不同施肥和栽培措施對水稻土壤微生物多樣性的影響綜述

吳 晶， 王娟娟， 朱騰義， 惠 珊， 劉玲玲， 錢曉晴

(揚州大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇揚州 225100)

水稻在我國糧食生產(chǎn)中占據(jù)著非常重要的地位。水稻高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)研究受到廣泛關(guān)注，且取得了顯著進展。水稻土壤肥力與稻米的品質(zhì)和產(chǎn)量有著不可分割的關(guān)系，過去為了追求高產(chǎn)，盲目增施化肥農(nóng)藥，導(dǎo)致肥效下降，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本也不斷攀升，并直接導(dǎo)致稻田土壤理化性質(zhì)和生態(tài)環(huán)境惡化，制約了稻田土壤可持續(xù)生產(chǎn)能力[1]。土壤中化肥農(nóng)藥的施入，會使得土壤微生物的生存繁殖環(huán)境發(fā)生改變，進一步影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和土壤生態(tài)系統(tǒng)。土壤微生物分布廣、數(shù)量大、種類多，在土壤系統(tǒng)中占據(jù)著重要地位。它們參與土壤有機質(zhì)分解、腐殖質(zhì)合成，是土壤養(yǎng)分轉(zhuǎn)化和循環(huán)的動力，可維持土壤系統(tǒng)的穩(wěn)定性及抗干擾能力，對保持土壤健康和農(nóng)業(yè)可持續(xù)生產(chǎn)起著重要作用[2-3]。土壤生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定與土壤微生物多樣性有著密不可分的關(guān)系，一般來說，土壤微生物多樣性越高越有利于土壤功能和生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定[4]。

當前，越來越多的研究學(xué)者將水稻田地上部分植物農(nóng)業(yè)性狀改良的單一研究擴展到地下土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、功能的分析研究[5]，通過弄清水稻田養(yǎng)分供應(yīng)特征及機制，掌握土壤微生物調(diào)控技術(shù)，提高土壤肥力和生產(chǎn)力，維護和保障稻田土壤生態(tài)功能和生態(tài)系統(tǒng)健康，為我國水稻高產(chǎn)高效栽培技術(shù)的完整性和可持續(xù)利用提供理論支持。

1 水稻生長過程土壤微生物群落結(jié)構(gòu)與功能的動態(tài)特征

水稻生長過程中，土壤微生物群落結(jié)構(gòu)特征是一個動態(tài)變化過程。一方面，土壤微生物通過改變植物根系生理特征和根際環(huán)境，直接影響植物獲得養(yǎng)分的能力，例如Jetiyanon等在泰國試驗研究發(fā)現(xiàn)，接種菌株RS87的根際促生菌能夠替代水稻化肥50%的肥料施用量并能維持水稻產(chǎn)量[6]；另一方面，土壤微生物參與了非根際土壤的養(yǎng)分循環(huán)，包括養(yǎng)分生物固定和礦化分解、硝化和反硝化等過程[7]。氮在水稻生產(chǎn)中是最重要的營養(yǎng)元素，通過提高氮素利用率，可以減少過量氮肥施用造成的負面環(huán)境效應(yīng)。作為水稻產(chǎn)量提升的關(guān)鍵驅(qū)動力，與稻田氮素循環(huán)有關(guān)的微生物過程研究一直受到相當程度的關(guān)注。

氮循環(huán)中與土壤微生物直接關(guān)聯(lián)的有生物固氮、氮礦化、硝化和反硝化等過程。大氣中的氮氣不能直接被植物吸收，須要被合成氨后才能被植物吸收。能被植物吸收的是在土壤中被礦化成的小分子氮或氨，多種土壤微生物參與氮礦化這一過程的調(diào)控[8]。在硝化過程中，氨氧化微生物負責將氨氧化為亞硝酸鹽[9]。已有研究表明，氨氧化細菌 (ammonia oxidizing bacteria，AOB) 、氨氧化古菌 (ammonia oxidizing archaea，AOA)是硝化、反硝化過程中的重要功能微生物[10]，土壤中氮素的轉(zhuǎn)化與其種群結(jié)構(gòu)、豐度等因素相關(guān)[11-14]。這些微生物和土壤酶參與調(diào)節(jié)土壤氮轉(zhuǎn)化的生物化學(xué)過程，使得水稻在對氮素吸收利用時產(chǎn)生影響[15-16]。宋亞娜等利用PCR-DGGE、 DNA測序、熒光定量PCR等分子生物學(xué)技術(shù)對福建省紅壤稻田不同生育期內(nèi)土壤氨氧化細菌和氨氧化古菌的群落結(jié)構(gòu)動態(tài)變化進行探究，研究表明氨氧化細菌群落結(jié)構(gòu)在生長期中的變化程度不大，在苗期-分蘗期和孕穗期-成熟期2個階段間存在一定差異，而氨氧化古菌群落結(jié)構(gòu)變化明顯，不同的生育期均存在一定差異，隨著水稻生長發(fā)育土壤氨氧化古菌群落多樣性逐漸提高，孕穗期達到較高水平后變化平穩(wěn)，且稻田土壤AOA數(shù)量比AOB更多，與土壤硝化勢相關(guān)性也更高[17-18]。

2 不同施肥措施對水稻土壤微生物多樣性的影響

施肥是提高作物產(chǎn)量的重要農(nóng)業(yè)措施之一，施肥方式的不同會進一步影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和微生物生物量[19-20]。與此同時，土壤微生物參與養(yǎng)分的活化、轉(zhuǎn)化和運輸?shù)冗^程，一定程度上改變地上植物的生產(chǎn)力和養(yǎng)分利用率[21]。特別是對水稻土而言，其特有淹水種植還原環(huán)境下，不同施肥措施對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)影響研究不夠透徹[22]。

大量長期定位試驗結(jié)果顯示，有機肥、無機肥配施可以影響土壤的理化性質(zhì)，改善土壤結(jié)構(gòu)，土壤微生物數(shù)量和結(jié)構(gòu)因此會發(fā)生改變[23]。裴雪霞等采用PCR-DGGE方法對黃棕壤性水稻土進行試驗研究，結(jié)果表明，長期施肥能提高水稻土微生物生物量碳氮含量，并改變土壤中氨氧化細菌群落結(jié)構(gòu)[24]。Xun等研究發(fā)現(xiàn)，將部分化肥替換成豬糞或牛糞有機肥可以改善土壤細菌群落結(jié)構(gòu)，提高土壤養(yǎng)分的有效性，并能增加土壤微生物生物量[25]。同樣，趙軍等利用454焦磷酸測序法對施用豬糞有機肥的影響進行研究，得出了一致的結(jié)果[26]。

氮素營養(yǎng)是水稻產(chǎn)量和養(yǎng)分吸收的重要因素，植物的氮素利用一方面依靠氮攝入，另一方面如果碳源不足也會影響氮效率。水稻為了應(yīng)對根外銨態(tài)氮養(yǎng)分水平的變化，自身調(diào)節(jié)碳氮代謝水平，這表明保持碳氮平衡是水稻氮素利用效率須要考慮的因素[27]。農(nóng)作物秸稈是我國重要的農(nóng)業(yè)廢棄物資源，其中含有大量有機質(zhì)、氮、磷、鉀及中量、微量元素養(yǎng)分等，秸稈還田后逐漸腐解，向土壤中輸入的秸稈碳促進了土壤有機質(zhì)增加、微生物活性增強，改善了土壤團粒結(jié)構(gòu)，提高土壤肥力[28-30]。劉驊等研究發(fā)現(xiàn)，長期秸稈還田能提高土壤微生物多樣性及酶活性，并能有效調(diào)節(jié)土壤養(yǎng)分指標[31]。Doran研究表明，秸稈還田可使土壤中細菌、真菌、放線菌數(shù)量增加2～6倍，硝化和反硝化細菌數(shù)量增加更多[32-33]。Ocio等研究發(fā)現(xiàn)，在施加秸稈后7 d，土壤微生物生物量變?yōu)樵鹊?倍[34]。羅希茜等通過長期定位試驗，采用了Biolog測試板分析發(fā)現(xiàn)，秸稈還田有利于維持微生物物種的數(shù)量及多樣性，但群落均勻度會有所降低，這可能是由于長期秸稈還田促進了某些微生物種群的生長代謝[35]。韓新忠等通過大田試驗研究不同小麥秸稈還田量對水稻生長、土壤微生物量及酶活性的影響，結(jié)果表明，50%秸稈還田處理增產(chǎn)效果最顯著，由于土壤肥力的長期效應(yīng)及土壤微生物生理代謝影響的復(fù)雜性，合理秸稈還田量的選擇還須長期定位試驗研究[36]。

綠肥是用綠色植物體制成的肥料，綠肥作物生長較快，適應(yīng)性能力強，有機質(zhì)含量豐富，能改善土壤團粒結(jié)構(gòu)，是一種優(yōu)質(zhì)生物肥料[37-39]。例如，豆科的紫云英作為稻田主要綠肥作物之一，種植翻壓后改善土壤物理環(huán)境，提升土壤肥力，土壤微生物活性和多樣性增加[40-41]。高嵩涓基于長期雙季稻-冬綠肥定位試驗，應(yīng)用熒光定量PCR、高通量測序等技術(shù)，研究顯示，長期綠肥種植會改變硝化作用和反硝化作用的部分基因功能菌和其他功能菌屬的群落功能[42]。楊曾平等在對26年冬種不同綠肥的紅壤性水稻土研究時發(fā)現(xiàn)，長期冬種綠肥翻壓處理的水稻土中微生物種群數(shù)量、微生物生物量碳氮含量、土壤酶活性有所提高，冬種效果最明顯的植物是紫云英[37，43]。

3 不同栽培措施對水稻土壤微生物多樣性的影響

土壤微生物多樣性受多種因素影響，人類對土地和作物的管理也會使得其發(fā)生改變[44]。合理的栽培措施不僅能促進稻田生態(tài)系統(tǒng)的良性發(fā)展，而且可以提高作物產(chǎn)量和資源利用率。土壤微生物對不同栽培措施的響應(yīng)較為敏感，土壤理化性質(zhì)和微生物生長繁殖條件等變化均會影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和功能[45-46]。

作物連作后土壤環(huán)境會發(fā)生變化，土壤中有益的細菌、放線菌數(shù)量減少，土壤從細菌型向真菌型轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致病原微生物富集，土壤微生物多樣性水平降低，加重土傳病害的發(fā)生，最終表現(xiàn)為連作障礙[46]。而輪作措施中種植作物及殘茬會增強土壤中微生物活性，增加有益微生物。在耕作過程中，對土壤投入的能源物質(zhì)增多，則微生物數(shù)量會增加，對作物增產(chǎn)是有幫助的。張立成等通過長期定位試驗對稻—稻—油菜輪作土壤與稻—稻連作土壤比較后發(fā)現(xiàn)，輪作土壤顯著提高土壤微生物豐富度指數(shù)，據(jù)此分析稻—稻—油菜輪作栽培中這2種作物從土壤中吸收的養(yǎng)分不同，可以減少作物對土壤中同種元素吸收，避免出現(xiàn)單一養(yǎng)分貧乏的情況，更有利于土壤養(yǎng)分平衡和維持土壤微生物種群多樣性[47]。

目前，我國農(nóng)田耕地方式主要有傳統(tǒng)耕作(翻耕、深松耕)、少耕(淺耕、旋耕)和免耕(留茬、留茬覆蓋等)。國外的保護性耕作研究主要以覆蓋休閑式免耕和少耕模式為主，由于復(fù)種指數(shù)低加上一些除草成本，這種耕作方式國內(nèi)并不適用。張磊等對經(jīng)過10年半旱式免耕定位試驗的水稻土進行研究，結(jié)果表明實行壟作免耕法和廂作免耕的稻田土上層微生物生物量在水稻整個生育期內(nèi)穩(wěn)中有升[48]。陳冬林等研究在不同耕作方式下秸稈還田量對水稻土壤微生物的影響，結(jié)果表明土壤耕作有利于晚稻生育前期與后期土壤微生物活性的提高，耕翻使土壤中真菌、嫌氣性細菌數(shù)量減少[49]。秸稈深耕還田技術(shù)是將深耕和秸稈還田方式相結(jié)合，通過這種技術(shù)，使得土壤層頻繁擾動，通氣性增加，微生物與秸稈等有機質(zhì)接觸面積增大，營養(yǎng)源的豐富促進了微生物生長，提高了土壤酶活性[50]。趙亞麗等研究發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)耕作相比，深耕+秸稈還田處理土壤微生物數(shù)量、土壤酶活性分別提高了45.9%、34.1%[51]。

4 水稻土壤微生物多樣性的主要研究方法

傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法是將土壤中可培養(yǎng)微生物采用不同營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)，但有些微生物實驗室條件下不可被培養(yǎng)，擴大了生長繁殖快的微生物數(shù)量[52-54]。另一種Biolog微平板法是通過測定土壤微生物對不同單一碳源的利用與代謝能力差異，用于評價土壤微生物群落多樣性。蔚霞運用Biolog ECO微平板對轉(zhuǎn)Bt基因水稻在淹水條件秸稈還田后對土壤微生物功能多樣性的影響進行研究，其研究結(jié)果[55]與前人結(jié)果[56-57]存在部分差異，這可能與培養(yǎng)環(huán)境、水稻品種、選擇的微平板類型等因素相關(guān)，故建議其他方法與Biolog微平板法結(jié)合使用，以便得到更全面的結(jié)果[58]。

2005年以來，高通量測序技術(shù)飛躍式發(fā)展，已經(jīng)成為主流的分子生態(tài)學(xué)研究手段，可識別微生物資源和功能的程度由1%提高到30%左右，這為揭示養(yǎng)分循環(huán)的土壤生物功能和區(qū)域分異規(guī)律提供了契機[21]。微生物多樣性測序(別稱擴增自測序)是利用2/3代測序平臺，對16S rDNA/18S rDNA/ITS/功能基因等特定區(qū)段PCR產(chǎn)物進行高通量測序，突破傳統(tǒng)微生物不可培養(yǎng)的缺點，獲得環(huán)境樣本中微生物群落結(jié)構(gòu)、進化關(guān)系以及微生物與環(huán)境相關(guān)性等信息。穩(wěn)定性同位素核酸探針(DNA/RNA-based Stable Isotope probing，DNA/RNA-SIP)技術(shù)通過穩(wěn)定性同位素示蹤微生物DNA/RNA，能在分子水平上研究關(guān)鍵元素的微生物調(diào)控機制[59]。鄭燕等利用穩(wěn)定性同位素核酸探針技術(shù)對6種典型水稻土中的微生物甲烷氧化過程進行研究，有效地克服將復(fù)雜土壤環(huán)境中甲烷氧化過程及其微生物作用直接偶聯(lián)的技術(shù)難點[60]。郭赟利用穩(wěn)定性同位素示蹤技術(shù)結(jié)合454高通量測序，研究了長期施肥對活躍的AOA和AOB的影響[61]。

為了驗證后期結(jié)果(或目標基因)，熒光定量PCR技術(shù)是用于驗證測序結(jié)果是否可靠的常規(guī)方法之一。實時熒光定量PCR(qPCR)是一種在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過熒光信號實時監(jiān)控，最后未知的模板根據(jù)標準曲線進行定量分析的方法[62]。賈仲君等對典型水稻土微生物組的細胞數(shù)量進行研究，結(jié)果表明，傳統(tǒng)顯微計數(shù)結(jié)果顯著低于qPCR技術(shù)，最高可達3個數(shù)量級[63]。劉瓊等選取4種典型稻田土壤進行室內(nèi)培養(yǎng)試驗，選擇用qPCR、克隆測序以及末端限制性長度多態(tài)性分析(T-RFLP)技術(shù)對參與卡爾文循環(huán)基因cbbL和cbbM的豐度和群落結(jié)構(gòu)進行研究[64]。不論是傳統(tǒng)顯微技術(shù)方法還是現(xiàn)代分子生物學(xué)方法，應(yīng)該根據(jù)對象需求和各項技術(shù)優(yōu)勢，合理選擇研究技術(shù)方法，為土壤微生物演化規(guī)律和環(huán)境功能提供技術(shù)支撐。

5 展望

調(diào)控土壤微生物為主的管理措施將是未來研究高產(chǎn)高效農(nóng)業(yè)的發(fā)展趨勢，水稻作為我國主要的糧食作物，其發(fā)展若僅僅以“高產(chǎn)”為目的，其生產(chǎn)措施將不可持續(xù)。隨著人們對土壤微生物認知的加深，更加重視和農(nóng)學(xué)領(lǐng)域的融合，未來會有良好的發(fā)展前景。目前對水稻土壤微生物的研究還有許多問題尚未解決。因此，建議進一步加強以下幾個方面的研究：

(1)很多關(guān)于水稻土壤微生物的研究往往針對生長期中某一時期的土壤，對水稻整個生育期土壤微生物群落結(jié)構(gòu)進行比較綜合分析的研究較少。水稻的生長發(fā)育是在一個與土壤、微生物相互作用的環(huán)境系統(tǒng)下進行的，水稻發(fā)育勢必影響稻田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)，反之亦然。因此，對水稻生長期土壤微生物群落結(jié)構(gòu)與功能的動態(tài)特征研究很有必要，這為探究土壤中某些微生物基因及功能研究奠定理論基礎(chǔ)。

(2)微生物介導(dǎo)的水稻-土壤之間的養(yǎng)分循環(huán)和養(yǎng)分高效利用之間的機制，目前尚未研究透徹，有些對稻田土壤微生物的研究停留在對現(xiàn)象的描述，有待進一步探究。

(3)在分析水稻土壤微生物群落結(jié)構(gòu)時，單一的方法可能會導(dǎo)致對試驗結(jié)果的片面解釋，因此應(yīng)該采用多種技術(shù)相結(jié)合的方法。新一代454高通量測序、環(huán)境基因組學(xué)與SIP技術(shù)的結(jié)合與綜合應(yīng)用將成為熱點。

(4)水稻土的取樣對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響很大，很多時候會對土壤濕度、土壤溫度以及可利用殘留物和作物的季節(jié)變化等因素有所忽略，因而對水稻土微生物取樣標準的統(tǒng)一是須要關(guān)注的。

參考文獻：

[1]王丹英，彭 建，徐春梅，等. 油菜作綠肥還田的培肥效應(yīng)及對水稻生長的影響[J]. 中國水稻科學(xué)，2012，26(1)：85-91.

[2]Winding A，Hund-Rinke K，Rutgers M. The use of microorganisms in ecological soil classification and assessment concepts[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety，2005，62(2)：230-248.

[3]Zhao J，Zhang R F，Xue C，et al. Pyrosequencing reveals contrasting soil bacterial diversity and community structure of two main winter wheat cropping systems in China[J]. Microbial Ecology，2014，67(2)：443-453.

[4]Cardinale B J，Srivastava D S，Duffy J E，et al. Effects of biodiversity on the functioning of trophic groups and ecosystems[J]. Nature，2006，443(7114)：989-992.

[5]朱永官，沈仁芳，賀紀正，等. 中國土壤微生物組：進展與展望[J]. 中國科學(xué)院院刊，2017，32(6)：554-565.

[6]Jetiyanon K，Plianbangchang P. Potential ofBacilluscereusstrain RS87 for partial replacement of chemical fertilisers in the production of Thai rice cultivars[J]. Journal of the Science of Food & Agriculture，2012，92(5)：1080-1085.

[7]沈仁芳，趙學(xué)強. 土壤微生物在植物獲得養(yǎng)分中的作用[J]. 生態(tài)學(xué)報，2015，35(20)：6584-6591.

[8]Schimel J P，Bennett J. Nitrogen mineralization：challenges of a changing paradigm[J]. Ecology，2004，85(3)：591-602.

[9]Phillips C J，Harris D，Dollhopf S L，et al. Effects of agronomic treatments on structure and function of ammonia-oxidizing communities[J]. Applied & Environmental Microbiology，2000，66(12)：5410-5418.

[10]王亞男，曾希柏，王玉忠，等. 施肥模式對設(shè)施菜地根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和豐度的影響[J]. 生態(tài)學(xué)雜志，2015，34(3)：826-834.

[11]Shen J P，Zhang L M，Di H J，et al. A review of ammonia-oxidizing bacteria and archaea in Chinese soils[J]. Frontiers in Microbiology，2012(3)：296.

[12]賀紀正，張麗梅. 土壤氮素轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵微生物過程及機制[J]. 微生物學(xué)通報，2013，40(1)：98-108.

[13]Wang J，Wang W D，Gu J D. Community structure and abundance of ammonia-oxidizing archaea and bacteria after conversion from soybean to rice paddy in albic soils of Northeast China[J]. Applied Microbiology & Biotechnology，2014，98(6)：2765.

[14]侯海軍，秦紅靈，陳春蘭，等. 土壤氮循環(huán)微生物過程的分子生態(tài)學(xué)研究進展[C]. 湖南省土壤肥料學(xué)會2013年年會暨“土壤科學(xué)與湖南實踐”學(xué)術(shù)研討會，2013：588-594.

[15]唐海明，肖小平，孫繼民，等. 種植不同冬季作物對稻田甲烷、氧化亞氮排放和土壤微生物的影響[J]. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2014，23(5)：736-742.

[16]萬水霞，朱宏斌，唐 杉，等. 紫云英與化肥配施對安徽沿江雙季稻區(qū)土壤生物學(xué)特性的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報，2015，21(2)：387-395.

[17]宋亞娜，林智敏. 紅壤稻田不同生育期土壤氨氧化微生物群落結(jié)構(gòu)和硝化勢的變化[J]. 土壤學(xué)報，2010，47(5)：987-994.

[18]宋亞娜，陳在杰，林智敏. 水稻生育期內(nèi)紅壤稻田氨氧化微生物數(shù)量和硝化勢的變化[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，18(5)：954-958.

[19]Chu H Y，Lin X G，F(xiàn)ujii T，et al. Soil microbial biomass，dehydrogenase activity，bacterial community structure in response to long-term fertilizer management[J]. Soil Biology & Biochemistry，2007，39(11)：2971-2976.

[20]Gu Y F，Zhang X P，Tu S H，et al. Soil microbial biomass，crop yields，and bacterial community structure as affected by long-term fertilizer treatments under wheat-rice cropping[J]. European Journal of Soil Biology，2009，45(3)：239-246.

[21]沈仁芳，孫 波，施衛(wèi)明，等. 地上-地下生物協(xié)同調(diào)控與養(yǎng)分高效利用[J]. 中國科學(xué)院院刊，2017 (6)：566-574.

[22]時亞南，張奇春，王光火，等. 不同施肥處理對水稻土微生物生態(tài)特性的影響[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)，2007，33(5)：551-556.

[23]徐永剛，宇萬太，馬 強，等. 不同施肥制度對土壤微生物生態(tài)影響的評價[J]. 土壤通報，2010，41(5)：1262-1269.

[24]裴雪霞，周 衛(wèi)，梁國慶，等. 長期施肥對黃棕壤性水稻土氨氧化細菌多樣性的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報，2011，17(3)：724-730.

[25]Xun W，Zhao J，Xue C，et al. Significant alteration of soil bacterial communities and organic carbon decomposition by different long-term fertilization management conditions of extremely low-productivity arable soil in South China[J]. Environmental Microbiology，2015，18(6)：1907-1917.

[26]趙 軍，李 勇，冉 煒，等. 有機肥替代部分化肥對稻麥輪作系統(tǒng)產(chǎn)量及土壤微生物區(qū)系的影響[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2016，39(4)：594-602.

[27]Yang S Y，Hao D L，Song Z Z，et al. RNA-Seq analysis of differentially expressed genes in rice under varied nitrogen supplies[J]. Gene，2015，555(2)：305-317.

[28]李秋梅，陳新平，張福鎖，等. 冬小麥—夏玉米輪作體系中磷鉀平衡的研究[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報，2002，8(2)：152-156.

[29]姬 強. 不同耕作措施和外源碳輸入對土壤結(jié)構(gòu)和有機碳庫的影響[D]. 咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2016.

[30]郭梨錦，曹湊貴，張枝盛，等. 耕作方式和秸稈還田對稻田表層土壤微生物群落的短期影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2013，32(8)：1577-1584.

[31]劉 驊，林英華，王西和，等. 長期配施秸稈對灰漠土質(zhì)量的影響[J]. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2007，16(5)：1492-1497.

[32]Doran J W.Soil microbial and biochemical changes associated with reduced tillage[J]. Soil Science Society of America Journal，1980，44(4)：765-771.

[33]Doran J W. Microbial changes associated with residue management with reduced tillage[J]. Soil Science Society of America Journal，1980，44(3)：518-524.

[34]Ocio J A，Brookes P C，Jenkinson D S. Field incorporation of straw and its effects on soil microbial biomass and soil inorganic N[J]. Soil Biology & Biochemistry，1991，23(2)：171-176.

[35]羅希茜，郝曉暉，陳 濤，等. 長期不同施肥對稻田土壤微生物群落功能多樣性的影響[J]. 生態(tài)學(xué)報，2009，29(2)：740-748.

[36]韓新忠，朱利群，楊敏芳，等. 不同小麥秸稈還田量對水稻生長、土壤微生物生物量及酶活性的影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2012，31(11)：2192-2199.

[37]楊曾平，徐明崗，聶 軍，等. 長期冬種綠肥對雙季稻種植下紅壤性水稻土質(zhì)量的影響及其評價[J]. 水土保持學(xué)報，2011，25(3)：92-97.

[38]李 正，劉國順，葉協(xié)鋒，等. 綠肥翻壓年限對植煙土壤微生物量C、N和土壤C、N的影響[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，22(4)：62-65.

[39]譚淑豪. 南方冬閑田季節(jié)性規(guī)模經(jīng)營模式分析[J]. 農(nóng)業(yè)經(jīng)濟問題，2010 (5)：62-65.

[40]楊濱娟，黃國勤. 稻田冬種綠肥生態(tài)環(huán)境效應(yīng)的研究進展[J]. 生態(tài)科學(xué)，2016，35(5)：214-219.

[41]侯方舟，屠乃美，何 康，等. 南方雙季稻區(qū)冬種綠肥對土壤質(zhì)量的影響研究進展[J]. 作物研究，2015，29(6)：682-686.

[42]高嵩涓. 長期冬綠肥-水稻制度下稻田土壤部分環(huán)境化學(xué)及分子生態(tài)學(xué)特征[D]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2014.

[43]楊曾平，高菊生，鄭圣先，等. 長期冬種綠肥對紅壤性水稻土微生物特性及酶活性的影響[J]. 土壤，2011，43(4)：576-583.

[44]鐘文輝，蔡祖聰. 土壤管理措施及環(huán)境因素對土壤微生物多樣性影響研究進展[J]. 生物多樣性，2004，12(4)：456-465.

[45]Gil S V，Meriles J，Conforto C，et al. Response of soil microbial communities to different management practices in surface soils of a soybean agroecosystem in Argentina[J]. European Journal of Soil Biology，2011，47(1)：55-60.

[46]李文嬌，楊殿林，趙建寧，等. 長期連作和輪作對農(nóng)田土壤生物學(xué)特性的影響研究進展[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2015，31(3)：173-178.

[47]張立成，邵繼海，林毅青，等. 稻—稻—油菜輪作對土壤微生物活性和多樣性的影響[J]. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報，2017，26(2)：204-210.

[48]張 磊，肖劍英，謝德體，等. 長期免耕水稻田土壤的生物特征研究[J]. 水土保持學(xué)報，2002，16(2)：111-114.

[49]陳冬林，易鎮(zhèn)邪，周文新，等. 不同土壤耕作方式下秸稈還田量對晚稻土壤養(yǎng)分與微生物的影響[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2010，30(8)：1722-1728.

[50]王毅琪，韓文彪，陳 灝，等. 農(nóng)作物秸稈深耕還田技術(shù)研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45(6)：50-53.

[51]趙亞麗，郭海斌，薛志偉，等. 耕作方式與秸稈還田對土壤微生物數(shù)量、酶活性及作物產(chǎn)量的影響[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2015，26(6)：1785-1792.

[52]譚益民，何苑皞，郭文平. 基于分子技術(shù)的土壤微生物多樣性研究進展[J]. 中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2014，34(10)：1-9.

[53]姚曉華. 土壤微生物群落多樣性研究方法及進展[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2008，27(增刊1)：84-88.

[54]李 潔，李睿玉，楊 紅，等. 土壤微生物多樣性的研究方法[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44(11)：1738-1742.

[55]蔚 霞. 轉(zhuǎn)Bt基因水稻秸稈還田對水稻土反硝化作用和微生物多樣性的影響[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[56]張美俊，楊武德. 轉(zhuǎn)Bt基因棉葉對土壤微生物多樣性的影響[J]. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，18(2)：307-311.

[57]董 斌.Bt水稻種植及桔稈還田對土壤酶、呼吸活性及土壤微生物功能務(wù)結(jié)構(gòu)多樣性的影響[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2011.

[58]章家恩，蔡燕飛，高愛霞，等. 土壤微生物多樣性實驗研究方法概述[J]. 土壤，2004，36(4)：346-350.

[59]鄭 燕，賈仲君. 新一代高通量測序與穩(wěn)定性同位素示蹤DNA/RNA技術(shù)研究稻田紅壤甲烷氧化的微生物過程[J]. 微生物學(xué)報，2013，53(2)：173-184.

[60]鄭 燕，賈仲君. 基于核酸DNA/RNA同位素示蹤技術(shù)的水稻土甲烷氧化微生物研究[J]. 土壤學(xué)報，2016，53(2)：490-501.

[61]郭 赟. 長期施肥對酸性及中性水稻土壤中氨氧化微生物的影響[D]. 南京：南京師范大學(xué)，2013.

[62]許 靜. 稻田甲烷排放的微生物群落結(jié)構(gòu)組成及活性初步研究[D]. 合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[63]賈仲君，蔡元鋒，贠娟莉，等. 單細胞、顯微計數(shù)和高通量測序典型水稻土微生物組的技術(shù)比較[J]. 微生物學(xué)報，2017，57(6)：899-919.

[64]劉 瓊，魏曉夢，吳小紅，等. 稻田土壤固碳功能微生物群落結(jié)構(gòu)和數(shù)量特征[J]. 環(huán)境科學(xué)，2017，38(2)：760-768.