高效液相色譜的應(yīng)用與展望

□ 王 茜 鞍山市食品藥品檢驗(yàn)所

高效液相色譜分析是以高壓下的液體為流動相的色譜過程，即在液相色譜的基礎(chǔ)上采用了高壓輸液泵，高效固定相，高靈敏度的檢測器和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。目前，高效液相色譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用到化工、生物、食品安全、醫(yī)學(xué)制藥和臨床、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域，也是分離、分析、純化有機(jī)化合物的有效方法之一。

1 概述

1.1 儀器結(jié)構(gòu)與原理

高效液相色譜儀一般由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分組成。

其原理是以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入固定相內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器進(jìn)行檢測[1]。

1.2 高效液相色譜分析的分類

①固液吸附色譜：固定相是固體吸附劑，按被分離組分的分子與流動相分子爭奪吸附劑表面活性中心的吸附能力的差別而分離。②液液分配色譜：固定相是在惰性載體表面涂敷或鍵合一層固定液薄膜，根據(jù)被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。③鍵合相色譜：正鍵合相色譜分離使用的是極性鍵和固定性，主要靠范德華作用力的定向作用力、誘導(dǎo)作用力或氫鍵作用力；反鍵合相色譜分離是使用的是極性較小的鍵合固定相，其分離機(jī)理可用疏溶劑作用理論來解釋。④凝膠色譜：凝膠色譜又稱分子排阻色譜，它是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。

2 高效液相色譜法應(yīng)用現(xiàn)狀及優(yōu)缺點(diǎn)

2.1 高效液相色譜法應(yīng)用

劉俊、吉曉佳等[2]對反相高效液相色譜技術(shù)測定苯甲?；喟返姆椒ㄟM(jìn)行了探討，優(yōu)化了多胺的色譜分析條件，研究和確定了苯甲?；磻?yīng)的最佳溫度、時(shí)間和影響苯甲?；喟贩€(wěn)定性的因素。鄭屹、陳賽慧等[3]建立了高效液相色譜法測定細(xì)胞中腺嘌呤核苷三磷酸、腺苷二磷酸和腺苷酸含量的方法，以比較高糖培養(yǎng)的MRC-5細(xì)胞和D-半乳糖誘導(dǎo)的擬衰老MRC-5細(xì)胞能量代謝水平。結(jié)果表明高效液相色譜法可檢測出不同狀態(tài)細(xì)胞能量物質(zhì)的差異，可以作為線粒體能量代謝功能的評估方法之一。祁彥、占春瑞等[4]將大豆樣品經(jīng)乙腈提取，用凝膠滲透色譜和中性氧化鋁SPE柱凈化，然后采用反相高效液相色譜二極管陣列檢測法測定，建立了同時(shí)檢測大豆中13種三嗪類除草劑多殘留量的方法，可同時(shí)滿足進(jìn)、出口大豆中多種除草劑殘留量的檢驗(yàn)工作需要。吳敏[5]等用高效液相色譜儀紫外檢測器，配用 Zorbax 80A Extend-C8 色譜柱，可同時(shí)測定食品中對位紅和蘇丹紅等8種脂溶性染料。

2.2 高效液相色譜法的優(yōu)缺點(diǎn)

液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物；應(yīng)用范圍廣，約占80%的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析；分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多；分離效能高、靈敏度高，可選擇多種新型固定相以達(dá)到最佳分離效果。

高效液相色譜的缺點(diǎn)是在進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等中，存在“柱外效應(yīng)”，色譜峰加寬，柱效率降低；分析生物大分子和無機(jī)離子困難；流動相消耗大且有毒性的較多；分析成本及日常維護(hù)費(fèi)貴較高。

3 發(fā)展前景

色譜柱顆粒度將不斷降低，色譜分離效率將不斷加快，這不僅要求液相色譜儀配備高速采樣速度的靈敏檢測器，還要求檢測器能綜合聯(lián)用的分析儀器，做出綜合判斷和數(shù)據(jù)管理。此外，從石油化工、環(huán)境監(jiān)測、海關(guān)、食品檢測到生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，將配備標(biāo)準(zhǔn)分析、放大配套的專用分析系統(tǒng)，數(shù)據(jù)分析的針對性更高。相信高效液相色譜分析法不僅對現(xiàn)在具有非凡的意義，在不久的將來在更多的領(lǐng)域會發(fā)揮出更大的作用。