金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質、脂質代謝及蛋黃膽固醇含量的影響

龍 彬 李周權 董國忠 王慶爭 余忠穩(wěn)

(西南大學動物科技學院，重慶 400716)

金銀花是忍冬科忍冬屬多種植物的干燥花蕾，是我國的傳統(tǒng)中藥之一[1]。金銀花主要化學成分為酚酸、黃酮、揮發(fā)類油和三萜皂苷類等[2-3]。金銀花提取物主要的活性成分是綠原酸(chlorogenic acid,CGA)。研究表明，CGA具有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，可以增強機體免疫力[4]；最新研究表明，CGA在調控機體的糖脂代謝方面有顯著作用[5]。目前關于金銀花提取物對蛋雞蛋黃膽固醇含量和脂質代謝的影響鮮有報道。因此，本研究以34周齡京粉2號蛋雞為試驗動物，在飼糧中添加不同水平的金銀花提取物，分別測定蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質、脂質代謝和蛋黃膽固醇含量，并探討通過添加金銀花提取物來降低雞蛋膽固醇含量的可能性，為金銀花提取物在蛋雞生產(chǎn)中的應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

金銀花提取物購于湖南綠蔓生物科技股份有限公司，有效成分CGA含量為25%。

1.2 試驗設計及飼養(yǎng)管理

試驗選用同一雞舍內產(chǎn)蛋率相近、體重相近、健康狀態(tài)良好的34周齡京粉2號蛋雞600只，隨機分成4組，每組5個重復，每個重復30只雞。對照組飼喂基礎飼糧(不含金銀花提取物)，試驗組分別飼喂在基礎飼糧中添加100、200和300 mg/kg金銀花提取物(有效成分CGA含量分別為25、50和75 mg/kg)的試驗飼糧?；A飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)每千克預混料包含 One kg of premix contained the following: VA 4 000 000 IU，VD3600 000 IU，VE 20 g，VK3500 mg，VB150 mg，VB23 g，煙酸 nicotinic acid 1 500 mg，泛酸 pantothenic acid 70 mg，葉酸 folic acid 500 mg，氯化膽堿 choline chloride 20 g，F(xiàn)e 60 g，Cu 10 g，Mn 50 g，Zn 70 g，Se 25 mg。

2)營養(yǎng)水平為計算值。Nutrient levels were calculated values.

試驗期間，每天06:30和14:30各喂飼料1次。采用3層階梯式籠養(yǎng)方式，自由采食、飲水。每天光照16 h，并清糞1次。試驗分為預試期7 d和正試期28 d，共35 d。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生產(chǎn)性能

以重復為單位每天記錄蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、投料量、剩余料量、雞只存欄數(shù)、破軟蛋數(shù)，并計算平均蛋重、產(chǎn)蛋率、平均日采食量、破軟蛋率、料蛋比。

1.3.2 蛋品質

試驗的最后1天，分別從每組中隨機采取20個雞蛋(每重復4個)用于測定雞蛋物理品質指標，測定指標包括蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋黃顏色、蛋殼厚度、哈夫單位。測定儀器包括蛋質檢測儀(沈陽富士平工業(yè)有限公司)、蛋殼強度測定儀(沈陽富士平工業(yè)有限公司)、羅氏比色扇(美國羅氏公司)。

1.3.3 蛋黃膽固醇含量

從每組中隨機采取10個雞蛋(每重復2個)測定蛋黃膽固醇含量。煮熟雞蛋，研磨均勻，稱取蛋黃1 g，用甲醇-氯仿溶液(1∶2)研磨至無明顯顆粒，混合8 min，過濾至10 mL容量瓶，并補充甲醇-氯仿溶液定容，待用。分別取0.02 mL蛋黃濾液、膽固醇標準液、甲醇-氯仿溶液加入樣品管、標準管和空白管。在上述3支試管中加入鄰苯二甲醛試劑3 mL，濃硫酸2 mL，混勻，冷卻。用T-6紫外可見分光光度計(北京普析)以空白管調零，在560 nm處比色，計算蛋黃膽固醇含量[6]。

1.3.4 脂質代謝

試驗結束時，每個重復中隨機選取1只雞，翅靜脈采血，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，于-20 ℃保存。血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)差異采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法進行多重比較，結果以平均值±標準差表示。

2 結 果

2.1 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，各試驗組的產(chǎn)蛋率、料蛋比和破軟蛋率與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。平均蛋重隨著金銀花提取物水平的增加呈先降低后升高的趨勢，100和200 mg/kg組的平均蛋重與對照組相比無顯著差異(P>0.05)，300 mg/kg組的平均蛋重與對照組相比顯著增加(P<0.05)。300 mg/kg組的平均日采食量與對照組相比顯著增加(P<0.05)。

2.2 金銀花提取物對蛋雞蛋品質的影響

由表3可知，與對照組相比，各試驗組的蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強度均無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比，各試驗組的哈氏單位均顯著提高(P<0.05)，100、200和300 mg/kg組分別提高了8.2%、6.2%和9.2%。

表2 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標相同字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，肩標不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with the different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表3 金銀花提取物對蛋雞蛋品質的影響

2.3 金銀花提取物對蛋雞脂質代謝和蛋黃膽固醇含量的影響

由表4可知，與對照組相比，各試驗組的血清TG含量顯著降低(P<0.05)；各試驗組的血清TC含量顯著降低(P<0.05)，300 mg/kg組下降最明顯為27.56%。血清HDL-C含量隨金銀花提取物水平升高而升高，200、300 mg/kg組的血清HDL-C含量顯著高于對照組(P<0.05)。與對照組相比，各試驗組血清LDL-C含量無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比，200和300 mg/kg組的蛋黃膽固醇含量顯著降低(P<0.05)，分別下降了8.17%和18.06%。

表4 金銀花提取物對蛋雞脂質代謝和蛋黃膽固醇含量的影響

3 討 論

3.1 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

本試驗結果表明，飼糧中添加300 mg/kg的金銀花提取物可以顯著提高蛋雞平均日采食量和平均蛋重。金銀花提取物中的主要活性成分是CGA，CGA具有抗氧化性、抗菌、抗毒、提高免疫力等多種功能[7]。張瑞仙[8]研究顯示，在羅曼粉蛋雞飼糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0%金銀花，蛋雞的平均日采食量均分別提高了5.46%、8.20%、9.53%和9.63%，1.0%、1.5%和2.0%的添加量均顯著提高了產(chǎn)蛋率。黃濤等[9]在愛拔益加(AA)肉雞飼糧中添加0(對照)、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的杜仲葉CGA，結果發(fā)現(xiàn)，0.15%試驗組與對照組相比可以顯著提高7～14日齡和28～35日齡肉雞的平均日增重，0.05%和0.15%試驗組可分別降低28～35日齡肉雞料重比21.15%和19.34%。上述研究表明，CGA在改善動物生產(chǎn)性能方面具有積極作用。CGA改善動物生產(chǎn)性能可能是由于其具有較強的抗氧化能力，對脂質過氧化抑制有積極作用[10]。關炳烽等[11]試驗表明，金銀花提取物抗氧化能力與CGA含量相關，且其清除羥基自由基的能力優(yōu)于維生素C。Zang等[12]研究發(fā)現(xiàn)，CGA清除羥基的清除速率常數(shù)為7.73×109，認為CGA的抗氧化性可能與直接清除羥基自由基有關。李文娜等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CGA對超氧陰離子、羥基自由基、烷過氧自由基及1,1-二苯基-2-苦肼基等自由基有較強的清除作用，對烷過氧自由基、超氧陰離子的清除能力超過了維生素C。此外，CGA具有抗菌、抗病毒的能力，有助于提高家禽免疫力，從而改善生產(chǎn)性能。研究表明，CGA可以增強流感病毒抗原引發(fā)的T細胞增殖[14]，并且在大鼠的研究中發(fā)現(xiàn)CGA可以顯著提高其體內免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG)和白細胞介素-4(IL-4)含量[15]。馬力等[16]研究表明，CGA可顯著提高大鼠腸道固有層淋巴細胞中γ腫瘤壞死因子和α干擾素含量。

3.2 金銀花提取物對蛋雞蛋品質的影響

本試驗結果表明，試驗組蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強度與對照組相比均無顯著差異。各試驗組均顯著提高了雞蛋哈氏單位，說明金銀花提取物能夠提高蛋白高度，一定程度上有助于增強蛋白分泌。張瑞仙[8]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加0.5%和1.5%的金銀花粉可適當提高雞蛋哈氏單位，但差異并不顯著。雞蛋蛋白的分泌主要是在輸卵管的膨大部分，金銀花提取物可能在此對分泌產(chǎn)生影響，由于其活性物質CGA具有很好的抗氧化能力，有助于維持細胞膜的正常生理功能，這對分泌部位細胞膜可能具有積極作用，但其具體機制尚不完全清楚。邵洪等[17]認為，自由基會對氨基酸、多肽、蛋白質等進行修飾，促進蛋白質的降解，而金銀花提取物中含有的CGA對自由基有良好的清除作用。

3.3 金銀花提取物對蛋雞脂質代謝和蛋黃膽固醇含量的影響

蛋雞體內的膽固醇來源主要有2個途徑，第1個途徑是外源性的膽固醇(飼糧中的膽固醇)，由于蛋雞飼糧中通常不含膽固醇，所以這一途徑可忽略不計；第2個途徑是蛋雞自身合成，合成的主要部位是肝臟，在肝臟中合成蛋黃膽固醇的前體物質是極低密度脂蛋白和卵黃蛋白原，合成的蛋黃膽固醇通過血液循環(huán)進入卵巢沉積于蛋黃中[18]。蛋雞體內的膽固醇主要通過3種方式排出，其一是通過雞蛋排出，這是最主要的方式，大概占膽固醇的2/3；其二是由肝臟和腸道產(chǎn)生中性固醇以糞便形式排出體外；其三是在肝臟中氧化的膽固醇形成膽汁酸通過糞便排出[19]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，200和300 mg/kg組蛋黃膽固醇含量與對照組相比分別下降了8.17%和18.06%。金銀花提取物中主要活性物質CGA影響蛋雞脂肪代謝的原因可能有：1)通過影響膽固醇合成和分解的相關酶活性及相關基因表達來影響膽固醇水平。李文娜等[20]研究發(fā)現(xiàn)，杜仲葉CGA提取物抑制豬肝臟3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶的效價強于辛伐他丁。HMG-CoA還原酶是膽固醇合成過程中的限速酶。Ong等[21]給口服葡萄糖耐量試驗后的db/db小鼠飼喂含250 mg/kg CGA的飼糧，發(fā)現(xiàn)CGA可以通過激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)來改善葡萄糖和脂質代謝，從而影響AMPK-羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGR)通路。AMPK作用于HMGR肽鏈中Ser-871位點[22]。研究不同濃度5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷(AICAR)對肝細胞HMGR活性影響時發(fā)現(xiàn)，隨著AICAR濃度增加，AMPK呈劑量依賴性活化的同時，HMGR呈劑量依賴性失活[23-24]。所以CGA可能通過激活AMPK，導致HMGR磷酸化失活，使膽固醇合成受到顯著抑制。膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)是肝臟合成并促使膽固醇轉化為膽汁酸的限速酶[25]。Wan等[26]通過對大鼠飼喂正常飼糧、高膽固醇飼糧以及在高膽固醇飼糧的基礎上添加CGA(1和10 mg/kg)的飼糧的研究，發(fā)現(xiàn)與正常飼糧組相比，飼糧添加CGA后，CYP7A1表達有所增加，促使膽固醇轉化為膽汁酸。2)通過調節(jié)膽固醇調節(jié)元件結合蛋白(SREBPs)影響膽固醇合成。Murase等[27]發(fā)現(xiàn)，在Hepal-6細胞中添加5 μmol/L CGA可以下調乙酰輔酶A羧化酶、脂肪酸合成酶和SREBP-1c等mRNA表達。3)通過增強過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)來提高內源膽固醇的逆向轉運，增強膽汁酸排泄。Li等[28]給雄性黃金倉鼠飼喂高脂飼糧(含脂肪15%)，之后對試驗組每天按每千克體重80 mg的劑量在腹腔注射含CGA的溶劑，8周后CGA顯著提高了倉鼠肝臟PPAR-αmRNA和蛋白質的表達水平。Fruchart等[29]認為，PPARs的活化作用于與高密度脂蛋白(HDL)相關的5種基因，包括載脂蛋白A(apo-A)、載脂蛋白B(apo-B)、脂蛋白酯酶(LPL)、B族Ⅰ型清道夫受體(SR-BⅠ)和ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)，從而促進HDL形成，提高血清中HDL含量，促進膽固醇逆向轉運的過程。本研究結果表明，金銀花提取物能顯著降低血清中TC和TG含量，且300 mg/kg組效果最好。200和300 mg/kg組均能提高血清HDL-C含量，促進膽固醇的逆向轉運過程。

4 結 論

① 飼糧中添加300 mg/kg金銀花提取物可以顯著提高蛋雞平均蛋重和平均日采食量，且對蛋雞生產(chǎn)性能無不良影響。

② 飼糧中添加金銀花提取物可以顯著提高雞蛋哈氏單位。

③ 飼糧中添加金銀花提取物可通過提高血清HDL-C含量，促進膽固醇逆向轉運，降低蛋黃膽固醇含量。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: marcli@126.com