大鼠腹腔異位心臟移植模型的建立與評(píng)價(jià)

胡定輝，李鴻雁*，劉尊濤，杜 琎，李 航

（1．南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028；2．東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院，江蘇 南京 210009）

經(jīng)典的大鼠腹腔異位心臟移植模型由Ono等[1]于1969年進(jìn)行改進(jìn)并確立模型的基本手術(shù)方式，由于其可行性較高，便于移植物觀察等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究中。在本實(shí)驗(yàn)研究中，我們對(duì)Ono心臟移植模型的手術(shù)步驟和操作流程進(jìn)行部分優(yōu)化和改進(jìn)，使得該移植模型的建立更加簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物及藥物

本實(shí)驗(yàn)經(jīng)江蘇省中醫(yī)藥研究院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。供者受體均為SD大鼠，均為雄性，體重200～250 g，以及實(shí)驗(yàn)用肝素、生理鹽水、心肌保護(hù)液等藥物均由江蘇省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物中心提供。

1.2 手術(shù)器械

顯微手術(shù)器械一套，無(wú)損傷血管阻斷鉗、常規(guī)手術(shù)器械若干，8 mg0 prolene線，紗布、棉簽若干，Keeler2.5倍手術(shù)放大鏡，冷光源手術(shù)燈1盞。

1.3 麻醉

大棉球滴有七氟醚2～4 ml，放入4 L的密閉容器內(nèi)，將大鼠置于其中約2～5 min，待大鼠反應(yīng)遲鈍后取出，予以腹腔內(nèi)注射氯胺酮（75 mg/kg）。

1.4 手術(shù)方法

1.4.1 供心摘取

供體鼠術(shù)前禁食6～8 h，不禁水。麻醉后用電子秤稱重，取仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。常規(guī)3%碘伏消毒，腹正中切口進(jìn)腹，顯露下腔靜脈。經(jīng)下腔靜脈注入125 U/ml肝素鈉鹽水1 ml，進(jìn)行全身肝素化。剪開(kāi)膈肌，剪斷兩側(cè)肋骨，顯露胸腔。打開(kāi)心包，分離出升主動(dòng)脈和主肺動(dòng)脈間隙。用4-0絲線結(jié)扎左上腔靜脈與左肺根、右上腔靜脈與右肺根以及下腔靜脈。阻斷升主動(dòng)脈，按25 ml/kg的比例灌注心臟停跳液，至心臟停搏。剪斷升主動(dòng)脈、上下腔靜脈，修剪心臟周圍組織，取出供心，置入4℃心臟停跳液中保存。

1.4.2 受體的制備

受體鼠術(shù)前禁食6～8 h，不禁水。同法麻醉、消毒、進(jìn)腹，游離并結(jié)扎擬作血管吻合口附近的腹主動(dòng)脈分支和下腔靜脈屬支，不切斷。

1.4.3 供心移植

在擬作吻合口的兩側(cè)分別用無(wú)損傷血管鉗阻斷腹主動(dòng)脈和下腔靜脈。冠脈尖刀縱行挑開(kāi)腹主動(dòng)脈壁，修剪切口長(zhǎng)約3～4 mm，用8-0prolene線分別端側(cè)吻合供心升主動(dòng)脈和受體腹主動(dòng)脈以及供心主肺動(dòng)脈和受體下腔靜脈。吻合完成后，開(kāi)放腹主動(dòng)脈，先開(kāi)放遠(yuǎn)端再開(kāi)放近端。如有少量滲血，可用棉簽輕壓局部即可；如吻合口出血較多，則需重新阻斷血管，在出血部位小心加縫1-2針。用37℃生理鹽水澆淋心臟使之快速?gòu)?fù)溫，30～60秒后，心臟自動(dòng)復(fù)跳或由心室纖顫轉(zhuǎn)為竇性心律。心臟復(fù)跳早期，心功能低下，需要適當(dāng)?shù)陌茨π呐K來(lái)幫助右心排血。觀察無(wú)出血后，37℃生理鹽水沖洗腹腔后，雙層縫合關(guān)閉腹腔，分籠置入空調(diào)保溫箱中。

1.4.4 術(shù)后處理與觀察

術(shù)后在空調(diào)保溫箱中保溫，給予止痛藥，不應(yīng)用抗生素。分籠飼養(yǎng)3天，定期觀察進(jìn)食及活動(dòng)情況。每天通過(guò)腹部觸診了解供心跳動(dòng)情況，供心跳動(dòng)72 h以上為手術(shù)成功。

2 結(jié) 果

預(yù)實(shí)驗(yàn)心臟移植10例，存活4例，成功率40%。主要死亡原因是出血、手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)心臟不能復(fù)跳以及麻醉過(guò)深。正式實(shí)驗(yàn)20例存活14例，存活率70%。術(shù)中吻合口出血致死1例；術(shù)中移植心臟復(fù)跳后停跳l例；術(shù)后24 h死亡4例，1例解剖發(fā)現(xiàn)腸管變硬變黑，其余3例均有供心肺動(dòng)脈與受體下腔靜脈吻合口內(nèi)血栓形成。供心摘取時(shí)間（6±2）min，供心升主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈的吻合時(shí)間為（9±2）min，供心主肺動(dòng)脈與受體下腔靜脈的吻合時(shí)間為（13±4）min，供心阻斷時(shí)間為（30±5）min，手術(shù)時(shí)間為（50±5）min。存活大鼠未見(jiàn)下肢癱瘓或下肢運(yùn)動(dòng)障礙，也未見(jiàn)明顯感染征象。

3 討 論

大鼠異位心臟移植模型由于具備明確的成敗標(biāo)志-供心復(fù)跳，而被廣泛地應(yīng)用于器官移植和臟器保護(hù)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)中。該模型最早由Abbott[2]等人于1964年報(bào)道，術(shù)式是將受體腹主動(dòng)脈和下腔靜脈在腎血管平面以下完全離斷，這種術(shù)式創(chuàng)傷大，術(shù)后并發(fā)癥多，受體的存活率低。半個(gè)世紀(jì)以來(lái)，不斷有學(xué)者[1,3-8]對(duì)此模型的手術(shù)方式進(jìn)行改進(jìn)，大大地提高了建模的成功率及術(shù)后成活率。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)該心臟移植模型的手術(shù)步驟和操作流程進(jìn)行了優(yōu)化與改進(jìn)，概括如下。

（1）術(shù)前禁食：術(shù)前禁食對(duì)實(shí)驗(yàn)操作有利，若術(shù)前不禁食，術(shù)中腸管膨隆，影響手術(shù)顯露。而將腸管牽出體外，既增加術(shù)中大鼠體液?jiǎn)适В苍黾有g(shù)后大鼠腸梗阻的發(fā)生率。

（2）麻醉：采用腹腔內(nèi)注射氯胺酮（75 mg/kg），該劑量可讓大鼠很好的完成移植過(guò)程，個(gè)別大鼠出現(xiàn)醒動(dòng)，可將含七氟醚棉球的置于試管中，讓其吸入。

（3）供心準(zhǔn)備：①供體進(jìn)行全身肝素化時(shí)應(yīng)緩慢，以免導(dǎo)致供心心肌損傷。②心肌停跳液應(yīng)灌注至心臟完全停跳，心肌松軟，表面發(fā)白。③修剪供心時(shí)應(yīng)盡可能保留升主動(dòng)脈和主肺動(dòng)脈的長(zhǎng)度。

（4）受體血管準(zhǔn)備：① 對(duì)腹主動(dòng)脈的分支和下腔靜脈各屬支，均采用1#絲線結(jié)扎而不剪斷血管的方法，可減少術(shù)中滲血；②受體血管阻斷：采用無(wú)損傷血管鉗，可將待吻合血管展平擺放，方便吻合。

（5）血管吻合：受體的腹主動(dòng)脈和下腔靜脈上的切口，均以冠脈尖刀挑破血管前壁，優(yōu)于用針頭或者縫針挑破血管壁。下腔靜脈上的切口比腹主動(dòng)脈上的切口偏腳側(cè)3～4 mm，切口錯(cuò)位對(duì)于良好吻合有幫助。對(duì)兩處吻合口，均先用8-0prolene線縫合固定頭腳兩角，然后再連續(xù)縫合兩邊的方法，掌握好針距和邊距。吻合過(guò)程中，用冰水紗布包裹保護(hù)供心。

總之，大鼠腹部異位心臟移植模型操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，是我們研究臟器保護(hù)以及其他基礎(chǔ)研究很好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。通過(guò)對(duì)經(jīng)典的Ono模型的手術(shù)步驟和操作流程進(jìn)行一些改進(jìn)，使得該模型的建立更加簡(jiǎn)單可靠，并發(fā)癥較少，死亡率低，手術(shù)成功率高。

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