取的浸出物0.01 g用65%的乙醇溶解并定容至250 mL，分別于0、1、2、3、4 h，在上述光譜條件下測定其吸光度，并計算RSD，厚樸酚的RSD為1.46%，和厚樸酚的RSD為1.628%，說明供試品溶液在4 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.3.5 重復試驗

分別稱取75%乙醇提取的浸出物0.01 g 5份，分別用65%的乙醇溶解并定容至250 mL，測定其吸收度，計算厚樸酚、和厚樸酚的含量及RSD值，厚樸酚的RSD為1.916%，和厚樸酚的RSD為1.79%，表明重現(xiàn)性較好。

2.3.6 加樣回收率試驗

采用回收率試驗的方法，以65%乙醇提取的浸出物為樣品，稱取樣品加入一定的對照品溶液，按照樣品測定方法，在292、294 nm紫外下，測定它們的吸收度，計算其含量，結(jié)果見表1、2，表明回收率較高。

表1 厚樸酚加樣回收率測定試驗結(jié)果

表2 和厚樸酚加樣回收率測定試驗結(jié)果

2.4 含量測定

2.4.1 不同濃度乙醇浸出物的提取與測定

按照中國藥典2015版(四部)通則2201中熱浸法測定。分別取供試品約4 g，精密稱定，置250 mL的圓底燒瓶中，分別用55%、65%、75%、85%、95%濃度的乙醇100 mL[9-11]，密塞，稱定質(zhì)量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下圓底燒瓶，密塞，再稱定質(zhì)量，用乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的125 mL蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥器計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)，結(jié)果見表3。

表3 浸出物含量表

2.4.2 不同濃度乙醇浸出物中有效成分的含量測定

分別稱取上述5種浸出物各3份，每份0.01 g，精密稱定，用65%乙醇溶解并稀釋定容至250 mL，在上述色譜條件下測定其吸光度，計算其厚樸酚、和厚樸酚的含量，結(jié)果見表4。

表4 浸出物中厚樸酚與和厚樸酚含量測定結(jié)果

結(jié)合表3、表4中醇浸出物含量和浸出物中厚樸酚、和厚樸酚含量結(jié)果，計算厚樸飲片中不同濃度乙醇提取的厚樸酚、和厚樸酚的含量見表5。

表5 厚樸飲片不同乙醇濃度提取物中有效成分的含量

從表5可知，用65%乙醇提取厚樸飲片，所得厚樸酚、和厚樸酚的綜合提取率最高。厚樸飲片醇浸出物提取所需的乙醇最佳濃度為65%。

3 總結(jié)

(1)不同濃度乙醇提取厚樸浸出物，所得到的浸出物溶液顏色有所不同，55%乙醇提取的浸出物顏色最淺，呈淺棕色，其余乙醇濃度下提取出的浸出物溶液顏色相差不多，呈深棕色。

(2)在不同乙醇濃度下提取的醇浸出物量具有一定差異，95%的醇浸出物量最少，55%的醇浸出物量其次，65%，75%，85%的醇浸出物量差異不大。

(3)測定不同濃度乙醇提取的浸出物中厚樸酚與和厚樸酚含量，結(jié)果顯示，95%乙醇濃度的浸出物中厚樸酚與和厚樸酚之和含量最高，75%乙醇濃度的含量最低，55%、65%、85%乙醇濃度的含量居中。

(4)結(jié)合醇浸出物量和浸出物中厚樸酚與和厚樸酚含量結(jié)果，計算厚樸中有效成分的綜合提取率， 65%乙醇提取的厚樸酚、和厚樸酚的綜合提取率最高。厚樸飲片醇浸出物提取所需的乙醇最佳濃度為65%。

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