營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化型奶片對(duì)小鼠免疫功能的影響

包怡紅 孫義玄

摘 要：本文針對(duì)含有牛初乳粉的自制奶片產(chǎn)品進(jìn)行功能性研究，其免疫球蛋白IgG含量8%。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，對(duì)本品進(jìn)行增強(qiáng)免疫力功能性的評(píng)價(jià)。結(jié)果表明該產(chǎn)品可明顯增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高小鼠的半數(shù)溶血值（HC50），增加小鼠的碳廓清功能，增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞的活性和腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。由此可見，該奶片可增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性，即該奶片具有增強(qiáng)免疫力功能的作用。

關(guān)鍵詞：免疫球蛋白；IgG；增強(qiáng)免疫力

中圖分類號(hào)：TS201 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-2064（2018）22-0179-03

IgG是免疫球蛋白的一種，是人和動(dòng)物血液中含量最高的免疫球蛋白[1]。IgG是動(dòng)物機(jī)體在自然感染和主動(dòng)免疫之后所產(chǎn)生的主要抗體，其在動(dòng)物體內(nèi)具有重要的免疫調(diào)節(jié)和生理調(diào)節(jié)的作用，是動(dòng)物體內(nèi)免疫系統(tǒng)最為關(guān)鍵的組成物質(zhì)之一[2]。IgG能夠結(jié)合、凝集抗原，具有中和毒素和病原微生物（如病毒）的作用，是母體向幼崽傳遞特異性免疫力的主要載體[3]。國(guó)內(nèi)外很多的研究表明，免疫球蛋白IgG對(duì)犢牛和人體的免疫功能有影響。如Gutzwiller對(duì)初生小牛腹瀉情況的研究表明，從出生第二天開始用添加初乳成分的牛乳喂養(yǎng)小牛，能有效防止新生牛腹瀉的發(fā)生[4]。Sugisawa等發(fā)現(xiàn)牛初乳能促進(jìn)外周血中的中性粒細(xì)胞發(fā)揮吞噬作用，而且這種激活作用是對(duì)初乳濃度和其中IgG濃度依賴的，研究表明牛初乳能強(qiáng)烈激活中性粒細(xì)胞的吞噬作用，從而在新生兒的非特異性免疫過程中發(fā)揮一定的促進(jìn)作用[5]。本研究對(duì)自制的奶片產(chǎn)品進(jìn)行動(dòng)物功能性試驗(yàn)，以驗(yàn)證該產(chǎn)品對(duì)機(jī)體免疫力功能的影響，為具有功能性的乳制品開發(fā)研究奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品

奶片，自制產(chǎn)品，免疫球蛋白IgG含量為8%，樣品為乳白色粉末（產(chǎn)品為片劑，為試驗(yàn)方便，采用壓片前物料，成分與定型產(chǎn)品相同），感官檢查未見異常。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICR小白鼠，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司。選擇健康雌性小鼠，體重18～22g，根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目共分五組，每組有40只小鼠，再隨機(jī)分為4小組，每組10只，分別開展ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定、碳廓清實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物臟/體比值測(cè)定、半數(shù)溶血值（HC50）測(cè)定和抗體生成細(xì)胞檢測(cè)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。

1.3 劑量設(shè)計(jì)

奶片產(chǎn)品中免疫球蛋白IgG含量為8%，推薦量每人每日2片，每片1g，即每日食用有效成分免疫球蛋白IgG為0.16g，如成人體重以60kg計(jì)，則相當(dāng)于0.0027g/kg·BW。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.027g/kg·BW（中劑量），上、下各設(shè)一個(gè)劑量組：0.081g/kg·BW（高劑量，人體推薦量的30倍）和0.014g/kg·BW（低劑量，人體推薦量的5倍）。按動(dòng)物體重的2%灌胃容積進(jìn)行灌胃，實(shí)驗(yàn)組的溶劑均為蒸餾水，設(shè)蒸餾水為陰性對(duì)照組，持續(xù)灌胃30天后測(cè)各項(xiàng)免疫指標(biāo)。

1.4 儀器與試劑

動(dòng)物天平、離心機(jī)、顯微鏡、722分光光度計(jì)、二氧化碳培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀等。

無菌手術(shù)器械、微量注射器（25μL）、血色素吸管、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、游標(biāo)卡尺（精密度0.01mm）、24孔培養(yǎng)板等。

生理鹽水、綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、雞紅細(xì)胞、小牛血清、SA緩沖液、補(bǔ)體（豚鼠血清）、都氏試劑（碳酸氫鈉1.0g，高鐵氰化鉀0.2g，氰化鉀0.05g，加蒸餾水至1000mL）、Hanks液（pH7.2～7.4）、RPMI 1640培養(yǎng)液、印度墨汁、氧化型輔酶I、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液（pH8.2）、YAC-1細(xì)胞、1% NP40、2-巰基乙醇（2-ME）、鹽酸、刀豆蛋白A（ConA）、異丙醇、MTT、PBS緩沖液（pH7.2～7.4）、Giemsa染液、青霉素、鏈霉素等。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

本研究根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003版[6]中對(duì)增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)項(xiàng)目的要求，分別進(jìn)行細(xì)胞免疫功能測(cè)試，包括：ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（MTT法）、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（足跖增厚法）（DTH）；體液免疫功能測(cè)試，包括：抗體生成細(xì)胞檢測(cè)（Jerne改良玻片法）、半數(shù)溶血值（HC50）的測(cè)定；單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)試，包括：小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）；NK細(xì)胞活性測(cè)定（乳酸膠氫酶LDH測(cè)定法）和臟器/體重比值測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

用spss軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，用方差分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果

2.1 奶片對(duì)小鼠體重的影響

給予小鼠奶片樣品30d后，對(duì)小鼠體重變化的影響見表1。

由表1結(jié)果可見，各劑量組試驗(yàn)動(dòng)物的初始體重和結(jié)束體重與對(duì)照組相比較沒有顯著性差異（P>0.05），表明本實(shí)驗(yàn)條件下奶片產(chǎn)品對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)沒有影響。

2.2 奶片對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)臟器/體重比值的影響見表2。

由表2結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，其脾臟/體重比值和胸腺/體重比值在低、中、高劑量組與對(duì)照組間比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產(chǎn)品對(duì)小鼠的臟器/體重比值沒有影響。

2.3 奶片對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

給予小鼠奶片產(chǎn)品30d對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化影響見表3。

由表3結(jié)果可見，經(jīng)口給予不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各劑量組的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能與陰性對(duì)照組比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。

2.4 奶片對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響見表4。

由表4結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其足跖厚度在注射SRBC前后差值，高、中、低劑量組與對(duì)照組間比較有極顯著性差異（P<0.01），表明奶片產(chǎn)品能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

2.5 奶片對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響見表5。

由表5結(jié)果可見，給予不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各劑量組的小鼠抗體生成細(xì)胞與對(duì)照組間比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠抗體生成細(xì)胞功能。

2.6 奶片對(duì)小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響見表6。

由表6結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高、中、低劑量組的半數(shù)溶血值（HC50）與對(duì)照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），表明奶片產(chǎn)品能提高小鼠半數(shù)溶血值。

2.7 奶片對(duì)小鼠碳廓清功能的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠碳廓清能力的影響見表7。

由表7結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高、中、低劑量組吞噬指數(shù)與對(duì)照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），表明奶片產(chǎn)品能夠增加小鼠的碳廓清功能。

2.8 奶片對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響見表8。

由表8結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高、中、低劑量組吞噬率和吞噬指數(shù)與對(duì)照組比較有極顯著性差異（P<0.01），表明奶片產(chǎn)品能夠增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

2.9 免疫球蛋白IgG對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響

經(jīng)口給予小鼠奶片產(chǎn)品30d后，對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響見表9。

由表9結(jié)果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高、中、低劑量組NK細(xì)胞活性與對(duì)照組相比較有極顯著性差異（P<0.01）。表明奶片產(chǎn)品能夠增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞的活性。

3 結(jié)語(yǔ)

經(jīng)口投予小鼠不同劑量的奶片產(chǎn)品30d，該奶片產(chǎn)品中含免疫球蛋白IgG為8%，分別進(jìn)行了四類檢驗(yàn)共計(jì)7項(xiàng)試驗(yàn)，即細(xì)胞免疫功能（小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)）、體液免疫功能（抗體生成細(xì)胞檢測(cè)和半數(shù)溶血值（HC50）的測(cè)定）、單核-巨噬細(xì)胞功能（小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）以及NK細(xì)胞活性測(cè)定。結(jié)果表明該奶片產(chǎn)品可以明顯增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并提高小鼠的半數(shù)溶血值（HC50），可以增加小鼠的碳廓清功能，也可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。由此可見，該奶片產(chǎn)品可增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性，即該奶片產(chǎn)品具有增強(qiáng)免疫力功能的作用。

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