短裙竹蓀固體培養(yǎng)特性的研究*

陳蒙蒙，程顯好，季凱凱，高興喜

（1.魯東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 煙臺 264025；2.魯東大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 煙臺 264025）

短裙竹蓀固體培養(yǎng)特性的研究*

陳蒙蒙1，程顯好2**，季凱凱1，高興喜2

（1.魯東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 煙臺 264025；2.魯東大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 煙臺 264025）

為探討短裙竹蓀（Dityophora duplicata）在不同培養(yǎng)基上的生長特性，采用固體培養(yǎng)基皿培法培養(yǎng)短裙竹蓀，研究不同固體培養(yǎng)基、不同碳源和氮源對短裙竹蓀的生長、菌絲形態(tài)、菌絲生長的影響。結(jié)果表明，短裙竹蓀在不同培養(yǎng)基上均能生長，尤其在PDA培養(yǎng)基上生長速度最快。短裙竹蓀對所試的不同碳源均能利用，而在以甘露糖、木糖醇、木糖、果糖為碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)生物量最高。對所試的不同有機(jī)氮源均能利用，在以魚蛋白胨、硫酸銨為氮源的固體培養(yǎng)基上生長最好，在以亞硝酸鈉和尿素為氮源的固體培養(yǎng)基上未見肉眼可辨的菌絲體生長。

短裙竹蓀；固體培養(yǎng)；碳源；氮源

短裙竹蓀（Dityophora duplicata）隸屬擔(dān)子菌門（Basidiomycota） 鬼筆目（Phallales）。短裙竹蓀子實(shí)體主要分為菌蓋、菌裙、菌柄與菌托幾部分[1]。菌蓋為半球形，子實(shí)層附著在菌蓋外表層，肉質(zhì)，暴露在空氣中后化為黏稠物質(zhì)，灰綠色。菌柄白色，中空，海綿狀。菌裙白色，位于菌柄中上部，裙上多網(wǎng)孔。菌托基部與菌索相連。菌絲體生長溫度在6℃～33℃，以18℃～26℃為宜。子實(shí)體生長溫度12℃～32℃，以 20℃～25℃為宜[2]。

短裙竹蓀主要分布于黑龍江、吉林、遼寧、河北等北方區(qū)域。目前，研究發(fā)現(xiàn)短裙竹蓀中含有的短裙竹蓀凝集素對人血具有凝集作用[3]。短裙竹蓀作為1種相對珍貴的食（藥）用真菌，營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值均很高，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)長期食用短裙竹蓀既可以降血壓又可以降低血液中的膽固醇含量等[4-5]。短裙竹蓀自然分布較少，野生采摘量較缺乏，因此為了更好地對短裙竹蓀進(jìn)行藥理研究，開展人工栽培技術(shù)研究。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 菌種

本實(shí)驗(yàn)所用短裙竹蓀菌種來自于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物研究所，保藏于PDA斜面培養(yǎng)基中。

1.2 試劑

葡萄糖、酵母浸粉、MgSO4、KH2PO4、瓊脂、果糖、麥芽糖、木糖、甘露糖、淀粉、甘露醇、木糖醇、山梨醇、魚蛋白胨、牛肉蛋白胨、大豆蛋白胨、亞硝酸鈉、硫酸銨、尿素。其中試劑類均為國產(chǎn)分析純。

1.3 培養(yǎng)基

麥芽汁固體培養(yǎng)基：麥芽汁50 g·L-1、瓊脂15 g·L-1，pH自然；胡蘿卜固體培養(yǎng)基：胡蘿卜（煮汁） 200 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、瓊脂 15 g·L-1，pH自然；PDA固體培養(yǎng)基：馬鈴薯（煮汁） 200 g·L-1、葡萄糖20 g·L-1、瓊脂15 g·L-1，pH自然；麥麩固體培養(yǎng)基：麥麩 （煮汁） 30 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、KH2PO43 g·L-1、MgSO41.5 g·L-1、瓊脂 15 g·L-1，pH自然；GPY固體培養(yǎng)基：葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨6 g·L-1、酵母浸粉 10 g·L-1、瓊脂 15 g·L-1，pH 自然；GPC 固體培養(yǎng)基：葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 6 g·L-1、玉米漿 10 g·L-1、瓊脂 15 g·L-1，pH 自然。

1.4 培養(yǎng)方法

采用平板培養(yǎng)的方式研究短裙竹蓀的固體培養(yǎng)特性。在無菌環(huán)境中，將培養(yǎng)基分別倒入平板，待完全凝固后鋪上已滅菌的單層玻璃紙，接種直徑6 mm的接種塊，25℃條件下避光培養(yǎng)，定期觀察菌落生長情況和菌落特征。

1.5 菌絲體生長速度測定

從第6天開始每3天記錄1次菌落擴(kuò)散直徑及其生長情況，直至21 d，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.6 菌絲體生物量測定

將培養(yǎng)21 d的短裙竹蓀菌絲體從玻璃紙上刮下，做好標(biāo)記，于60℃烘箱烘干至恒重，稱重。

1.7 短裙竹蓀對碳源的利用試驗(yàn)

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，分別用2%的碳源代替2%的葡萄糖，制成固體培養(yǎng)基平板，鋪上已滅菌的單層玻璃紙后接種短裙竹蓀菌絲，25℃條件下避光培養(yǎng)。

1.8 短裙竹蓀對氮源的利用試驗(yàn)

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，分別用0.6%的有機(jī)氮源代替0.6%蛋白胨，用0.2%的無機(jī)氮源代替0.6%的蛋白胨。在不同氮源培養(yǎng)基平板上，鋪上已滅菌的單層玻璃紙后接種短裙竹蓀，25℃條件下避光培養(yǎng)，定期觀察短裙竹蓀菌絲體的生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 短裙竹蓀在不同培養(yǎng)基上的生長情況

短裙竹蓀培養(yǎng)21 d，在6種培養(yǎng)基上的生長特性和形態(tài)見表1和圖1。在不同培養(yǎng)基中，短裙竹蓀菌絲體的擴(kuò)散速度與生長形態(tài)不同。菌絲體在6種固體培養(yǎng)基上的擴(kuò)散速度依次為：PDA培養(yǎng)基>胡蘿卜培養(yǎng)基>麥芽汁培養(yǎng)基>GPY培養(yǎng)基>麥麩培養(yǎng)基>GPC培養(yǎng)基；而菌絲體在6種固體培養(yǎng)基上的生物量依次為：GPY培養(yǎng)基>PDA培養(yǎng)基>GPC培養(yǎng)基>麥芽汁培養(yǎng)基>胡蘿卜培養(yǎng)基>麥麩培養(yǎng)基（表1）。由此可見，PDA和GPY培養(yǎng)基較適合用于短裙竹蓀菌絲體的固體培養(yǎng)。

表1 短裙竹蓀培養(yǎng)21 d時(shí)6種培養(yǎng)基上的生長特性Tab.1 Growth characteristics of Dityophora duplicata on six media for 21 days

在GPY和胡蘿卜培養(yǎng)基上，氣生菌絲體發(fā)達(dá)，均勻向周圍生長；在PDA、麥芽汁和麥麩培養(yǎng)基上，氣生菌絲體不發(fā)達(dá)，匍匐狀緊貼在培養(yǎng)基上生長；在GPC培養(yǎng)基上，氣生菌絲體較發(fā)達(dá)，絨毛狀。在培養(yǎng)21 d內(nèi)，短裙竹蓀氣生菌絲的顏色均為雪白色。

從表1可以看出，在GPY固體培養(yǎng)基中菌種擴(kuò)散徑向距離為6.10 cm，生物量達(dá)145.50 mg，為最適合培養(yǎng)短裙竹蓀的固體培養(yǎng)。

2.2 碳源對短裙竹蓀生長的影響

在第18天時(shí)，不同碳源對短裙竹蓀菌絲體生長情況見表2。

短裙竹蓀菌絲體在多種碳源中均可以生長，說明其對碳源的適應(yīng)性較強(qiáng)。在每種碳源中，其菌絲體生長擴(kuò)散速度和生物量也存在一定的差異。

短裙竹蓀菌絲體在不同碳源固體培養(yǎng)基上的擴(kuò)散速度依次為：甘露糖>木糖醇>甘露醇>木糖>果糖>山梨醇>淀粉>麥芽糖；短裙竹蓀菌絲體在各種碳源固體培養(yǎng)基上的生物量依次為：甘露糖>木糖醇>木糖>果糖>甘露醇>山梨醇>淀粉>麥芽糖（表2）。在甘露糖、木糖醇、木糖、果糖中，短裙竹蓀菌絲體擴(kuò)散速度較快，生物量較大，適合作為其菌絲體固體培養(yǎng)的碳源。

圖1 短裙竹蓀在6種培養(yǎng)基上的菌絲生長形態(tài)Fig.1 Culture mycelial morphology of Dityophora duplicata in six media

表2 短裙竹蓀在不同碳源培養(yǎng)基上的生長特性Tab.2 Growth characteristics of Dityophora duplicata in the media with different carbon sources

2.3 氮源對短裙竹蓀的影響

在第18天時(shí)，不同氮源對短裙竹蓀菌絲體的固體培養(yǎng)的生長特性影響見表3。

表3 短裙竹蓀在不同氮源培養(yǎng)基上的生長特性Tab.3 Growth characteristics of Dityophora duplicata in the media with different nitrogen sources

短裙竹蓀菌絲體在多種有機(jī)氮源固體培養(yǎng)基中均能生長。在動物性氮源培養(yǎng)基上菌絲體生長存在明顯的差別，在魚蛋白胨培養(yǎng)基中擴(kuò)散速度較快，擴(kuò)展經(jīng)向距離為5.47 cm，生物量較高，為66.42 mg；而在牛肉蛋白胨培養(yǎng)基上生長速度和生物量較魚蛋白胨培養(yǎng)基上較差。在植物性氮源（大豆蛋白）培養(yǎng)基中，不僅其生長速度慢，而且生物量較少。在無機(jī)氮源中，比較亞硝酸鈉、硫酸銨、尿素3種氮源培養(yǎng)基，短裙竹蓀菌絲體在硫酸銨培養(yǎng)基中`雖然生長速度較慢，但是其氣生菌絲濃密，生物量也較高，為58.57 mg；而在亞硝酸鈉和尿素培養(yǎng)基中未見肉眼可辨的菌絲體生長。

3 討論

短裙竹蓀菌絲體在各種固體培養(yǎng)基上均能生長，對各種碳源和氮源的適應(yīng)性也較強(qiáng)，這是其能在自然環(huán)境中長期生存繁衍的原因之一。

在所有供試培養(yǎng)基中，短裙竹蓀菌絲體在GPY固體培養(yǎng)基中擴(kuò)散速度較快，而且氣生菌絲生長較致密、發(fā)達(dá)，GPY為最適固體培養(yǎng)基。在不同碳源中，短裙竹蓀菌絲體均能生長，說明其對碳源適應(yīng)較強(qiáng)，而在甘露糖、木糖醇、木糖、果糖為碳源培養(yǎng)基中生長較好。在所試不同氮源中，短裙竹蓀菌絲體在有機(jī)氮源的固體培養(yǎng)基上均能生長，其菌絲體在魚蛋白胨培養(yǎng)基中生長較好，生物量也較高，適合作為短裙竹蓀菌絲體的固體培養(yǎng)基的氮源；在無機(jī)氮源中只有在硫酸銨培養(yǎng)基中生長，而且其生物量獲得也較高，在以亞硝酸鈉和尿素培養(yǎng)基中未見肉眼可辨的菌絲生長。

目前，由于對短裙竹蓀的研究比較缺乏，其作為1種具有潛在藥用價(jià)值的食用菌開發(fā)前景廣闊，迫切需要開展短裙竹蓀的藥理研究。

[1]楊海龍，李偉.短裙竹蓀多糖清除及對人紅細(xì)胞膜自由基氧化的影響[J].科技通報(bào)，2000（5）：371-374.

[2]羅凡.短裙竹蓀室外高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].食用菌，1994（5）：32.

[3]林玉滿，蘇愛華.短裙竹蓀（Dityophora duplicata） 凝集素純化與生化性質(zhì)[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2005（1）：101-107.

[4]林玉滿.短裙竹蓀多糖Dd-S3P的分離純化及其性質(zhì)研究[J].生物化學(xué)雜志，1997（1）：99-102.

[5]林玉滿，陳利永，余萍.短裙竹蓀（Dictyophora duplicata）多糖的研究（I）──Dd多糖的分離、純化及其部分理化性質(zhì)[J].福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1995（1）：75-78.

Culture Characteristics of Dityophora duplicata Grown on Different Solid Media

CHEN Meng-meng1,CHENG Xian-hao2,JI Kai-kai1,Gao Xing-xi2
(1.College of Life Science,Ludong University,Yantai 264025,China;2.College of Agriculture,Ludong University,Yantai 264025,China)

To explore the culture characteristics of Dityophora duplicata on solid media,we use solid agar medium to culture D.duplicata.Effects of different solid media,carbon sources and nitrogen sources on growth and morphology of D.duplicata were studied.Mycelial growth rate was fastest on PDA medium.D.duplicata grew better when mannose,xylitol,xylose and fructose were carbon sources on soild media.Organic nitrogen sources can be used by D.duplicata.D.duplicata grew better when fish peptone and ammonium sulfate were nitrogen sources,but there were no growth of mycelial on solid medium when sodium nitrite and carbamide were nitrogen sources.

Dityophora duplicata;solid culture;carbon source;nitrogen source

S646.9

A

1003-8310（2017）06-0047-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.06.010

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系食用菌產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（魯農(nóng)科技字 [2016]18號）；山東省自然科學(xué)基金（ZR2010CL020）。

陳蒙蒙（1989-），女，在讀碩士研究生，主要研究方向?yàn)榫锢门c保護(hù)。E-mail:cmmmlyn＠163.com

**通信作者：程顯好（1966-），男，博士，教授，主要從事食（藥）用真菌產(chǎn)品研發(fā)。E-mail:chengxianhao＠sohu.com

2017-09-22