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    云南藤黃提取物對(duì)人結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其機(jī)制研究

    2017-12-28 22:11:08段琳琳隋華朱蕾張莉譚紅勝
    世界中醫(yī)藥 2017年2期
    關(guān)鍵詞:藤黃大腸癌皮下

    段琳琳 隋華 朱蕾 張莉 譚紅勝

    摘要 目的:探討云南藤黃提取物抑制裸鼠大腸癌植性實(shí)體瘤的作用機(jī)制。方法:建立裸鼠人結(jié)腸癌皮下移植瘤模型,隨機(jī)分為:模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(5-氟脲嘧啶)、云南藤黃提取物低、中、高劑量組。連續(xù)治療28 d,于末次給藥后12 h,剝?nèi)∧[瘤,稱(chēng)重,計(jì)算抑瘤率;并檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況;免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá)。結(jié)果:云南藤黃提取物低、中、高劑量對(duì)腫瘤的抑瘤率分別為12.5%、20.83%和29.17%,與空白對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。腫瘤細(xì)胞凋亡率增加,并且隨著云南藤黃提取物濃度的增加而增加,具有劑量依賴(lài)性(P<0.05)。云南藤黃提取物能明顯降低腫瘤組織中cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá),具有劑量依賴(lài)性(P<0.01)。結(jié)論:云南藤黃具有較好的體內(nèi)抗腫瘤作用,可能是通過(guò)降低cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)增殖。

    關(guān)鍵詞 云南藤黃;大腸癌;裸鼠;凋亡;cyclinE1;c-Met;hnRNPK

    Abstract Objective:To observe the mechanism of garcinia yunnanensis extract on subcutaneously implanted tumor of human colorectal carcinoma in nude mouse.Methods:A nude mouse model of subcutaneously implanted tumor of human colorectal carcinoma was established,and experimental nude mice were randomly divided into 5 groups:model group,positive control group (5-Fluorouracil),and high/middle/low doses of garcinia yunnanensis group.After 28 days of treatment,the tumor was cut to weigh and anti-tumor rate was calculated,and the apoptosis ratio of tumor cells was analyzed.CyclinE1,c-Met,hnRNPK expression level were analyzed by immuno-histochemical method.Results:The experimental results showed that,the anti-tumor rates in low/middle/high doses of garcinia yunnanensis group were 12.5%,20.83% and 29.17%,which were significantly different from the normal control group (P<0.01).The apoptosis rate of tumor cells was increased with the increasing of extract concentration of garcinia yunnanensis,which showed a dose-dependent manner (P<0.05).Garcinia yunnanensis could significantly reduce the expression of cyclinE1,c-Met and hnRNPK with a dose-dependent manner (P<0.01).Conclusion:Garcinia yunnanensis has an obvious anti-tumor effect in vivo,and it may inhibit the proliferation of tumor cells in vivo by reducing the expression of cyclinE1,c-Met and hnRNPK.

    Key Words Garcinia yunnanensis; Colorectal cancer; Nude mice; Apoptosis; CyclinE1; C-Met; HnRNPK

    中圖分類(lèi)號(hào):R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2017.02.035

    大腸癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率和病死率逐年上升[1-2]。目前,大腸癌的治療多以手術(shù)治療為主,但大多數(shù)患者發(fā)病時(shí)已屬晚期,治療及預(yù)后不佳。中醫(yī)藥在防治大腸癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及改善患者生存質(zhì)量方面具有較好的治療優(yōu)勢(shì)[3-4],但臨床治療效果個(gè)體差異較大,作用機(jī)制和作用靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步明確。我們前期研究表明云南藤黃及其提取的單體成分具有對(duì)大腸癌抗凋亡作用[5],但是云南藤黃抗大腸癌的作用機(jī)制仍不明確。因此,我們建立裸鼠人結(jié)腸癌皮下移植瘤耐藥模型,采用云南藤黃提取物進(jìn)行治療,觀察其對(duì)裸鼠人結(jié)腸癌的治療效果,旨在探討云南藤黃提取物體內(nèi)抑制大腸癌的作用機(jī)制,為其在臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 細(xì)胞株

    人腸癌SW620細(xì)胞購(gòu)自上海細(xì)胞研究所。

    1.1.2 動(dòng)物

    Babl/c/nu代小鼠30只,雄性,體質(zhì)量(18±2)g,SPF級(jí),購(gòu)自中科院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,合格證編號(hào):SCHK(新)2010-0005。實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)1周。

    1.1.3 藥物 云南藤黃(Garcinia yunnanensis)采集于中國(guó)云南省,由中國(guó)科學(xué)院西雙版納熱帶植物園王洪教授鑒定,樣品保存在上海中醫(yī)藥大學(xué)創(chuàng)新中藥實(shí)驗(yàn)室。云南藤黃的果皮經(jīng)剝離粉碎成粗粉,取100 g果皮粗粉,用500 mL 95%乙醇于室溫浸泡24 h后,90 ℃加熱回流3次,第2次與第3次均為500 mL,每次1 h。合并3次濾液,濃縮至浸膏。實(shí)驗(yàn)前定量稱(chēng)取,紫外線(xiàn)照射滅菌,無(wú)菌蒸餾水溶解,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.4 試劑 5-氟脲嘧啶(5-FU)為上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào):20070802),抗體,四甲基偶氮唑鹽MTT購(gòu)自Sigma公司。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

    人腸癌SW620細(xì)胞于含10%胎牛血清的L-15培養(yǎng)液(含青霉素、鏈霉素各100(U/mL)中,37 ℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。每2~3 d傳代1次,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

    1.2.2 模型制備與分組

    取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的人腸癌SW620細(xì)胞,以5×106/只數(shù)量接種于小鼠腋下。7~10 d后形成腫瘤,生長(zhǎng)旺盛期的瘤組織剪切成1 mm3左右,在無(wú)菌條件下,接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下,如此傳3代后,大批接種裸鼠腋下,待瘤體生長(zhǎng)約100 mm3隨機(jī)分為5組。

    1.2.3 給藥方法 每組6只,分別為模型組,陽(yáng)性對(duì)照(5-FU)組,云南藤黃提取物低、中、高劑量聯(lián)合5-FU組。云南藤黃提取物低2.56 mg/(kg·d)、中5.12 mg/(kg·d)、高10.24 mg/(kg·d)劑量組分別每只灌胃,5-FU組尾靜脈注射0.5 mg/(kg·d)的5-FU,模型組每天注射等量的生理鹽水,連續(xù)給藥28 d后,每組中隨機(jī)取6只荷瘤裸鼠以頸椎脫臼法處死,剝離腫瘤組織,稱(chēng)重,測(cè)量腫瘤長(zhǎng)、寬及質(zhì)量。計(jì)算抑瘤率:抑瘤率(%)=(對(duì)照組平均瘤質(zhì)量-給藥組平均瘤質(zhì)量)/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量×100%。

    1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Ki-67蛋白的表達(dá)水平在LNCaP。

    組織采用中性福爾馬林4 ℃過(guò)夜固定,進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋并切片。表面抗原修復(fù)后孵育一抗hnRNPK,cyclinE1和c-Met(1∶500)并在4 ℃過(guò)夜;室溫放置10 min,孵育二抗30 min后,與HRP生物標(biāo)志鏈反應(yīng);蘇木素染色5~20 min,蒸餾水沖洗2 min,鹽酸乙醇分化15 s后蒸餾水沖洗泛藍(lán)5 min;脫水后以中性樹(shù)脂封片,晾干,置于顯微鏡下拍照觀察。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)。各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較,采用Independent-Samples T Test,多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,均數(shù)間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)(Student-Newman-Keuls法),求出組間差異。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 云南藤黃提取物對(duì)大腸癌HCT-116細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況的影響

    給藥前用游標(biāo)卡尺測(cè)量給藥前各組小鼠腫瘤體積大小,各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥1周各組瘤體差別不明顯,進(jìn)食飲水如常,隨給藥時(shí)間延長(zhǎng),各組瘤體大小逐漸出現(xiàn)差距,在用藥24 d開(kāi)始,各組瘤體體積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中,陽(yáng)性對(duì)照組和云南藤黃提取物高劑量組的瘤體體積相比,有明顯的縮小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。但是云南藤黃提取物各劑量組對(duì)腫瘤的抑制作用不如陽(yáng)性對(duì)照組。提示云南藤黃提取物可以抑制裸鼠腸癌皮下移植瘤的生長(zhǎng),且呈劑量依賴(lài)性。

    2.2 云南藤黃提取物對(duì)大腸癌裸鼠皮下移植瘤抑制率的影響

    依表1可見(jiàn),云南藤黃提取物各個(gè)劑量組和5-FU組的皮下移植瘤質(zhì)量均低于模型對(duì)照組(P<0.05),5-FU組的抑瘤率最高,云南藤黃提取物劑量組隨云南藤黃取物劑量的升高,抑瘤率逐漸升高,呈劑量依賴(lài)性。

    2.3 云南藤黃提取物對(duì)大腸癌裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞凋亡的影響

    TUNEL檢測(cè)顯示:與模型組相比,陽(yáng)性對(duì)照組中腸癌組織細(xì)胞凋亡率最高(P<0.01);云南藤黃提取物劑量組腫瘤組織中腸癌組織細(xì)胞凋亡率明顯高于模型組(P<0.05)。見(jiàn)圖2、圖3。圖2結(jié)果顯示,云南藤黃提取物治療的裸鼠,其腫瘤內(nèi)凋亡的細(xì)胞明顯增加(P<0.01);云南藤黃提取物低、中、高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組(5-FU)相比凋亡細(xì)胞均明顯減少,且具有劑量依賴(lài)性,云南藤黃提取物低劑量組與高劑量組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.4 云南藤黃提取物對(duì)裸鼠移植瘤組織細(xì)胞內(nèi)cyclinE1,c-Met和hnRNPK的影響

    治療后,模型對(duì)照組腫瘤組織中cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá)陽(yáng)性率均高于治療組(P<0.05),陽(yáng)性對(duì)照組中hnRNPK,cyclinE1和c-Met的表達(dá)與模型對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示5-FU對(duì)大腸癌SW620裸鼠皮下移植瘤的抑制作用可能與hnRNPK,cyclinE1和c-Met無(wú)關(guān)。但是與對(duì)照組相比,云南藤黃提取物各劑量組的hnRNPK,cyclinE1和c-Met的表達(dá)明顯低于模型對(duì)照組,且成劑量依賴(lài)性(P<0.05),提示云南藤黃提取物能夠降低大腸癌SW620裸鼠皮下移植瘤組織內(nèi)cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá)。結(jié)果見(jiàn)圖4、表2、表3、表4。

    3 討論

    目前,在多種腫瘤中均可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期素E(CyclinE)的基因擴(kuò)增和蛋白表達(dá)失調(diào),CyclinE的異常表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的發(fā)展,該基因已經(jīng)被證實(shí)是一種癌基因[6]。有報(bào)道稱(chēng),CyclinE的過(guò)度表達(dá)與大腸癌的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)[7];抑制CyclinE的表達(dá)可以通過(guò)抑制細(xì)胞周期在G1-S期限制點(diǎn)的轉(zhuǎn)化,阻滯細(xì)胞周期,控制腫瘤發(fā)生發(fā)展[8]。

    原癌基因c-Met屬于具有酪氨酸激酶活性的生長(zhǎng)因子受體類(lèi),編碼肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)受體,它參與細(xì)胞信息傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架重排的調(diào)控,是細(xì)胞增殖、分化和運(yùn)動(dòng)的重要因素[9,10]。目前研究表明,c-Met基因在大腸癌組織中的表達(dá)明顯高于大腸腺瘤組織和正常大腸黏膜組織,且與腫瘤的浸潤(rùn)深度、Dukes分期、淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān),提示c-Met的過(guò)度表達(dá)在大腸腺瘤發(fā)展至大腸腺癌的過(guò)程中可能發(fā)揮一定作用[11]。

    hnRNPs是存在于細(xì)胞核中,由30多個(gè)蛋白質(zhì)小分子組成的一種RNA結(jié)合蛋白族[12]。在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、前體mRNA剪切、mRNA輸出和降解等方面起著重要的作用[13]。hnRNPK是該家族中的一員,與多種癌基因及生長(zhǎng)因子有密切的關(guān)系[14]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn):從中國(guó)藤黃屬植物怒江藤黃(Garcinia nujiangensis C.Y.Wu et Y.H.Li)中分離的化合物Nujiangexanthone A(NJXA)通過(guò)下調(diào)宮頸癌細(xì)胞HeLa中hnRNPK和CyclinE的表達(dá),從而抑制腫瘤細(xì)胞的合成、死亡以及細(xì)胞周期的改變[15]。云南藤黃為其同屬植物,且已證實(shí)云南藤黃及其提取的單體成分具有對(duì)大腸癌抗凋亡作用[5],其單體成分Oblongifolin C對(duì)c-Met蛋白激酶具有較好的抑制活性[16],但對(duì)大腸癌體內(nèi)的研究目前尚未開(kāi)展,因此本實(shí)驗(yàn)旨在探索云南藤黃對(duì)大腸癌裸鼠實(shí)體瘤的抑制效果以及具體的作用機(jī)制。

    云南藤黃(Garcinia yunnanensis Hu)為中國(guó)藤黃屬植物,又名小姑娘果,是我國(guó)特有種,分布于云南省西南部,生于海拔1 300~1 600 m丘陵、坡地的雜木林中。其果實(shí)成熟后味酸甜,當(dāng)?shù)孛褡逑彩秤肹17]。現(xiàn)代研究表明,云南藤黃所含化合物具有抗腫瘤和抗炎活性[18-19]。近年來(lái),本課題組對(duì)云南藤黃進(jìn)行了系統(tǒng)的抗腫瘤活性成分研究,提取并發(fā)現(xiàn)了多個(gè)具有顯著抗腫瘤活性的化合物。體外實(shí)驗(yàn)表明,云南藤黃中的有效成分對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抗癌活性,包括人肝癌細(xì)胞(HepG2細(xì)胞)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT116細(xì)胞)、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)以及小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)[20-27]。本研究旨在建立大腸癌裸鼠皮下移植瘤動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,探討云南藤黃對(duì)大腸癌的抑制效果及其作用機(jī)制。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型對(duì)照組與治療組在裸鼠體重、生活質(zhì)量方面無(wú)明顯差異。治療前3周,模型對(duì)照組與云南藤黃各劑量組瘤體大小差異不明顯,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)入第4周后,隨給藥時(shí)間延長(zhǎng),各組瘤體大小逐漸出現(xiàn)差距,在用藥28 d時(shí),云南藤黃各組呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性的抑制腫瘤的生長(zhǎng)(P<0.01)。該結(jié)果與課題組前期的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,說(shuō)明云南藤黃能夠抑制人大腸癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。TUNEL結(jié)果顯示,云南藤黃對(duì)裸鼠腫瘤細(xì)胞的凋亡也具有抑制作用,且成劑量依賴(lài)性。此外,本研究結(jié)果還顯示,大腸癌SW620裸鼠皮下移植瘤組織內(nèi)cyclinE1,c-Met和hnRNPK的表達(dá)較高,給予云南藤黃治療后,其表達(dá)明顯下降(P<0.01)。提示云南藤黃抑制大腸癌的生長(zhǎng)可能與調(diào)節(jié)cyclinE1,c-Met和hnRNPK三者相關(guān)。說(shuō)明云南藤黃可能是通過(guò)下降cyclinE1,c-Met和hnRNPK等蛋白的表達(dá)抑制大腸癌的生長(zhǎng)。

    綜上所述,本研究在前期證實(shí)云南藤黃及其有效成分具有抗腫瘤的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)云南藤黃提取物可以抑制人腸癌皮下移植瘤的生長(zhǎng),增加腫瘤抑制率,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。并且,以劑量依賴(lài)的方式降低cyclinE1,c-Met和hnRNPK蛋白的表達(dá)。因此,明確云南藤黃在人腸癌中的作用及具體機(jī)制,將是我們今后需要深入研究的方向,鑒于其來(lái)源于植物,在當(dāng)?shù)鼐哂锌墒秤?、不良反?yīng)小的臨床使用價(jià)值。后期研究云南藤黃抗腫瘤活性的靶向性將是我們進(jìn)一步需要深入探討的課題。

    參考文獻(xiàn)

    [1]O′Keefe SJ.Diet,microorganisms and their metabolites,and colon cancer[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2016,13(12):691-706.

    [2]Punt CJ,Koopman M,Vermeulen L.From tumour heterogeneity to advances in precision treatment of colorectal cancer[J].Nat Rev Clin Oncol,2016,doi:10.1038/nrclinonc.2016:171.

    [3]Sui H,Zhu H R,Wu J,et al.Effects of Jianpi Jiedu Recipe on reversion of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance through COX-2 pathway in colorectal cancer[J].Chin J Integr Med,2014,20(8):610-617.

    [4]Sui H,Pan SF,F(xiàn)eng Y,et al.Zuo Jin Wan reverses P-gp-mediated drug-resistance by inhibiting activation of the PI3K/Akt/NF-κB pathway[J].BMC Complem Altern M,2014,14:279.

    [5]Li H,Meng XX,Zhang L,et al.Oblongifolin C and guttiferone K extracted from Garcinia yunnanensis fruit synergistically induce apoptosis in human colorectal cancer cells in vitro[J].Acta Pharmacol Sin,2016,38(2):252-263.

    [6]張百蕾,武棟成.NIRF蛋白和CyclinE在細(xì)胞周期調(diào)控及腫瘤發(fā)生中的作用[J].中國(guó)腫瘤,2008,17(5):402-406.

    [7]楊宏梅,鄭美珍,劉云鵬.COX-2、CyclinE的表達(dá)與大腸癌臨床病理因素關(guān)系的研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2006,11(7):499-501.

    [8]Wang Y,Yu H,Zhang J,et al.Hesperidin inhibits HeLa cell proliferation through apoptosis mediated by endoplasmic reticulum stress pathways and cell cycle arrest[J].BMC Cancer,2015,15:682.

    [9]Shali H,Ahmadi M,Kafil HS,et al.IGF1R and c-met as therapeutic targets for colorectal cancer[J].Biomed Pharmacother,2016,82:528-536.

    [10]Zhang J,Jiang X,Jiang Y,et al.Recent advances in the development of dual VEGFR and c-Met small molecule inhibitors as anticancer drugs[J].Eur J Med Chem,2016,108:495-504.

    [11]姜英俊,孔心涓,張可爽,等.c-Met在大腸癌中的表達(dá)及在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2011,49(5):90-93.

    [12]Geuens T,Bouhy D,Timmerman V.The hnRNP family:insights into their role in health and disease[J].Hum Genet,2016,135(8):851-867.

    [13]Barboro P,F(xiàn)errari N,Balbi C.Emerging roles of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)in cancer progression[J].Cancer Lett,2014,352(2):152-159.

    [14]Ciarlo M,Benelli R,Barbieri O,et al.Regulation of neuroendocrine differentiation by AKT/hnRNPK/AR/β-catenin signaling in prostate cancer cells[J].Int J Cancer,2012,131(3):582-590

    [15]Zhang L,F(xiàn)eng J,Kong S,et al.Nujiangexathone A,a novel compound from Garcinia nujiangensis,suppresses cervical cancer growth by targeting hnRNPK[J].Cancer Lett,2016,380(2):447-456.

    [16]Wang L,Wu R,F(xiàn)u W,et al,Synthesis and biological evaluation of Oblongifolin C derivatives as c-Met inhibitors[J].Bioorgan Med Chem,2016,24(18):4120-4128

    [17]中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所.云南植物志[M].北京:科學(xué)出版社,2006.

    [18]付文衛(wèi),譚紅勝,徐宏喜.中國(guó)產(chǎn)藤黃屬植物中抗腫瘤活性化學(xué)成分的研究概況[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2014,49(2):166-174.

    [19]Lv Y,Cai S,Tan H,et al,Inhibitory effect of oblongifolin C on allergic inflammation through the suppression of mast cell activation[J].Mol Cell Biochem,2015,406(1/2):263-271

    [20]Xu G,F(xiàn)eng C,Zhou Y,et al.Bioassay and ultraperformance liquid chromatography/mass spectrometry guided isolation of apoptosis-inducing benzophenones and xanthone from the pericarp of Garcinia yunnanensis Hu[J].J Agr Food Chem,2008,56(23):11144-11150.

    [21]Wang X,Lao Y,Xu N,et al.Oblongifolin C inhibits metastasis by up-regulating keratin 18 and tubulins[J].Sci Rep,2015,5:10293

    [22]Shen K,Xi Z,Xie J,et al.Guttiferone K suppresses cell motility and metastasis of hepatocellular carcinoma by restoring aberrantly reduced profilin 1[J].Oncotarget,2016,7(35):56650-56663.

    [23]Xu W,Cheng M,Lao Y,et al.DNA damage and ER stress contribute to oblongifolin C-induced cell killing in Bax/Bak-deficient cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2015,457(3):300-306.

    [24]Lao Y,Wan G,Liu Z,et al.The natural compound oblongifolin C inhibits autophagic flux and enhances antitumor efficacy of nutrient deprivation[J].Autophagy,2014,10(5):736-749.

    [25]Wu M,Lao Y,Xu N,et al.Guttiferone K induces autophagy and sensitizes cancer cells to nutrient stress-induced cell death[J].Phytomedicine,2015,22(10):902-910.

    [26]Feng C,Zhou L Y,Yu T,et al.A new anticancer compound,oblongifolin C,inhibits tumor growth and promotes apoptosis in HeLa cells through Bax activation[J].Int J Cancer,2012,131(6):1445-1454.

    [27]Xi Z,Yao M,Li Y,et al.Guttiferone K impedes cell cycle re-entry of quiescent prostate cancer cells via stabilization of FBXW7 and subsequent c-MYC degradation[J].Cell Death Dis,2016,7(6):e2252.

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