慢性乙型肝炎患者外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細胞檢測的臨床意義分析

徐燕 任建敏 劉思宇

[摘要] 目的 探析慢性乙型肝炎患者外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細胞（Treg）檢測的臨床意義。 方法 選取2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者為觀察組，選取同期體檢的60例健康者為對照組，均給予外周血檢測，比較兩組檢驗結(jié)果。 結(jié)果 觀察組Treg、TrI、Th17百分比均高于對照組，差異顯著（P<0.05）。觀察組IL-10、IL-17水平高于對照組，差異顯著（P<0.05）。觀察組CD3+、CD4+百分比低于對照組，CD8+百分比、CD4+ C25+ Treg百分比高于對照組，差異顯著（P<0.05）。 結(jié)論 慢性乙型肝炎患者外周血Treg水平明顯升高，且Th17參與致病過程，因此，通過臨床檢測及調(diào)控，有助于提高患者診治效果，臨床應(yīng)用與借鑒價值極高。

[關(guān)鍵詞] 慢性乙型肝炎;外周血;調(diào)節(jié)性T淋巴細胞;病因

[中圖分類號] R446? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2018）35-0139-03

[Abstract] Objective To explore the clinical significance of detection of peripheral blood regulatory T lymphocytes（Treg）in patients with chronic hepatitis B. Methods Sixty patients with chronic hepatitis B admitted to our hospital from January 2016 to June 2018 were enrolled in the observation group. Another 60 healthy subjects who underwent physical examination during the same time period were selected as the control group. All subjects were tested for peripheral blood and the results of the two groups were compared. Results The percentages of Treg， TrI and Th17 in the observation group were significantly higher than those in the control group （P<0.05）. The levels of IL-10 and IL-17 in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）. The percentages of CD3+ and CD4+ in the observation group were lower than those in the control group， and the percentages of CD8+ and CD4+ C25+ Treg were higher than those of the control group， and the differences were significant（P<0.05）. Conclusion The level of Treg in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B is significantly increased， and Th17 is involved in the pathogenesis process. Therefore， through clinical detection and regulation， it is helpful to improve the diagnosis and treatment of patients， and the clinical application and reference value are extremely high.

[Key words] Chronic hepatitis B; Peripheral blood; Regulatory T lymphocytes; Etiology

慢性乙型肝炎是一種全球性流行疾病，發(fā)病機制十分復(fù)雜。有關(guān)學(xué)者研究認為，乙型肝炎病毒不會直接損傷肝細胞，引起肝細胞損傷的決定性因素是肝細胞表面乙型肝炎病毒抗原引起的宿主細胞免疫應(yīng)答[1-3]。經(jīng)臨床研究發(fā)現(xiàn)，外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細胞（Treg）數(shù)量變化可在一定程度上體現(xiàn)細胞免疫狀態(tài)[4-6]。因此，在慢性乙型肝炎患者診治中，可加強對外周血Treg進行檢測，從而確保臨床診治安全、可靠。本文現(xiàn)對2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者予以研究，探討外周血Treg的檢測意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2018年6月我院收治的60例慢性乙型肝炎患者為觀察組，選取同期體檢的60例健康者為對照組。觀察組中，女29例，男31例;年齡24～69歲，平均（40.45±6.52）歲。納入標準：均符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中有關(guān)診斷標準。排除標準：合并代謝性肝病或乙型肝炎以外的其他類型肝炎;伴有其他自身免疫性疾病;肝癌及其他腫瘤;3個月內(nèi)使用過免疫調(diào)節(jié)劑或者激素。對照組中，女27例，男33例;年齡23～69歲，平均（40.15±6.13）歲;ALT平均（19.40±4.55）U/L，AST平均（15.45±3.75）U/L。兩組受檢者性別、年齡資料比較，無顯著性差異（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1儀器與試劑? GF 500流式細胞計數(shù)儀;高速冷凍離心機;連續(xù)可調(diào)移液器;FZQ-2型漩渦混合器;淋巴細胞分離劑;CD3+、CD4+、CD8+及CD4+ C25+試劑。

1.2.2 檢測方法? 采用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管采集全血1 mL，吸取CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴細胞三色試劑10 μL;吸取CD4+ C25+試劑10 μL，分別放入潔凈試管中，加入全血50 μL，充分混合均勻，放于避光、室溫處，時間為20 min。添加紅細胞裂解液1 mL，充分混合均勻，放于避光、室溫處，時間為15 min。肉眼可見試管中紅色液體透亮，表示紅細胞徹底裂解，添加磷酸緩沖鹽溶液2 mL，充分混合均勻，給予離心處理，離心率1000 r/min，時間為5 min，除去上層清液，用吸水紙吸干管口殘余液體。向試管底部白色沉淀中添加磷酸緩沖鹽溶液0.5 mL，充分混合均勻，給予流式細胞計數(shù)儀檢測。

1.3 觀察指標

比較兩組檢驗結(jié)果。檢驗指標：調(diào)節(jié)性T淋巴細胞（Treg）、Ⅰ型調(diào)節(jié)性T淋巴細胞（TrI）、輔助性T淋巴細胞17（Th17）、白細胞介素-10（IL-10）、白細胞介素-17（IL-17）、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ C25+。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用軟件SPSS 20.0處理臨床數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用[n（%）]表示，予以χ2檢驗，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Treg、TrI、Th17表達比較

觀察組Treg、TrI、Th17百分比均高于對照組，差異顯著（P<0.05）。見表1。

2.2兩組IL-10、IL-17表達比較

觀察組IL-10、IL-17水平高于對照組，差異顯著（P<0.05）。見表2。

2.3兩組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ C25+表達比較

觀察組CD3+、CD4+百分比低于對照組，CD8+百分比、CD4+ C25+百分比高于對照組，差異顯著（P<0.05）。

3 討論

慢性乙型肝炎指的就是乙型肝炎病毒檢驗呈陽性，病程超過6個月或者發(fā)病日期不明而臨床出現(xiàn)慢性肝炎的病癥[8]。經(jīng)相關(guān)研究顯示[9-11]，引發(fā)慢性乙型肝炎的原因主要包括以下幾點：（1）家族性傳播。針對我國乙型肝炎高發(fā)的現(xiàn)狀來說，家族性傳播是主要原因，其中母嬰垂直傳播最為常見。一般而言，如果母親乙型肝炎e抗原陽性，那么未注射乙型肝炎疫苗的子女多數(shù)為乙型肝炎病毒攜帶者。而精液能夠檢測出乙型肝炎病毒，所以，可經(jīng)由性傳播。上述情況是導(dǎo)致我國乙型肝炎家庭聚集的重要因素。（2）嬰幼兒期感染病毒。最初感染乙型肝炎病毒的年齡與慢性乙型肝炎的關(guān)系十分密切。胎兒、新生兒一旦感染乙型肝炎病毒，約90%～95%會成為慢性乙型肝炎病毒攜帶者;兒童時期感染乙型肝炎病毒，約20%會成為慢性乙型肝炎病毒攜帶者;成年人感染乙型肝炎病毒，約3%～6%會成為慢性乙型肝炎病毒攜帶者[12-14]。（3）預(yù)防意識不強。在乙型肝炎垂直傳播中，乙型肝炎疫苗是主要手段。因為經(jīng)濟條件有限，預(yù)防意識不強，致使乙型肝炎疫苗接種工作落實不到位，導(dǎo)致乙型肝炎預(yù)防工作很難貫徹實施，在一定程度上增加了慢性乙型肝炎病例[15-16]。（4）免疫功能低下。白血病、腎移植、腫瘤等患者感染乙型肝炎病毒后，易進展為慢性乙型肝炎。乙型肝炎發(fā)病急性期患者應(yīng)用腎上腺糖皮質(zhì)激素等治療后，導(dǎo)致患者體內(nèi)免疫平衡受到破壞，進而使急性肝炎轉(zhuǎn)變成慢性乙型肝炎[17]。

慢性乙型肝炎的潛伏期通常在6周～6個月之間。潛伏期指的就是從肝炎病毒侵入到臨床出現(xiàn)癥狀之前。在潛伏期中，根據(jù)病原體種類、毒力、數(shù)量及人體免疫狀態(tài)差異，長短不一[18]。經(jīng)臨床研究顯示[19-20]，慢性乙型肝炎的臨床表現(xiàn)主要包括以下方面：（1）全身表現(xiàn)。身體乏力，易疲勞，且伴有輕微發(fā)熱癥狀。失眠、多夢等癥狀可能與此有關(guān)。（2）消化道表現(xiàn)。肝功能異常，膽汁分泌減少，常出現(xiàn)惡心、厭食、腹脹、上腹不適等癥狀。（3）黃疸。病情嚴重時，肝功能受損，膽紅素攝取、分泌、結(jié)合、排泄等障礙，血液中膽紅素水平升高。黃疸最初表現(xiàn)為膽紅素經(jīng)由尿液排出，尿液呈黃色。血液中膽紅素水平持續(xù)升高，導(dǎo)致皮膚、眼睛黃染。因為膽汁酸排出障礙，導(dǎo)致血液中膽汁酸水平升高，沉積在皮膚，刺激末梢神經(jīng)，導(dǎo)致皮膚瘙癢。（4）肝區(qū)疼痛。慢性乙型肝炎通常無劇烈疼痛，部分患者出現(xiàn)右季肋、右上腹隱痛、不適、壓痛。倘若肝區(qū)疼痛劇烈，應(yīng)警惕是否為胃腸疾病、膽道疾病及肝癌，以免誤診[21-22]。本研究顯示，觀察組Treg、TrI、Th17百分比及IL-10、IL-17水平均高于對照組，差異顯著（P<0.05），慢性乙型肝炎患者外周血中Treg、Th17高表達與有關(guān)文獻報道十分相似，而TrI高表達則首次在報道中提出。盡管有關(guān)IL-10高表達是否源自TrI有待證實，但在慢性乙型肝炎疾病進展中，TrI可能發(fā)揮了重要作用。TrI是一種可產(chǎn)生高濃度IL-10的Treg及Th17表達失衡受到了有關(guān)研究學(xué)者高度重視，IL-10是一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的抑炎因子，在眾多免疫性疾病中發(fā)揮了重要作用，可抑制幼稚型T淋巴細胞分化成Th17。所以，TrI、Th17表達情況與慢性乙型肝炎病情程度呈正相關(guān)。此外，T淋巴細胞是人體的主要免疫細胞，其數(shù)量變化可體現(xiàn)機體免疫水平。CD3+水平可體現(xiàn)機體整體免疫狀態(tài);在免疫應(yīng)答中，CD4+具有清除病毒的作用;CD8+ T淋巴細胞可激活與抑制嚴格依賴CD4+ T淋巴細胞。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[23-25]，CD4+ C25+能夠抑制乙型肝炎病毒細胞增殖，降低其活性。本研究提示，觀察組CD3+、CD4+百分比低于對照組，CD8+百分比高于對照組，差異顯著（P<0.05）。由此說明，相較于健康者，慢性乙型肝炎患者的CD3+、CD4+百分比明顯降低，CD8+百分比明顯升高，與相關(guān)文獻報道十分相似。CD3+百分比降低原因為乙型肝炎病毒攜帶者血清中DNA載量升高，在一定抗原刺激后，導(dǎo)致T淋巴細胞凋亡，降低其水平;CD4+ 百分比降低原因為長期感染乙型肝炎病毒，導(dǎo)致T淋巴細胞大量損耗，使其水平降低;CD8+百分比升高原因為乙型肝炎病毒抗原慢性刺激，致使其水平升高。此外，本研究提示，觀察組CD4+ C25+百分比高于對照組，差異顯著（P<0.05）。由此說明，CD4+ C25+可對乙型肝炎病毒特異性免疫應(yīng)答予以抑制，導(dǎo)致機體不能有效抵抗病毒，進而持續(xù)感染。所以，CD4+ C25+百分比升高，可作為慢性乙型肝炎診斷的參考指標。

綜上所述，在慢性乙型肝炎診斷中，外周血Treg檢測意義重大，值得臨床應(yīng)用與借鑒。

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（收稿日期：2018-08-08）