• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同溫度下6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌的抑制活性及與生防菌發(fā)酵上清液的混配

    2018-03-07 06:50:41段海明黃偉東余海兵
    關(guān)鍵詞:混配孢菌殺菌劑

    段海明, 余 利, 黃偉東, 余海兵

    (安徽科技學(xué)院農(nóng)學(xué)院,安徽 鳳陽(yáng) 233100)

    玉米莖腐病在世界各大玉米產(chǎn)區(qū)都有發(fā)生,具有發(fā)病迅速、可導(dǎo)致玉米早衰和倒伏等特點(diǎn),成為玉米持續(xù)增產(chǎn)的重要障礙性因素之一[1-2]。隨著玉米品種的更替和秸稈還田技術(shù)的普及,玉米莖腐病危害日益加重,已成為玉米生產(chǎn)上最為重要的病害之一,嚴(yán)重影響玉米產(chǎn)量和品質(zhì)[3]。玉米莖腐病是由鐮孢菌(Fusariumspp.)和腐霉菌(Pythiumspp.)單獨(dú)或復(fù)合侵染引致的病害,防治難度大,開展玉米莖腐病的防治技術(shù)研究對(duì)保證中國(guó)的糧食安全具有重要意義[4]。

    玉米莖腐病菌一般在苗期就已侵染根部,經(jīng)歷較長(zhǎng)時(shí)間的潛育期后于乳熟末期至蠟熟期為顯癥高峰期,播種前使用殺菌劑拌種或包衣可以減輕該病的危害[5]。王沖[6]采用含毒介質(zhì)法測(cè)定了7種殺菌劑對(duì)玉米莖腐病-禾谷鐮孢菌的室內(nèi)毒力,結(jié)果顯示戊唑醇和多菌靈對(duì)病菌的有效中濃度(EC50)分別為0.423 mg/L和1.370 mg/L。張丹丹等[7]采取菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了咯菌腈、滿適金、多菌靈和敵委丹4種藥劑對(duì)禾谷鐮孢菌的EC50,分別達(dá)0.03 mg/kg、0.30 mg/kg、0.56 mg/kg和0.89 mg/kg。郝俊杰等[8]通過(guò)離體和盆栽接種檢測(cè)相結(jié)合的方法研究發(fā)現(xiàn)咯菌腈懸浮種衣劑適樂(lè)時(shí)拌種對(duì)引起玉米莖腐病的禾谷鐮孢菌的抑制效果較好。郭寧等[9]研究結(jié)果表明采用阿維菌素與咯菌腈混合包衣玉米種子對(duì)玉米成株期莖腐病有較好的防治效果,防效為36.55%。韓成衛(wèi)等田間試驗(yàn)結(jié)果表明,適樂(lè)時(shí)防效最好,其次為多菌靈[10]。中國(guó)玉米種植范圍廣,防治適期不同,施藥時(shí)的環(huán)境溫度存在較大差異,然而不同殺菌劑在不同溫度下對(duì)玉米莖腐病菌抑制活性的變化未見報(bào)道。

    對(duì)玉米莖腐病防控的另一方法是開展生物防治。生物防治具有環(huán)境污染小、低毒、低殘留等優(yōu)點(diǎn),符合當(dāng)今化學(xué)農(nóng)藥減量使用的要求[11-12]。但是,生物農(nóng)藥存在藥效遲緩、不穩(wěn)定等因素,難以大規(guī)模推廣應(yīng)用[13]。生防菌及其代謝產(chǎn)物與化學(xué)殺菌劑混配增效組合的篩選對(duì)于化學(xué)殺菌劑減量使用和提高生防菌的穩(wěn)定性具有重要作用[14]。胡飛等[15]運(yùn)用Horsfall法、孫云沛方法和林間防治試驗(yàn)檢測(cè)解淀粉芽胞桿菌JDF-6和井岡霉素A混配對(duì)油茶炭疽病的增效作用,結(jié)果表明二者混配比例為1∶1時(shí)增效顯著,為防治油茶炭疽病的良好配方。本實(shí)驗(yàn)室前期分離到1株解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens) gfj-4,對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌抑制效果較好,但是有關(guān)解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液及其與化學(xué)殺菌劑聯(lián)合對(duì)玉米莖腐病菌的抑制效應(yīng)尚未見報(bào)道。因此,本研究首先根據(jù)中國(guó)玉米播期環(huán)境溫度的變化范圍,測(cè)定不同溫度條件下6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌的抑制活性,然后測(cè)定解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液與6種化學(xué)殺菌劑的復(fù)配劑對(duì)禾谷鐮孢菌的毒性比,分析不同化學(xué)殺菌劑對(duì)禾谷鐮孢菌的毒力隨溫度的變化規(guī)律,篩選化學(xué)殺菌劑和生防菌發(fā)酵上清液的混配增效組合,旨在為化學(xué)殺菌劑的減量使用和玉米莖腐病的可持續(xù)防控提供技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 藥品 95%咯菌腈原藥、95%苯醚甲環(huán)唑原藥、96%腈菌唑原藥由山東濰坊潤(rùn)豐化工股份有限公司提供,96%戊唑醇原藥由山東華陽(yáng)農(nóng)藥化工集團(tuán)有限公司提供,80%多菌靈可濕性粉劑由江蘇省江陰市農(nóng)藥二廠有限公司提供,50%福美雙可濕性粉劑由江蘇省南通寶葉化工有限公司提供。殺菌劑原藥采用丙酮溶解,制劑用滅菌水溶解,配制成1.0×103μg/ml的母液置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.2 菌株 玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌(Fusariumgraminearum)由河北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所惠贈(zèng)。解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)gfj-4分離自罹病番茄果實(shí),于2014年9月24日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC NO: M 2014444)。

    1.1.3 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基:馬鈴薯200.0 g,葡萄糖18.0 g,瓊脂15.0 g,去離子水1.0 L。營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)培養(yǎng)基:蛋白胨5.0 g,牛肉浸膏3.0 g,酵母膏1.0 g,葡萄糖10.0 g,瓊脂15.0 g,pH 7.0。NA培養(yǎng)基不加瓊脂即為營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基:土豆200.0 g,葡萄糖18.0 g,硫酸鎂1.0 g,硫酸銨1.0 g,磷酸二氫鉀0.6 g,去離子水1.0 L。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 不同溫度下化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制活性測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)速率法[16]分別測(cè)定不同溫度條件下咯菌腈、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈、腈菌唑和福美雙6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制活性(表1)。接種完畢后置于20 ℃、26 ℃和30 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中,于96 h后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑,利用SPSS13.0軟件分別求出不同殺菌劑在不同溫度下的毒力回歸方程、EC50值、95%置信限和R2,以30 ℃時(shí)藥劑的EC50值為基準(zhǔn),計(jì)算毒力倍數(shù)。

    表1不同溫度下6種化學(xué)殺菌劑的濃度梯度

    Table1Concentrationsofsixfungicidesatthreedifferenttemperatures

    藥劑名稱 溫度(℃)濃度梯度(μg/ml)ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ咯菌腈300.0250.0500.1000.2000.4000.600260.0100.0250.0500.1000.2000.400200.0100.0250.0500.1000.2000.400戊唑醇300.100.501.002.004.006.00260.100.250.501.002.004.00200.100.250.501.002.004.00苯醚甲環(huán)唑300.250.501.002.004.008.00260.250.501.002.004.008.00200.250.501.002.004.008.00多菌靈300.250.500.600.801.002.00260.250.400.500.801.002.00200.250.500.600.801.002.00腈菌唑300.250.501.002.004.006.00260.250.501.002.004.006.00200.250.501.002.004.006.00福美雙301.02.55.08.010.020.0261.02.55.08.010.020.0201.02.55.08.010.020.0

    1.2.2 解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液的制備 解淀粉芽孢桿菌gfj-4在NA培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)48 h,挑取單菌落菌苔轉(zhuǎn)接入NB液體培養(yǎng)基中,33 ℃、120 r/min培養(yǎng)12 h,然后以10%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接種到NB液體培養(yǎng)基中,33 ℃、180 r/min培養(yǎng)8 h,獲得的種子液以0.5%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接種到100 ml發(fā)酵培養(yǎng)基中,然后置于33 ℃、140 r/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)84 h,11 180g、4 ℃離心20 min,發(fā)酵上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后保存于4 ℃冰箱備用。

    1.2.3 不同稀釋倍數(shù)的發(fā)酵上清液對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制活性測(cè)定 將制備的發(fā)酵上清液按一定比例與冷卻到50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基充分混勻,使得發(fā)酵上清液的含量分別為50.0 μl/ml、62.5 μl/ml、71.4 μl/ml、100.0 μl/ml、125.0 μl/ml和166.7 μl/ml。然后在平板中央接種玉米莖腐病菌菌餅,每一濃度處理3皿,重復(fù)3次,以加入相同體積的滅菌水為對(duì)照。培養(yǎng)96 h后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑,利用SPSS 13.0軟件計(jì)算發(fā)酵上清液對(duì)玉米莖腐病菌的EC50值。

    1.2.4 殺菌劑新型混劑的毒性比率測(cè)定 采用陳福良等的方法[17]設(shè)計(jì)菌株gfj-4發(fā)酵上清液和化學(xué)殺菌劑的混配試驗(yàn),以發(fā)酵上清液和不同化學(xué)殺菌劑在26 ℃時(shí)對(duì)玉米莖腐病菌的EC50為基礎(chǔ),按其EC50值劑量的比例分別設(shè)置 0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1、10∶0共11個(gè)配比,另設(shè)無(wú)菌水處理為對(duì)照,采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定各配比的抑菌率。毒性比率的計(jì)算公式如下:實(shí)際抑菌率=[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)]×100%,理論抑菌率=[A的EC50實(shí)際抑菌率×A在配比中所占的比例+B的EC50實(shí)際抑菌率×B在配比中所占的比例]×100%,毒性比率=實(shí)際抑菌率/理論抑菌率。若毒性比率>1,為增效作用;毒性比率<1,為拮抗作用;毒性比率為1左右,則為相加作用。

    1.3數(shù)據(jù)分析方法

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL2007和SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同溫度下6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的毒力比較

    由表2可知,6種化學(xué)殺菌劑對(duì)禾谷鐮孢菌菌絲生長(zhǎng)的毒力均隨溫度下降而顯著提高,20 ℃時(shí)6種殺菌劑對(duì)病菌的抑制活性最高,而30 ℃時(shí)抑菌活性最低。6種殺菌劑對(duì)病菌的抑制活性由大到小依次為咯菌腈、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈、腈菌唑和福美雙,其中咯菌腈對(duì)禾谷鐮孢菌的抑制效果最為優(yōu)異,20 ℃時(shí)EC50為0.041 μg/ml,26 ℃時(shí)EC50為0.057 μg/ml,30 ℃時(shí)EC50為0.141 μg/ml;福美雙對(duì)病菌的抑制效果最差,20 ℃時(shí)EC50為6.152 μg/ml,26 ℃時(shí)EC50為8.830 μg/ml,30 ℃時(shí)EC50為8.924 μg/ml。經(jīng)毒力倍數(shù)分析發(fā)現(xiàn),溫度變化對(duì)殺菌劑的影響次序由大到小依次為戊唑醇、咯菌腈、腈菌唑、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈和福美雙,其中對(duì)戊唑醇的影響最大,30 ℃時(shí)的EC50值為20 ℃時(shí)EC50值的5.5倍,溫度變化對(duì)福美雙的影響最小,30 ℃時(shí)的EC50值為20 ℃時(shí)EC50值的1.45倍。

    表2不同溫度下6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病-禾谷鐮孢菌絲生長(zhǎng)的毒力

    Table2ToxicitydeterminationofsixfungicidestoFusariumgraminearumatdifferenttemperatures

    殺菌劑 溫度(℃)毒力回歸方程 EC50(μg/ml)95%置信限(μg/ml)毒力倍數(shù)咯菌腈30Y=1.08+1.27x0.1410.123~0.1621.0026Y=2.30+1.86x0.0570.052~0.0642.4620Y=2.02+1.46x0.0410.033~0.0503.42戊唑醇30Y=-0.29+0.58x1.6531.422~1.9341.0026Y=0.69+0.66x0.3500.303~0.4154.7120Y=0.67+1.30x0.3020.252~0.3575.50苯醚甲環(huán)唑30Y=-0.24+1.22x1.5611.342~1.8361.0026Y=0.09+0.93x0.7920.632~0.9751.9720Y=0.04+1.31x0.7040.642~0.9462.23多菌靈30Y=0.05+3.68x0.9710.918~1.0301.0026Y=0.54+5.35x0.7960.747~0.8411.2320Y=1.04+3.28x0.4820.442~0.5202.01腈菌唑36Y=-0.53+1.43x2.3522.048~2.7351.0026Y=-0.15+1.69x1.2251.104~1.3581.9220Y=0.05+2.10x0.9500.820~1.0962.48福美雙30Y=-1.56+1.65x8.9247.802~10.1041.0026Y=-1.21+1.27x8.8305.192~13.5131.0120Y=-1.24+1.56x6.1525.424~7.0061.45

    2.2 不同稀釋倍數(shù)的解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制活性

    由表3可見,解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液的濃度從50.0 μl/ml增至166.7 μl/ml時(shí),在26 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96 h時(shí),對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制率從46.0%增至65.3%,發(fā)酵上清液對(duì)玉米莖腐病菌的EC50為62.23 μl/ml(R2=0.98)。與對(duì)照相比較可以發(fā)現(xiàn),經(jīng)解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵上清液處理的禾谷鐮孢菌菌絲擴(kuò)展緩慢,氣生菌絲生長(zhǎng)稀疏,高濃度發(fā)酵上清液處理可使菌絲顏色變褐色。

    表3不同稀釋倍數(shù)的解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵上清液對(duì)玉米莖腐病菌的抑制率

    Table3InhibitionrateofdifferentdilutiontimesofBacillusamyloliquefaciensfermentationsupernatanttoF.graminearum

    稀釋倍數(shù)發(fā)酵上清液濃度(μl/ml)抑菌率(%)6166.765.3±0.58125.062.4±0.310100.057.3±1.21471.452.6±1.11662.550.2±1.02050.046.0±0.7

    2.3 6種化學(xué)殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配的毒性比

    苯吡咯類殺菌劑咯菌腈與gfj-4發(fā)酵上清液所有的混配比例都表現(xiàn)出較明顯的增效作用,毒性比分布在1.13至1.33之間,其中咯菌腈與發(fā)酵上清液混配比例為 6∶4時(shí)毒性比最大(1.33),即增效作用最強(qiáng)(表4)。

    由表5~表7可見,3種三唑類殺菌劑和gfj-4發(fā)酵上清液混配的大多數(shù)配比都表現(xiàn)出較為顯著的增效作用。戊唑醇與gfj-4發(fā)酵上清液混配的所有配比毒性比均大于1,說(shuō)明gfj-4發(fā)酵上清液對(duì)戊唑醇的抑菌率有普遍的增效作用,其中配比為1∶9時(shí)毒性比最大為1.32。苯醚甲環(huán)唑與gfj-4發(fā)酵上清液混配的配比中,除了9∶1時(shí)毒性比小于1外,其他比例均表現(xiàn)為增效作用,其中1∶9的配比毒性比最大(1.40),增效作用最強(qiáng)。腈菌唑與gfj-4發(fā)酵上清液混配的9個(gè)比例中毒性比均大于1,即gfj-4發(fā)酵上清液對(duì)腈菌唑的抑菌作用具有普遍的增效作用,其中配比為5∶5時(shí)毒性比最大(1.36)。

    表4咯菌腈與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table4ToxicityratiobetweenfludioxonilandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶055.655.61.009∶164.655.61.168∶268.555.51.237∶372.755.51.316∶473.955.51.335∶573.055.51.324∶672.755.41.313∶766.855.41.212∶862.655.41.131∶962.355.31.13 0∶1055.355.31.00

    表5戊唑醇與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table5ToxicityratiobetweentebuconazoleandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶054.5254.521.009∶161.5054.731.128∶258.6654.941.077∶370.0355.141.276∶464.0855.351.165∶562.5355.561.134∶661.7655.761.113∶766.1555.971.182∶862.7956.181.121∶974.1656.381.32 0∶1056.5956.591.00

    表6苯醚甲環(huán)唑與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table6ToxicityratiobetweendifenoconazoleandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶057.3257.321.009∶151.9257.430.908∶265.9657.541.157∶366.2357.641.156∶470.0257.751.215∶571.9157.861.244∶671.6457.971.243∶776.7758.081.322∶877.5858.181.331∶981.3658.291.40 0∶1058.4058.401.00

    表7腈菌唑與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table7ToxicityratiobetweenmyclobutanilandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶057.1357.131.009∶160.3456.991.068∶272.1356.861.277∶376.4256.731.356∶475.3556.591.335∶576.9656.461.364∶669.1956.321.233∶775.0856.191.342∶874.8156.061.331∶974.0155.921.32 0∶1055.7955.791.00

    多菌靈與gfj-4發(fā)酵液混配的所有配比的毒性比均大于1,說(shuō)明gfj-4發(fā)酵上清液對(duì)多菌靈的抑菌效果具有普遍的增效作用。其中,9∶1和3∶7配比的毒性比最大,均為1.27,即增效作用最強(qiáng)(表8)。

    表8多菌靈與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table8ToxicityratiobetweencarbendazimandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶058.8258.821.009∶174.3258.671.278∶270.9358.531.217∶372.6358.381.246∶471.1758.241.225∶569.4858.091.204∶665.1257.951.123∶773.3557.801.272∶869.7257.661.211∶968.9957.511.20 0∶1057.3657.361.00

    由表9可見,福美雙與gfj-4發(fā)酵上清液混配的所有配比對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比也均大于1,說(shuō)明gfj-4發(fā)酵液對(duì)福美雙的抑菌效果具有普遍的增效作用。其中,配比為6∶4時(shí)毒性比最大,為1.23,即增效作用最強(qiáng)。

    表9福美雙與解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液混配對(duì)玉米莖腐病菌的毒性比

    Table9ToxicityratiobetweenthiramandB.amyloliquefaciensgfj-4fermentationsupernatanttoF.graminearum

    體積比實(shí)際抑菌率(%)理論抑菌率(%)毒性比10∶054.6654.661.009∶163.4855.041.158∶265.2455.421.187∶365.4955.791.176∶469.2756.171.235∶568.2656.551.214∶668.8956.931.213∶769.0257.301.202∶869.2257.681.201∶963.4858.061.09 0∶1058.4458.441.00

    3 討 論

    3.1 化學(xué)殺菌劑對(duì)植物病原菌的毒力隨溫度的變化規(guī)律

    殺菌劑對(duì)植物病原菌的毒力隨溫度的變化規(guī)律因化學(xué)藥劑的種類以及靶標(biāo)菌的發(fā)育階段不同而發(fā)生較大變化。張鵬等[18]研究結(jié)果表明納他霉素對(duì)灰葡萄孢(Botrytiscinerea)菌絲生長(zhǎng)的EC50在25 ℃下為37.420 μg/ml,在5 ℃下為0.984 μg/ml,活性提高了37倍,乙霉威對(duì)該菌的活性在5 ℃下較25 ℃提高了5倍。劉霞等[19]報(bào)道戊唑醇對(duì)核桃炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)的毒力也隨溫度的升高而逐漸降低,在22 ℃、28 ℃和 34 ℃下,其平均EC50值分別為1.30 μg/ml、2.02 μg/ml和 9.34 μg/ml,22 ℃較34 ℃的抑菌活性提高近6.2倍,存在顯著差異。本研究所涉及的6種化學(xué)殺菌劑在低溫(20 ℃)條件下抑菌作用也最為優(yōu)異,隨著溫度的上升,殺菌劑對(duì)禾谷鐮孢菌的抑制活性下降,最為明顯的為戊唑醇20 ℃較30 ℃的抑菌活性提高近4.5倍。殺菌劑對(duì)所有植物病原菌的毒力隨著溫度的變化規(guī)律還有待于進(jìn)一步系統(tǒng)研究。目前,防治玉米莖腐病的施藥方式主要采用殺菌劑拌種或包衣,本研究獲得的殺菌劑隨溫度的變化規(guī)律對(duì)于玉米莖腐病的田間防治具有一定的實(shí)際意義。在施藥時(shí),應(yīng)根據(jù)玉米種植地區(qū)播種環(huán)境溫度的不同而適當(dāng)調(diào)整種衣(拌種)劑的使用量。

    3.2 解淀粉芽孢桿菌(次級(jí)代謝產(chǎn)物)在防治禾谷鐮孢菌病害方面的價(jià)值

    解淀粉芽孢桿菌作為一類重要的生物防治資源微生物,成為近幾年生物防治研究的熱點(diǎn),其對(duì)禾谷鐮孢菌病害的生物防治主要集中在小麥赤霉病方面,且主要體現(xiàn)在室內(nèi)抑菌活性和盆栽藥效試驗(yàn)等方面[20]。藺國(guó)強(qiáng)等[21]從土壤中分離獲得1株具有較強(qiáng)拮抗作用的解淀粉芽孢桿菌,其發(fā)酵菌液在小麥開花期對(duì)赤霉病的田間防治效果高達(dá)79%~88%,與50%多菌靈800倍液的防效相當(dāng)。楊洪鳳等[22]從樟樹葉中分離獲得的解淀粉芽孢桿菌CC09對(duì)禾谷鐮刀菌等多種病原真菌的生長(zhǎng)有抑制作用,且能夠在根組織細(xì)胞中廣泛定殖,建立共生關(guān)系,盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明發(fā)酵液對(duì)麥苗赤霉病的防效達(dá)90.7%,高于三唑酮(10 mg/ml)的處理效果。冉軍艦等[23]從小麥根基土壤中篩選出解淀粉芽孢桿菌7M1,該菌及產(chǎn)生的抗菌素對(duì)禾谷鐮刀菌有很好的抑制效果,其抗菌素粗提液對(duì)禾谷鐮刀菌的抑制作用與50%多菌靈可濕粉500倍液抑制效果相當(dāng),防治效果為76.41%。張雪嬌等[24]采用平板對(duì)峙法篩選獲得了2株解淀粉芽孢桿菌XJ-16和LY-2,對(duì)禾谷鐮孢菌的抑菌率分別為 73.76% 和 73.73%。陳亮等[25]從高寒草甸野牦牛牛糞中分離得到解淀粉芽孢桿菌LM3403,能夠明顯抑制禾谷鐮刀菌菌絲體生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā),使病菌的菌絲體畸形、細(xì)胞膜損傷,并發(fā)現(xiàn)菌株還具有合成 surfactin、iturin和fengycin 3種抗菌脂肽的能力。本實(shí)驗(yàn)室篩選的解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液的6倍稀釋液對(duì)玉米莖腐病菌——禾谷鐮孢菌的抑制率為65.3%,室內(nèi)抑菌效果較好,具有潛在的田間利用價(jià)值。

    3.3 微生物源菌劑與化學(xué)殺菌劑的混配

    生防微生物活體所具有的受環(huán)境條件影響大和不耐貯存等缺點(diǎn)限制了其大量推廣應(yīng)用。可以預(yù)見,在未來(lái)較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi),化學(xué)殺菌劑在防治植物病害方面將依然發(fā)揮重要作用,但隨著人們對(duì)化學(xué)殺菌劑的研究逐步深入,其作為異源物質(zhì)對(duì)環(huán)境和人類的干擾作用不容忽視,多種化學(xué)殺菌劑的環(huán)境毒性被要求重新評(píng)估,尋求對(duì)環(huán)境影響小的病害防控模式及化學(xué)藥劑減施增效的對(duì)策已成為當(dāng)務(wù)之急[26]?;瘜W(xué)殺菌劑和微生物源農(nóng)藥的混配在提高生防菌劑防效,減少化學(xué)藥劑的環(huán)境釋放量等方面具有重要的推動(dòng)作用,符合中國(guó)當(dāng)代植物病害防控發(fā)展的新趨勢(shì)。隨著農(nóng)藥使用“零增長(zhǎng)”政策的實(shí)施,化學(xué)農(nóng)藥和微生物農(nóng)藥協(xié)同控病的研究將成為新的熱點(diǎn)。畢秋艷等[26]研究了枯草芽胞桿菌與氟環(huán)唑聯(lián)用對(duì)禾谷鐮孢霉的增效作用,結(jié)果表明兩者聯(lián)用對(duì)禾谷鐮孢霉的最高抑菌活性可達(dá)74.44%,表現(xiàn)增效和持效作用,枯草芽胞桿菌揮發(fā)性物質(zhì)和抗菌蛋白可增強(qiáng)氟環(huán)唑?qū)坦如犳呙沟囊种苹钚?。姚克兵等[27]采用枯草芽胞桿菌DJ-6菌劑和吡唑醚菌酯聯(lián)用協(xié)同防治草莓病害,田間防治結(jié)果表明,生防菌劑與吡唑醚菌酯聯(lián)用后能減少50%的化學(xué)藥劑施用量,防效增加2.17%,而且能提高DJ-6在草莓葉圍的存活率,達(dá)到了化學(xué)農(nóng)藥減量增效的使用目的,但二者混配成功是建立在菌劑與化學(xué)藥劑能夠相容的基礎(chǔ)之上的,因此研究開發(fā)微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物與化學(xué)殺菌劑的增效組合對(duì)現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)更具有可操作性和實(shí)踐意義。本研究將解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液與化學(xué)殺菌劑進(jìn)行混配篩選增效組合,發(fā)現(xiàn)gfj-4發(fā)酵上清液對(duì)咯菌腈、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、腈菌唑、多菌靈、福美雙6種化學(xué)殺菌劑具有較為普遍的增效作用,而且戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑2種藥劑和發(fā)酵上清液都在混配比為1∶9時(shí)表現(xiàn)為最強(qiáng)增效作用,能夠減少化學(xué)殺菌劑的使用量。

    解淀粉芽孢桿菌主要通過(guò)產(chǎn)生脂肽類抗生素和抗菌蛋白等物質(zhì)而發(fā)揮抑菌作用[28-29]。其中,脂肽類抗生素是一類由親水性環(huán)狀短肽頭部和長(zhǎng)鏈?zhǔn)杷灾舅嵛舶徒M成的雙親性化合物,其抑菌機(jī)制主要是通過(guò)疏水脂肪酸鏈作用于病菌細(xì)胞膜,擾亂膜的結(jié)構(gòu),改變膜的完整性,引起細(xì)胞膜的破裂和細(xì)胞質(zhì)的泄露,而且脂肽類物質(zhì)還能夠抑制病菌的呼吸作用以及影響病菌對(duì)糖和蛋白質(zhì)的吸收利用能力[30-33]。秦楠等[34]研究了解淀粉芽胞桿菌HRH317菌株所產(chǎn)抗菌蛋白質(zhì)對(duì)禾谷鐮孢菌的抑制機(jī)理,發(fā)現(xiàn)該抗菌蛋白質(zhì)可造成病原菌菌絲變細(xì)、畸形與扭曲、末端膨大等現(xiàn)象。本研究的6種化學(xué)殺菌劑中,咯菌腈為細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)換抑制劑,戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和腈菌唑?yàn)辂溄晴薮忌锖铣梢种苿?EBIs),能影響膜的結(jié)構(gòu)與功能,多菌靈的作用靶點(diǎn)為β-微管蛋白,影響細(xì)胞的有絲分裂[35]??梢酝茰y(cè),gfj-4菌株發(fā)酵上清液對(duì)殺菌劑的增效作用與其所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)的抗菌機(jī)制與化學(xué)殺菌劑有差異相關(guān)。因此,下一步將針對(duì)解淀粉芽孢桿菌gfj-4發(fā)酵上清液中對(duì)禾谷鐮孢菌起主要抑制作用的活性物質(zhì)開展分離、純化和抑制機(jī)理研究,從而為探究其增效作用機(jī)理提供基礎(chǔ),此外菌株發(fā)酵上清液及其與化學(xué)殺菌劑的增效組合對(duì)病害的防控水平還需要通過(guò)玉米莖腐病的田間防效研究加以驗(yàn)證。

    [1] 馬紅霞,張海劍,孫 華,等. 玉米莖腐病病原菌檢測(cè)方法研究[J]. 植物保護(hù), 2017, 43(3):149-153.

    [2] 石明亮,黃小蘭,陸虎華,等.玉米抗莖腐病研究進(jìn)展及其鑒定與育種方法探討[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(4):1-4.

    [3] 溫 瑞,黃梧芳,康紹蘭,等. 玉米莖腐病研究進(jìn)展[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2000, 23(1): 53-56.

    [4] 王曉鳴,晉齊鳴,石 潔,等. 玉米病害發(fā)生現(xiàn)狀與推廣品種抗性對(duì)未來(lái)病害發(fā)展的影響[J]. 植物病理學(xué)報(bào), 2006, 36(1):1-11.

    [5] 陳 捷,宋佐衡,咸洪泉,等. 玉米莖腐病侵染規(guī)律的研究[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào), 1995, 22(2): 117-122.

    [6] 王 沖. 玉米莖腐病防治技術(shù)研究初探[D]. 泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

    [7] 張丹丹,閔營(yíng)輝,袁虹霞,等. 9種化學(xué)藥劑對(duì)玉米莖腐病菌的毒力測(cè)定及田間藥效[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010 (8): 90-92.

    [8] 郝俊杰,劉佳中,孫 靜,等. 殺菌劑種子處理對(duì)鐮孢菌侵染玉米的影響[J]. 玉米科學(xué), 2013, 21(5): 120-126.

    [9] 郭 寧,石 潔. 不同種衣劑對(duì)玉米莖腐病的防治效果[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 14(8): 117-118, 123.

    [10] 韓成衛(wèi),孔曉民,吳秋平,等. 不同化學(xué)藥劑對(duì)玉米莖腐病的田間藥效試驗(yàn)研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,48(7):114-117.

    [11] 束長(zhǎng)龍,曹蓓蓓,袁善奎,等. 微生物農(nóng)藥管理現(xiàn)狀與展望[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào), 2017, 33(3): 297-303.

    [12] 李宛澤,郭月霞,王忠武.玉米莖腐病生防菌的篩選鑒定及最佳培養(yǎng)條件研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(3):148-149.

    [13] 陸 凡. 江蘇省生物農(nóng)藥生產(chǎn)現(xiàn)狀、存在問(wèn)題及發(fā)展建議[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2016, 32(1): 58-66.

    [14] 陳志誼,劉永峰,劉郵洲,等. 植物病害生防芽孢桿菌研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2012, 28(5):99-106.

    [15] 胡 飛,胡本進(jìn),李昌春,等. 解淀粉芽胞桿菌JDF-6·井岡霉素A組合物對(duì)油茶炭疽病室內(nèi)毒力測(cè)定及林間試驗(yàn)[J]. 農(nóng)藥, 2015, 54(7): 537-539.

    [16] 慕立義. 植物化學(xué)保護(hù)研究方法[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1994:76-81.

    [17] 陳福良,鄭斐能,王 儀. 農(nóng)藥混配室內(nèi)毒力測(cè)定的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 1997(4): 30-34.

    [18] 張 鵬,姜興印,房 鋒,等. 不同溫度下納他霉素對(duì)灰葡萄孢的抑制活性和作用機(jī)理初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 9(4): 351-356.

    [19] 劉 霞,楊克強(qiáng),朱玉鳳,等. 8種殺菌劑對(duì)核桃炭疽病病原菌膠孢炭疽菌的室內(nèi)毒力[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 15(4): 412-420.

    [20] 陳 哲,黃 靜,趙 佳,等. 解淀粉芽孢桿菌抑菌機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2015, 31(6): 37-41.

    [21] 藺國(guó)強(qiáng),廖玉才,宮安東,等. 禾谷鐮刀菌拮抗菌的篩選與鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 32(3): 28-32.

    [22] 楊洪鳳,余向陽(yáng),薛雅蓉,等. 內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌CC09在小麥根部定殖的電鏡觀察及防病效果[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào), 2014, 30(6): 839-844.

    [23] 冉軍艦,徐劍宏,赫 丹,等. 小麥赤霉病原菌拮抗菌Bacillusamyloliquefaciens7M1產(chǎn)抗菌素的研究[J].微生物學(xué)通報(bào), 2016, 43(11): 2437-2447.

    [24] 張雪嬌,石晶晶,常 娜,等. 河北省冬小麥赤霉病拮抗細(xì)菌的分離與鑒定[J].作物雜志, 2017(2): 157-162.

    [25] 陳 亮,李瑞靜,秦素雅,等. 小麥赤霉病拮抗菌株篩選及其抑制作用研究[J].中國(guó)植保導(dǎo)刊, 2017, 37(5):12-17.

    [26] 畢秋艷,馬志強(qiáng),韓秀英,等. 枯草芽胞桿菌與氟環(huán)唑聯(lián)用對(duì)禾谷鐮孢霉的增效作用機(jī)制[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào), 2015,42(3): 404-409.

    [27] 姚克兵,張玉軍,王勁根,等. 枯草芽胞桿菌和吡唑醚菌酯協(xié)同防治草莓病害[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2016, 29(10): 2397-2401.

    [28] ONGENA M, JACQUES P.Bacilluslipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol[J]. Trends in Microbiology, 2008, 16: 115-125.

    [29] KIM P I, CHUNG K C. Production of an antifungal protein for control ofColletotrichumlagenariumbyBacillusamyloliquefaciensMET0908[J]. FEMS Microbiology Letter, 2004, 234 (1): 177-183.

    [30] MAGET-DANA R, PEYPOUX F. Iturins, a special class of pore-forming lipopeptides: biological and physicochemical properties[J]. Toxicology, 1994, 87(1/3): 151-174.

    [31] DELEU M, BOUFFIOUX O, RAZAFINDRALAMBO H, et al. Interaction of surfactin with membranes: a computational approach[J]. Langmuir, 2003, 19(8): 3377 -3385.

    [32] DELEU M, PAQUOT M, NYLANDER T. Effect of fengycin, a lipopeptide produced byBacillussubtilis, on model biomembranes[J]. Biophysical Journal, 2008, 94(7): 2667-2679.

    [33] 付瑞敏,陳五嶺. 解淀粉芽孢桿菌BA-16-8所產(chǎn)脂肽豐原素對(duì)擴(kuò)展青霉呼吸及營(yíng)養(yǎng)利用的影響研究[J]. 食品科技, 2016, 41(11): 8-14.

    [34] 秦 楠,郝 林,李 鑫. 解淀粉芽胞桿菌HRH317抗菌蛋白的分離純化及其抗菌作用[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào), 2015, 42(5): 813-819.

    [35] 徐漢虹. 植物化學(xué)保護(hù)學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2008:117-141.

    猜你喜歡
    混配孢菌殺菌劑
    12種殺菌劑對(duì)三線鐮刀菌的室內(nèi)毒力測(cè)定
    云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:31:04
    無(wú)人機(jī)噴灑農(nóng)藥 農(nóng)藥混配順序
    低濃度瓦斯混配空氣氧化安全輸送研究與應(yīng)用
    鐮孢菌與大豆根腐病研究進(jìn)展
    新穎殺菌劑Picarbutrazox合成方法概述
    湖北省蔬菜根際土壤中的鐮孢菌分布特征
    四川省套作玉米莖腐病致病鐮孢菌的分離與鑒定
    農(nóng)藥混配小竅門
    尖鐮孢菌細(xì)胞色素P45055A1與NO相互作用的熒光光譜法研究
    真菌病害怎樣正確選擇殺菌劑?
    一个人免费在线观看电影| 黑人欧美特级aaaaaa片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产av在哪里看| 日韩欧美三级三区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久精品国产综合久久久| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一级黄片播放器| 女警被强在线播放| 成人国产一区最新在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产成人系列免费观看| 草草在线视频免费看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产黄a三级三级三级人| 免费大片18禁| 桃红色精品国产亚洲av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 怎么达到女性高潮| 婷婷精品国产亚洲av| 99国产极品粉嫩在线观看| 波多野结衣高清作品| 亚洲精品色激情综合| 深爱激情五月婷婷| www.www免费av| 亚洲欧美激情综合另类| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产在视频线在精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品人妻1区二区| 宅男免费午夜| 亚洲18禁久久av| 亚洲18禁久久av| АⅤ资源中文在线天堂| 波多野结衣高清作品| 国产一区二区激情短视频| 成年女人永久免费观看视频| 久久久久久国产a免费观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 搡老妇女老女人老熟妇| 午夜免费激情av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 少妇的丰满在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲成人久久性| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 好男人在线观看高清免费视频| 国产色婷婷99| 悠悠久久av| 长腿黑丝高跟| 日韩有码中文字幕| 少妇的逼水好多| 波多野结衣高清无吗| 亚洲无线在线观看| e午夜精品久久久久久久| 中文资源天堂在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产精品女同一区二区软件 | 久久精品国产清高在天天线| 十八禁人妻一区二区| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲电影在线观看av| 亚洲av美国av| 国产真实乱freesex| 99热精品在线国产| 国产爱豆传媒在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 成年免费大片在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| 99国产极品粉嫩在线观看| 美女黄网站色视频| 免费看美女性在线毛片视频| 精品久久久久久久末码| 午夜老司机福利剧场| 特大巨黑吊av在线直播| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 最近最新免费中文字幕在线| 中文在线观看免费www的网站| 九九在线视频观看精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 无人区码免费观看不卡| 亚洲无线观看免费| 色噜噜av男人的天堂激情| 最近最新免费中文字幕在线| 国产成人av激情在线播放| 国产免费一级a男人的天堂| 少妇的逼好多水| 亚洲人与动物交配视频| 9191精品国产免费久久| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 欧美成人性av电影在线观看| 在线播放国产精品三级| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av免费在线观看| 精品一区二区三区视频在线 | 一夜夜www| 老司机福利观看| av福利片在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产淫片久久久久久久久 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人无遮挡网站| 精品久久久久久久久久免费视频| ponron亚洲| 舔av片在线| 首页视频小说图片口味搜索| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲激情在线av| 麻豆国产av国片精品| 成人精品一区二区免费| 成人三级黄色视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产高潮美女av| 极品教师在线免费播放| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成年免费大片在线观看| 亚洲av二区三区四区| 在线免费观看的www视频| 久久午夜亚洲精品久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 美女大奶头视频| 国产精品久久视频播放| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av不卡在线观看| 九九在线视频观看精品| 90打野战视频偷拍视频| 中出人妻视频一区二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 色av中文字幕| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲av美国av| 美女高潮的动态| 欧美日韩精品网址| 床上黄色一级片| 桃色一区二区三区在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 成人特级av手机在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品,欧美在线| 无人区码免费观看不卡| 网址你懂的国产日韩在线| 十八禁网站免费在线| 在线看三级毛片| 手机成人av网站| 十八禁网站免费在线| 两人在一起打扑克的视频| h日本视频在线播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美区成人在线视频| 成年女人永久免费观看视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久香蕉精品热| 亚洲无线在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 1000部很黄的大片| 欧美日韩乱码在线| 最新美女视频免费是黄的| 欧美+亚洲+日韩+国产| 51午夜福利影视在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久九九热精品免费| 在线国产一区二区在线| 国产精品av视频在线免费观看| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲精品在线美女| 我要搜黄色片| 九色国产91popny在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 看免费av毛片| avwww免费| 久久久国产成人免费| 99国产精品一区二区三区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 三级国产精品欧美在线观看| 一夜夜www| 精品一区二区三区av网在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 国产淫片久久久久久久久 | 身体一侧抽搐| 18禁在线播放成人免费| 日本一本二区三区精品| 美女免费视频网站| 国产淫片久久久久久久久 | 人妻夜夜爽99麻豆av| 性色av乱码一区二区三区2| 男女那种视频在线观看| 色在线成人网| 午夜精品久久久久久毛片777| 天天一区二区日本电影三级| 国产成人福利小说| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产av在哪里看| a在线观看视频网站| 中文资源天堂在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品综合久久久久久久免费| 中亚洲国语对白在线视频| 麻豆一二三区av精品| 一区福利在线观看| x7x7x7水蜜桃| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 18禁美女被吸乳视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 女警被强在线播放| 国产精品久久久久久久电影 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 99热这里只有是精品50| 最新中文字幕久久久久| 免费在线观看成人毛片| 亚洲精品在线美女| 免费搜索国产男女视频| 一本综合久久免费| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产三级中文精品| 免费观看的影片在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美一级毛片孕妇| 国产高清视频在线播放一区| 中国美女看黄片| 国产伦在线观看视频一区| www.999成人在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲色图av天堂| 午夜福利免费观看在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 无人区码免费观看不卡| 999久久久精品免费观看国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 99久久精品一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产三级中文精品| 日韩亚洲欧美综合| 麻豆成人av在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产av麻豆久久久久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产一区二区三区视频了| 久久亚洲真实| 欧美精品啪啪一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 看片在线看免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 美女高潮的动态| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品久久视频播放| 国产毛片a区久久久久| 天天添夜夜摸| 国产伦精品一区二区三区四那| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 久久人人精品亚洲av| 国产真实乱freesex| 欧美区成人在线视频| av视频在线观看入口| 啦啦啦韩国在线观看视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 日韩免费av在线播放| 99riav亚洲国产免费| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美一区二区亚洲| 在线国产一区二区在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 久久精品国产清高在天天线| 色尼玛亚洲综合影院| 精品久久久久久,| 一级作爱视频免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美在线一区亚洲| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 看免费av毛片| 一二三四社区在线视频社区8| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精华国产精华精| 国产免费男女视频| 极品教师在线免费播放| 9191精品国产免费久久| 国产精品爽爽va在线观看网站| 免费在线观看日本一区| 国产成年人精品一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜福利欧美成人| 99久久综合精品五月天人人| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美性感艳星| 色综合婷婷激情| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 精华霜和精华液先用哪个| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲av五月六月丁香网| 天美传媒精品一区二区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 日本免费a在线| 9191精品国产免费久久| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品av视频在线免费观看| 人妻久久中文字幕网| 美女大奶头视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产老妇女一区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产午夜精品论理片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 波多野结衣巨乳人妻| 国产一区二区在线av高清观看| 99热这里只有是精品50| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美最黄视频在线播放免费| 九色成人免费人妻av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 在线免费观看的www视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲av美国av| 看免费av毛片| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久久久久久中文| 久久久久久久午夜电影| 少妇的逼水好多| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产激情欧美一区二区| 国产一区二区在线av高清观看| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 成人精品一区二区免费| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久久久久久中文| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 免费在线观看日本一区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 色综合站精品国产| 亚洲国产欧美网| 欧美性猛交黑人性爽| 色综合婷婷激情| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲熟妇熟女久久| 99久久精品一区二区三区| 天堂√8在线中文| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久亚洲精品不卡| 老司机福利观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产成人欧美在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 99热这里只有精品一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日本一本二区三区精品| 久久香蕉国产精品| 亚洲无线观看免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 特大巨黑吊av在线直播| 在线观看一区二区三区| 国产高清videossex| 午夜免费观看网址| 中文在线观看免费www的网站| 99热只有精品国产| 免费一级毛片在线播放高清视频| 极品教师在线免费播放| 欧美乱色亚洲激情| 丝袜美腿在线中文| 在线天堂最新版资源| 欧美成狂野欧美在线观看| av在线蜜桃| 国产淫片久久久久久久久 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲av美国av| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美日韩乱码在线| h日本视频在线播放| 午夜老司机福利剧场| 国产午夜福利久久久久久| av女优亚洲男人天堂| 日本免费一区二区三区高清不卡| av片东京热男人的天堂| 精华霜和精华液先用哪个| 内地一区二区视频在线| 国产成年人精品一区二区| 免费人成在线观看视频色| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美乱色亚洲激情| 久久精品91无色码中文字幕| 色哟哟哟哟哟哟| 黄色片一级片一级黄色片| 精品电影一区二区在线| 欧美3d第一页| 国产主播在线观看一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 露出奶头的视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 丝袜美腿在线中文| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜激情福利司机影院| 3wmmmm亚洲av在线观看| 九色国产91popny在线| 亚洲内射少妇av| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 天美传媒精品一区二区| 国产老妇女一区| 久9热在线精品视频| 成人国产一区最新在线观看| 99久国产av精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| av片东京热男人的天堂| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久这里只有精品中国| 制服人妻中文乱码| 国产精品日韩av在线免费观看| 91在线观看av| 老鸭窝网址在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 乱人视频在线观看| 亚洲在线观看片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产单亲对白刺激| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产精品成人综合色| 一本综合久久免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 中文在线观看免费www的网站| 麻豆一二三区av精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| tocl精华| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久九九热精品免费| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品久久久久久久久免 | 色老头精品视频在线观看| 国产精品 国内视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 女警被强在线播放| 国产成人系列免费观看| 国产精品一区二区免费欧美| 乱人视频在线观看| 波野结衣二区三区在线 | 在线观看免费视频日本深夜| bbb黄色大片| 欧美在线黄色| 国产成人a区在线观看| 国产精品三级大全| 天天一区二区日本电影三级| 久久九九热精品免费| 精品人妻1区二区| 亚洲不卡免费看| 久久精品影院6| 国产午夜精品论理片| 国模一区二区三区四区视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 在线观看舔阴道视频| 久久亚洲真实| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜福利成人在线免费观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 岛国在线观看网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 九色国产91popny在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲成人久久爱视频| 国产一区在线观看成人免费| 一级毛片女人18水好多| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本黄大片高清| 欧美中文日本在线观看视频| 精品乱码久久久久久99久播| 91九色精品人成在线观看| 亚洲五月天丁香| 91字幕亚洲| 亚洲国产中文字幕在线视频| 变态另类丝袜制服| 少妇高潮的动态图| 午夜精品久久久久久毛片777| av国产免费在线观看| 99热这里只有是精品50| 日本免费a在线| 欧美三级亚洲精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产午夜精品论理片| 久久久久九九精品影院| 日本与韩国留学比较| 最新美女视频免费是黄的| av在线天堂中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品无人区乱码1区二区| 黄色女人牲交| 9191精品国产免费久久| 最后的刺客免费高清国语| 波多野结衣高清无吗| 久久久久精品国产欧美久久久| 一个人免费在线观看的高清视频| 麻豆成人av在线观看| 在线看三级毛片| 高清日韩中文字幕在线| 在线观看舔阴道视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一本精品99久久精品77| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 999久久久精品免费观看国产| 欧美中文日本在线观看视频| 一区福利在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品亚洲av一区麻豆| 丰满人妻一区二区三区视频av | 午夜福利免费观看在线| 精品不卡国产一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美激情久久久久久爽电影| bbb黄色大片| 久久久久久久久大av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久久色成人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日韩欧美在线乱码| 国产精华一区二区三区| 一级a爱片免费观看的视频| 国产色婷婷99| 夜夜爽天天搞| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产高清有码在线观看视频| 国产乱人视频| 99久久成人亚洲精品观看| 香蕉丝袜av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 校园春色视频在线观看| or卡值多少钱| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品永久免费网站| 欧美性感艳星| 我的老师免费观看完整版| 色av中文字幕| 亚洲av电影在线进入| 动漫黄色视频在线观看| 校园春色视频在线观看| or卡值多少钱| 不卡一级毛片| 内地一区二区视频在线| av在线天堂中文字幕| 1000部很黄的大片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 免费看美女性在线毛片视频| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美国产日韩亚洲一区| 免费观看人在逋| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜久久久久精精品| 我要搜黄色片| 在线观看av片永久免费下载| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 两个人视频免费观看高清| 91字幕亚洲| 亚洲人成网站高清观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 男女午夜视频在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久久国内视频| 亚洲精品成人久久久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 青草久久国产| 草草在线视频免费看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv|