酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)在食品農(nóng)殘快檢中的應(yīng)用探討

□ 蔣曉鳳 射洪縣食品藥品監(jiān)督管理局

農(nóng)產(chǎn)品是人類一切食物的來源，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全更是與人們息息相關(guān)，食品農(nóng)藥殘留儼然成為我國糧食安全和食品安全的重大安全隱患。在經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展的今天，對食品中的農(nóng)藥殘留的檢測更需要快速、簡便、靈敏度高的檢測技術(shù)，才能保證食品和食用農(nóng)產(chǎn)品的安全供應(yīng)，酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)正適應(yīng)了時(shí)代的需求。

酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)（ELISA）是以免疫熒光與放射免疫分析技術(shù)為基礎(chǔ)所形成的，結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)的高度特異性以及酶的高效催化作用[1]。該技術(shù)具有反應(yīng)快、特異性強(qiáng)、容易操作等特點(diǎn)，在臨床標(biāo)本、轉(zhuǎn)基因食品、病原微生物以及藥物殘留等多個(gè)檢測領(lǐng)域中有著相當(dāng)廣泛的應(yīng)用，這些優(yōu)點(diǎn)使其可在食用農(nóng)產(chǎn)品從田間一直到餐桌各環(huán)節(jié)進(jìn)行速測，將農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)殘超標(biāo)問題杜絕在源頭。

1 酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)及其核心原理

酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)又名酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(yàn)（簡稱ELISA）。較早關(guān)于ELISA研究的是在1966年開始的，是一種固相酶免疫分析方法，是指通過抗體分子能與抗原分子特異性結(jié)合的這一特點(diǎn)，把各種游離的雜蛋白以及結(jié)合與固相載體的目的蛋白進(jìn)行分離，同時(shí)通過特殊的標(biāo)記物來對其進(jìn)行定性或定量分析的一種檢測方法[2]。該檢測方法使用酶標(biāo)記抗原或抗體以后，對抗原抗體特異性和酶本身的活性均不影響，因此ELISA具有準(zhǔn)確性高、檢測時(shí)間短、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)。

ELISA的原理主要包括以下幾個(gè)方面。①抗原或抗體必須要能夠吸附并且固定到載體的表面，并且還需要確保其保持免疫學(xué)活性。②抗原或者是抗體擁有能夠連接形成仍然擁有良好免疫學(xué)活性以及酶學(xué)活性的共價(jià)鍵。③在酶結(jié)合物和相應(yīng)的抗原或者是抗體相結(jié)合之后，根據(jù)所加入底物的顏色反應(yīng)，來對其是否存在免疫反應(yīng)進(jìn)行有效判斷，顏色的深淺則是和標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比，是計(jì)算樣品中抗體或抗原的濃度的重要依據(jù)[3]。④酶起主導(dǎo)作用，其中辣根過氧化物酶又是關(guān)鍵中的關(guān)鍵，它能形成的對抗體抗原特異具有免疫反應(yīng)和催化酶促反應(yīng)的酶結(jié)合物。

2 酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)在食品農(nóng)藥殘留快速檢測中的應(yīng)用

農(nóng)藥殘留是在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中直接或間接殘存于食品和食用農(nóng)產(chǎn)品中的微量農(nóng)藥、有毒代謝物、降解物等物質(zhì)的總稱。而ELISA在農(nóng)藥殘留物的實(shí)際檢測中，較為普遍的方法是生化檢測法，檢測時(shí)主要是將乙酰膽堿酯酶和待檢測樣品的提取液進(jìn)行一定比例的混合，進(jìn)行充分配比后，固定相應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間，以二硫雙硝基甲苯酸作為顯色劑，發(fā)生反應(yīng)后進(jìn)行比色。提取液中不含殘留物時(shí)，說明酶的活性不會被抑制，而存在殘留物時(shí)，說明酶的活性被抑制。根據(jù)殘留物的多少，可以有效判斷酶活性被抑制的程度，殘留物越多，說明被抑制性越強(qiáng)。ELISA主要是通過有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對其本身的乙酰膽堿酶的差別特異性抑制反應(yīng)來檢測農(nóng)藥殘留量，相對結(jié)果較為準(zhǔn)確，誤差小，所以利用有效的實(shí)驗(yàn)檢測相應(yīng)的生化反應(yīng)，可以有效檢測農(nóng)藥的綜合殘留量。此方法使用起來快捷、靈敏，而且成本較低，適于標(biāo)準(zhǔn)化管理且容易制備試劑盒，非常適合大規(guī)模的現(xiàn)場樣品篩選[4]。

3 展望

ELISA具有高靈敏度、強(qiáng)特異性、低成本、快速簡便、高自動化以及低污染等優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)也存在不能同時(shí)分析多種成分、對試劑的選擇性高、對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)等問題[5]。所以將來對ELISA在食品農(nóng)藥殘留快速檢測中的研究主要集中在高度免疫原性的重組抗原技術(shù)難題上。此外還應(yīng)將ELISA與色譜、PCR等先進(jìn)主流技術(shù)實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ)，才能讓ELISA在未來食品中農(nóng)藥殘留快速檢測乃至于整個(gè)食品安全快速檢測過程中發(fā)揮更加卓越的貢獻(xiàn)。