3種屏南產(chǎn)菝葜、重樓、黃精藥材的品質(zhì)分析

朱仙慕，黃 群，陳 丹，馬國(guó)萍，黃 嬌，謝 平

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

3種屏南產(chǎn)菝葜、重樓、黃精藥材的品質(zhì)分析

朱仙慕，黃 群，陳 丹，馬國(guó)萍，黃 嬌，謝 平

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

目的 鑒別屏南產(chǎn)菝葜、重樓、黃精3種藥材，檢測(cè)黃精藥材多糖含量，評(píng)價(jià)3種藥材的品質(zhì)。 方法 根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典2015年版（一部）》相關(guān)規(guī)定對(duì)3種藥材進(jìn)行薄層色譜鑒別以及黃精藥材含量測(cè)定。 結(jié)果 屏南菝葜藥材供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；屏南重樓供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜的相應(yīng)位置在主成分含量上表現(xiàn)出差異；屏南黃精供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；建立了黃精多糖含量的UV測(cè)定方法，以無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品在3.34～20.05 μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A＝4.47×10－2C－5.64×10－2（r＝0.999 2）。 結(jié)論 建立了 3種薄層色譜鑒別方法以及黃精多糖含量測(cè)定的分析方法，為3種藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)及質(zhì)量分析提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

薄層色譜鑒別；菝葜；重樓；黃精；多糖

菝葜為百合科植物菝葜 Smilax China L.的干燥根莖，具有消腫止痛、活血化瘀、祛風(fēng)利濕等作用［1］308-309，臨床常用于治療婦科炎癥，療效顯著，菝葜中主要含有皂苷、黃酮、鞣質(zhì)等化學(xué)成分［2］。重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis （Franch.） Hara的干燥根莖［1］260，其藥理作用廣泛，藥理活性強(qiáng)。黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黃精 Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎等功效［1］306-307。 黃精的化學(xué)成分主要包括多糖、三萜、生物堿、黃酮及揮發(fā)油等，其中多糖類成分在黃精中含量較大，為其主要藥效成分［3］。為調(diào)研屏南產(chǎn)藥用植物菝葜、重樓、黃精3種藥材品質(zhì)，實(shí)驗(yàn)依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典2015年版（一部）》［1］對(duì)其進(jìn)行了初步的品質(zhì)分析，為地產(chǎn)藥材種植開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV-4802型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)［尤尼柯（上海）儀器有限公司］；ARA520萬(wàn)分之一電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；ZF1-I多功能紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）。

1.2 試藥 菝葜、重樓、黃精（2017年3月采自福建屏南縣，由福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室范世明高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定）；重樓對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121157-201003）；黃精對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121341-200402）；薄層層析用硅膠G（青島海洋化工有限公司）；薯蕷皂苷元對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111539-200001）；D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110833-200302）；95%乙醇、鹽酸、氫氧化鈉等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 菝葜薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品粉末5 g，加乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液加鹽酸5 mL，加熱回流2 h，放冷，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)至中性，蒸至無(wú)醇味，殘?jiān)訜崴?0 mL使溶解，用二氯甲烷振搖提取 2次（40 mL、30 mL），合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 另取薯蕷皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.1.3 薄層色譜鑒別 吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：菝葜藥材供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；菝葜藥材含有主成分薯蕷皂苷元。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 重樓薄層色譜鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品粉末0.5 g，加乙醇10 mL，加熱回流30 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 另取重樓對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 薄層色譜鑒別 吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15∶5∶1）的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：日光和紫外光燈下檢視供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜的相應(yīng)位置上，從上至下第2、4、8斑點(diǎn)差異明顯，原點(diǎn)附近斑點(diǎn)也表現(xiàn)出差異，提示重樓與對(duì)照重樓藥材的主成分含量上表現(xiàn)出差異，且其他成分的含量也有所差異。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1 菝葜薄層色譜鑒別圖

圖2 重樓薄層色譜鑒別圖

2.3 黃精藥材薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品粉末1 g，加70%乙醇20 mL，加熱回流1 h，抽濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 另取黃精對(duì)照藥材l g，同法制成對(duì)照藥材溶液，即得。

2.3.3 薄層色譜鑒別 吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（5∶2∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：黃精供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。提示黃精藥材主成分與對(duì)照藥材相似。結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 黃精薄層色譜鑒別圖

2.4 黃精多糖的含量測(cè)定

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每l mL中含無(wú)水葡萄糖0.33 mg）。

2.4.2 供試品溶液的制備 取60°C干燥至恒重的本品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定；置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)；殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL；將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)；殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL；合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液 0.l、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻；在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。采用紫外-可見(jiàn)分光光度法，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度A值對(duì)濃度（μg／mL）進(jìn)行線性回歸，其回歸方 程 為 A＝4.47×10－2C－5.64×10－2，r＝0.999 2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：葡萄糖濃度在3.34～20.05 μg／mL范圍內(nèi)，其吸光度與濃度有良好的線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1、圖4。

表1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.4 黃精多糖含量測(cè)定 精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水葡萄糖的重量（mg），計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，含黃精多糖以無(wú)水葡萄糖（C6H12O6）計(jì)，不得少于7.0%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：3批黃精的多糖平均含量分別為7.61%、6.80%、7.22%，RSD 分別為 2.94%、0.68%、2.62%。結(jié)果見(jiàn)表2。

圖4 葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表2 黃精多糖含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討 論

3.1 依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典2015年版（一部）》［1］采用薄層色譜法鑒別菝葜、重樓和黃精，結(jié)果表明：屏南菝葜藥材含有主成分為薯蕷皂苷元；屏南重樓藥材與重樓對(duì)照藥材品質(zhì)有所差異，且從重樓的薄層板上斑點(diǎn)的顏色深淺初步判斷，重樓藥材斑點(diǎn)顏色較對(duì)照藥材的淺，某些成分含量略低，甚至沒(méi)有；屏南黃精藥材主成分與黃精對(duì)照藥材相似，香草醛-濃硫酸顯色劑在揮發(fā)油、萜類、甾類和皂苷等中藥成分的薄層分離中，多能顯示出顏色各異的斑點(diǎn)［4］，其中黃精化學(xué)成分中甾體皂苷類含量較大，故為其主要功效成分。

3.2 蒽酮-硫酸法是利用濃硫酸將多糖類化合物脫水、水解后形成單糖，并迅速生成糠醛衍生物，其與蒽酮試劑反應(yīng)顯色，并于582 nm波長(zhǎng)下有最大吸光度［5］。操作過(guò)程中蒽酮-硫酸溶液不穩(wěn)定，宜現(xiàn)用現(xiàn)配，并注意避光。

3.3 黃精多糖含量的高低與藥材的產(chǎn)地、采收時(shí)間、品種、生態(tài)環(huán)境以及儲(chǔ)藏方式等多種因素有關(guān)［6］。3月份采收的屏南黃精的多糖含量測(cè)定結(jié)果偏低，這與采摘季節(jié)有一定關(guān)系，故還需進(jìn)一步的考察。

［1］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015 年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：308-309，260，306-307.

［2］ 干國(guó)平，于偉，孫進(jìn)，等.不同產(chǎn)地菝葜中總黃酮的含量考察［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28（23）：2055-2056.

［3］ 陳輝，馮珊珊，孫彥君，等.3種藥用黃精的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］.中草藥，2015，46（15）：2329-2338.

［4］ 姚乾元，賈元印.香草醛-濃硫酸薄層色譜顯色劑的改進(jìn)［J］.中藥通報(bào)，1986（7）：25-47.

［5］ 曾哲靈，熊濤，呂偉.蒽酮-硫酸法測(cè)定大蒜多糖含量［J］.食品科學(xué)，2008，29（9）：499-502.

［6］ 洪迪清，王世清，高晨曦，等.黔產(chǎn)黃精的多糖含量測(cè)定［J］.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2009，16（11）：76-77.

R284.1

A

1000-338X（2017）06-0047-03

2017-09-18

福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2010Y2004）

朱仙慕（1993—），女，碩士研究生，主要從事中藥制劑與質(zhì)量分析研究。

陳丹（1961—），女，博士，教授。E-mail：13515026709@163.com