血清GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的臨床分析

孫韜，王春霞，杜凱，馬艷云，唐小鳳

【摘 要】目的：評(píng)價(jià)葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶（GPI）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、抗突變型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗體、抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）診斷中的意義，并比較多種指標(biāo)聯(lián)合檢測在RA診斷中的意義。方法：對(duì)178例確診為RA的患者進(jìn)行血清學(xué)指標(biāo)檢測，并進(jìn)行回顧性分析。血清GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體、AFA檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附法，采用χ2檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析對(duì)多種指標(biāo)在RA診斷中的價(jià)值及相關(guān)性進(jìn)行比較，并對(duì)不同指標(biāo)間的聯(lián)合檢測進(jìn)行討論分析。結(jié)果：GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA在RA組的特異性和靈敏度分別為65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、78.33%和72.47%、75.71%和63.48%。RA組中GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA陽性率分別為70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，顯著高于對(duì)照組的11.67%、5.00%、21.67%、13.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）；任意3種或4種指標(biāo)聯(lián)合檢測特異性較高，但敏感度降低，明顯低于單項(xiàng)檢測抗CCP抗體，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）；任意3種或4種指標(biāo)聯(lián)合檢測較單一指標(biāo)檢測均具有較高的陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001），尤其是GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA聯(lián)合檢測，RA組中陽性率可達(dá)96.07%。結(jié)論：GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA均可作為RA診斷的血清學(xué)指標(biāo)，多種血清學(xué)指標(biāo)聯(lián)合檢測有助于提升RA診斷的陽性率。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體；抗聚角蛋白微絲蛋白抗體；類風(fēng)濕因子

Clinical Analysis of the Combined Detection of Serum GPI，Anti-CCP Antibody，Anti-MCV Antibody

and AFA in the Diagnosis of Rheumatoid Arthritis

SUN Tao，WANG Chun-xia，DU Kai，MA Yan-yun，TANG Xiao-feng

【ABSTRACT】Objective：To evaluate significance of glucose-6-phosphate isomerase（GPI）and anti-cyclic citrullinated peptide（CCP）antibody，anti-mutated citrullinated vimentin（MCV）antibody，antifilaggrin antibody（AFA）in the diagnosis of rheumatoid arthritis（RA），and to compare the significance of combined detection of multiple indicators in RA diagnosis.Methods：The serological indexes of 178 patients with RA were examined and analyzed retrospectively.Serum GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.χ2 test and Pearson correlation analysis were used to compare the value and correlation of multiple indicators in the diagnosis of RA，and the joint detection between different indicators was discussed and analyzed.Results：The specificity and sensitivity of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA in RA group were respectively 65% and 70.22%，95% and 84.83%，78.33% and 72.47%，75.71% and 63.48%.In group RA，the positive rates of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA

were 70.22%，84.83%，72.47% and 63.48% respectively，significantly higher than those in the control group，i.e.11.67%，5%，21.67% and 13.33%，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had high specificity but low sensitivity，significantly lower than that of the single detection of anti-CCP antibody，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had a higher positive rate，and the difference was statistically significant（P < 0.001），especially the combined detection of GPI，anti-CCP antibody，anti- MCV antibody and AFA（with a positive rate to 96.07%）.Conclusion：GPI，anti-CCP antibodies，anti-MCV antibodies and AFA can all be used as serological indicators for RA diagnosis.Combined detection of multiple serological indicators is helpful to improve the positive rate of RA diagnosis.endprint

【Keywords】 arthritis，rheumatoid；glucose-6-phospho isomerase；anti-cyclic citrullinated peptide antibody；

anti-mutant citrulline vimentin antibody；anti-keratin microfilament antibody；rheumatoid factor

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見的以滑膜炎及軟骨損傷為特征的慢性自身免疫性疾病，易導(dǎo)致關(guān)節(jié)損害甚至殘疾。早期診斷和及時(shí)治療可以有效預(yù)防骨關(guān)節(jié)疾病惡化、功能喪失以及更為嚴(yán)重的后果[1]。大量研究表明，關(guān)節(jié)組織的不可逆損傷一般都會(huì)發(fā)生在患病后的2年之內(nèi)。目前來說，RA最佳治療時(shí)間是在疾病產(chǎn)生后3～6個(gè)月內(nèi)，因此就需要在疾病早期階段獲得一個(gè)可靠的診斷指標(biāo)[2]。目前，有多種RA相關(guān)抗體檢測可作為疾病診斷的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，類風(fēng)濕因子（RF）作為最常用的檢測項(xiàng)目被廣泛應(yīng)用于RA的臨床診斷，但其特異性較低。隨后，研究人員發(fā)現(xiàn)的葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶[3]（GPI）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體[4]、抗突變型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗體[5]、抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）[6]則具有較高的特異性。本研究旨在通過檢測RA患者血清中GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA，分析4種不同自身抗體在RA中的表達(dá)及多種指標(biāo)聯(lián)合檢測在RA診斷中的臨床作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年5月至2016年12月在本院就診的RA患者178例，男71例，女107例；年齡19～87歲，平均（53.93±12.62）歲；病程1～

17年，平均（6.13±2.79）年。所有患者均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組為同期來本院健康體檢者60例，男26例，女34例；年齡20～81歲，平均（56.32±10.18）歲。

1.2 儀器與試劑 深圳匯松HEALES-MB580酶標(biāo)分析儀（深圳匯松科技發(fā)展有限公司）。GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA ELISA檢測試劑盒（美國TSZ公司，生產(chǎn)批號(hào)TS-Z4402，201702）。

1.3 研究方法 GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測。陽性判斷（Cut-Off值）：以樣本陰性對(duì)照OD值 + 0.25（抗CCP抗體、AFA）；以樣本陰性對(duì)照OD值 + 0.15（GPI、抗MCV），樣本OD值﹥Cut-Off值，判定為陽性，反之，則為陰性。以上所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 6.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，采用四格表計(jì)算4種抗體單獨(dú)及聯(lián)合診斷RA的各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)；采用配對(duì)資料的χ2檢驗(yàn)分析不同抗體的陽性檢出率之間的差異性。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 4種檢測指標(biāo)單獨(dú)診斷RA的各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)

GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA在RA陽性患者中的特異性和靈敏度分別為65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、75.71%和63.48%、78.33%和72.47%，其中抗CCP抗體特異性和靈敏度均高于其他3種，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）；GPI特異性低，抗MCV抗體敏感度低；抗CCP抗體和GPI、抗MCV抗體、AFA的特異性及敏感度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）。見表1。

2.2 多種檢測指標(biāo)聯(lián)合診斷RA的各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo) 聯(lián)合檢測時(shí)，GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體、GPI +抗CCP抗體 + AFA、GPI + 抗MCV抗體 + AFA、抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA、GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA在RA陽性患者中的特異性和靈敏度分別為83.33%和51.69%、88.33%和55.62%、93.33%和41.01%、91.67%和51.12%、98.33%和37.64%。其中對(duì)RA陽性患者特異性最高的是GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA，靈敏度最高的是GPI + 抗CCP抗體 + AFA。見表2。

2.3 4種檢測指標(biāo)在2組中的陽性率比較 RA組中GPI、抗CCP抗體、抗MCV抗體和AFA的陽性率分別為70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，對(duì)照組中各檢測指標(biāo)的陽性率分別為11.67%、5.00%、21.67%、13.33%。兩兩比較，各組陽性率之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）。見表3。

2.4 多種指標(biāo)聯(lián)合檢測在2組中的陽性率比較 RA組中GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體、GPI + 抗CCP抗體 + AFA、GPI + 抗MCV抗體 + AFA、抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA、GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA的陽性率分別為88.20%、91.01%、89.89%、85.96%、96.07%，對(duì)照組中各檢測指標(biāo)的陽性率分別為11.67%、5.00%、6.67%、3.33%、1.67%。兩兩比較，陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）。見表4。

3 討 論

RA呈世界性分布，主要以女性患者多見，并且任何年齡均可發(fā)病。本研究資料顯示，女性與男性患者的人數(shù)比例為1.5∶1，平均年齡（53.93±12.62）歲。目前，臨床上選擇的血清學(xué)檢測指標(biāo)主要是依靠RF，該指標(biāo)具有較高的靈敏度；但特異性較差，其他感染性疾病或自身免疫性疾病也可呈陽性，甚至5%～10%的健康人群也會(huì)出現(xiàn)陽性[7]。GPI抗原作為一種多功能蛋白，在RA發(fā)病過程中對(duì)于血管增生、滑膜增殖及骨質(zhì)破壞等方面起到了重要作用。因此，Zong等[3]將其作為一種新的診斷RA的血清學(xué)指標(biāo)。Herve等[8]也發(fā)現(xiàn)RA患者血清中GPI抗原呈高濃度表達(dá)。本研究對(duì)178例RA患者血清進(jìn)行GPI抗原檢測，結(jié)果與之前報(bào)道一致，RA患者血清中具有較高水平的GPI抗原，但特異性較低。另外，RA患者GPI檢測具有良好的陽性檢出率，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）?？笴CP抗體作為一種抗人工合成的環(huán)瓜氨酸肽，對(duì)RA無論是特異性還是敏感度都具有較高水平，診斷價(jià)值較高[4]。endprint

本研究結(jié)果顯示，抗CCP抗體在RA診斷中表現(xiàn)出較高的特異性和靈敏度，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。AFA的發(fā)現(xiàn)被證實(shí)對(duì)RA的診斷具有較高的特異性。研究發(fā)現(xiàn)，AFA和抗CCP抗體可以識(shí)別瓜氨酸纖維蛋白[6]。隨后的研究表明，瓜氨酸纖維蛋白對(duì)RA滑膜組織不具有較高的特異性，在脊柱關(guān)節(jié)疾病和骨關(guān)節(jié)炎滑膜內(nèi)也都有被檢出[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，AFA在RA患者血清中具有良好的特異性和靈敏度，并且在RA組中具有較高的陽性率，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.001）。波形蛋白是一類存在于細(xì)胞質(zhì)中的中間纖維絲蛋白，該蛋白在巨噬細(xì)胞內(nèi)隨鈣離子進(jìn)入而被瓜氨酸化。MCV是表達(dá)在滑膜組織中的一類相關(guān)性自身抗體，瓜氨酸化和突變都會(huì)影響其蛋白抗原性。目前，抗MCV抗體已被證實(shí)是一種更為敏感的抗瓜氨酸蛋白抗體（ACPA）的抗原性靶點(diǎn)[6]。本研究對(duì)178例RA患者血清進(jìn)行抗MCV檢測，結(jié)果顯示，其具有良好的特異性，但陽性率不是尤為突出（僅63.48%）。

關(guān)于對(duì)不同指標(biāo)的聯(lián)合檢測，Szekanecz等[10]發(fā)現(xiàn)，抗MCV抗體檢測能夠鑒別一部分IgM-RF或者抗CCP抗體血清學(xué)陰性的RA患者，因此，抗CCP抗體和抗MCV抗體聯(lián)合檢測能夠提高RA臨床診斷陽性率。筆者的研究發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)不同指標(biāo)的聯(lián)合檢測，任意3種或4種指標(biāo)聯(lián)合檢測時(shí)，特異性較單一指標(biāo)有一定程度的升高，但靈敏度顯著降低。盡管RF對(duì)RA的特異性不高，但RF持續(xù)性高滴度存在也能夠預(yù)測RA疾病的發(fā)展。IgM-RFs持續(xù)高水平釋放是RA的典型表現(xiàn)，同時(shí)這種抗體高水平的持續(xù)存在也會(huì)促使RA疾病的發(fā)

展[11]?？笴CP抗體在患者首次出現(xiàn)RA臨床癥狀前14年就可在其血清中檢測到，而IgM-RF在首次癥狀出現(xiàn)10年前也可被檢測到[12]。研究表明，抗CCP抗體聯(lián)合IgM-RF檢測能夠?yàn)樵\斷提供較為顯著的靈敏度（可達(dá)88.2%），再加上抗MCV抗體和AFA的聯(lián)合診斷可將RA診斷的敏感度提升到90.1%[11]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，多種指標(biāo)聯(lián)合檢測時(shí)，特異性較單一指標(biāo)顯著升高，但靈敏度明顯降低。多種指標(biāo)聯(lián)合檢測較單一指標(biāo)在RA組和對(duì)照組中的陽性檢出率明顯升高，尤其是GPI + 抗CCP抗體 + 抗MCV抗體 + AFA指標(biāo)聯(lián)合檢測，可將臨床診斷陽性率提升至96.07%。

綜上所述，4項(xiàng)檢測指標(biāo)都有著良好的單項(xiàng)效能，均可用于RA臨床診斷。在單項(xiàng)指標(biāo)檢測中，GPI特異性不高，而抗CCP抗體具有較高的特異性和靈敏度。對(duì)于RA疾病的診斷，4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測可彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)診斷RA的不足，有助于提高陽性檢出率，對(duì)于RA疾病的預(yù)防及早期治療具有重要意義。因此，不同自身抗體多重聯(lián)合血清學(xué)檢測也會(huì)是今后疾病診斷和預(yù)后的有效手段。

4 參考文獻(xiàn)

[1] Aletaha D，Neogi T，Silman AJ，et al.2010 Rheumatoid arthritis classification criteria：an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative[J].Arthritis Rheum，2010，62（9）：2569-2581.

[2] Szodoray P，SzabóZ，Kapitány A，et al.Anti-citrullinated protein/peptide autoantibodies in association with genetic and environmental factors as indicators of disease outcome in rheumatoid arthritis[J].Autoimmun Rev，2010，9（3）：140-143.

[3] Zong M，Lu T，F(xiàn)an S，et al.Glucose-6-phosphate isomerase promotes the proliferation and inhibits the apoptosis in fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis[J].

Arthritis Res Ther，2015，17（1）：100.

[4] Klareskog L，Widhe M，Hermansson M，et al.Antibodies to citrullinated proteins in arthritis：pathology and promise[J].Curr Opin Rheumatol，2008，20（3）：300-305.

[5] Farid SSh，Azizi G，Mirshafiey A.Anti-citrullinated protein antibodies and their clinical utility in rheumatoid arthritis[J].Int J Rheum Diseases，2013，16（4）：379-386.

[6] Nicaise-Roland P，Nogueira L，Demattei C，et al.Autoantibodies to citrullinated fibrinogen compared with anti-MCV and anti-CCP2 antibodies in diagnosing rheumatoid arthritis at an early stage：data from the French ESPOIR cohort[J].Ann Rheum Dis，2013，72（3）：357-362.

[7] 李鵬花，王桂琴.107例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清自身

抗體分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2012，50（1）：90-91.

[8] Herve CA，Wait R，Venables PJ.Glucose-6-phosphate isomerase is not a specific autoantigen in rheumatoid arthritis[J].Rheumatology（Oxford），2003，42（8）：986-988.

[9] 孫韜，熊峰，王春霞.抗瓜氨酸蛋白抗體診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（5）：76-80.

[10] Szekanecz Z，Soós L，Szabó Z，et al.Anti-citrullinated protein antibodies in rheumatoid arthritis：as good as it gets[J].Clin Rev Allergy Immunol，2008，34（1）：26-31.

[11] Conrad K，Roggenbuck D，Reinhold D，et al.Profiling of rheumatoid arthritis associated autoantibodies[J].Autoimmun Rev，2010，9（6）：431-435.

[12] Nielen MM，van Schaardenburg D，Reesink HW，et al.

Specific autoantibodies precede the symptoms of rheumatoid arthritis：a study of serial measurements in blood donors[J].Arthritis Rheum，2004，50（2）：

380-386.

收稿日期：2017-07-14；修回日期：2017-08-30endprint