雙特異性磷酸酶6在卵巢漿液性上皮腫瘤中的表達(dá)及臨床意義

徐平平，倪莎，周欣

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

雙特異性磷酸酶6在卵巢漿液性上皮腫瘤中的表達(dá)及臨床意義

徐平平，倪莎，周欣

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

目的探討雙特異性磷酸酶6 （DUSP6） 在卵巢漿液性上皮腫瘤中的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化方法研究DUSP6在不同卵巢漿液性腫瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果DUSP6在卵巢漿液性癌中的表達(dá)水平明顯低于卵巢良性及交界性漿液性腫瘤 （均P ＜ 0.001） 。DUSP6在卵巢漿液性癌中的表達(dá)CA125≤900 U/mL組低于CA125＞900 U/mL組 （P ＜ 0.05） ；DUSP6在卵巢漿液性癌中的表達(dá)腹水≤500 mL組低于腹水＞500 mL組 （P ＜ 0.05） 。結(jié)論DUSP6表達(dá)與卵巢漿液性癌的發(fā)生相關(guān)，并且可能參與了卵巢漿液性癌的盆腹腔轉(zhuǎn)移過程，可能成為卵巢漿液性癌早期診斷及阻斷盆腹腔轉(zhuǎn)移的新的分子標(biāo)志物。

雙特異性磷酸酶6； 卵巢漿液性癌； 腹水； CA125

卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一，起病隱匿，早期不容易發(fā)現(xiàn)，確診時(shí)多已發(fā)生廣泛的盆腹腔轉(zhuǎn)移，手術(shù)難以徹底清除病灶，預(yù)后極差，致死率極高。發(fā)現(xiàn)新的早期診斷指標(biāo)和有效阻斷卵巢癌的盆腹腔種植轉(zhuǎn)移對改善卵巢癌患者的預(yù)后非常重要。

在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，蛋白激酶和磷酸酶之間保持著一種微妙的平衡，這種平衡調(diào)控著多種多樣的細(xì)胞功能。雙特異性磷酸酶6 （dual-specificity phosphatase 6，DUSP6） 是促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK） 磷 酸 酶家族的一員，是細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶1/2 （extracellular signal-regulated kinases 1/2，ERK1/2） 重要的負(fù)反饋因子。它通過使ERK1/2的酪氨酸/蘇氨酸殘基去磷酸化，抑制ERK1/2的活性，進(jìn)而影響ERK1/2調(diào)控的細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移和凋亡等病理生理過程［1］。有研究表明DUSP6在不同腫瘤組織中的表達(dá)情況不盡相同，既可以以抑癌基因的形式、亦可以以原癌基因的形式參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，如在胰腺癌、前列腺癌、食管鱗癌等惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)［2-4］，在甲狀腺乳頭狀癌、肝癌及小鼠黑色素瘤等惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)［5-8］。本研究探討了DUSP6在卵巢漿液性上皮癌中的表達(dá)情況及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集2008年4月至2014年8月中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病理科164例卵巢漿液性上皮腫瘤石蠟組織標(biāo)本。卵巢漿液性癌102例，患者年齡33～74歲，中位年齡52歲。臨床分期 （2000年FIGO分期） ：Ⅰ期18例，Ⅱ期13例，Ⅲ期 67例，Ⅳ期4例；組織學(xué)分級：G1期 （高分化） 18例，G2期 （中分化） 31例，G2～3期 （中～低分化） 29例，G3期 （低分化） 24例；行血清CA125檢測100例，其中CA125≤900 U/mL 56例， CA125＞900 U/mL 44例；明確記載腹水情況98例，其中腹水≤500 mL 55例，腹水＞500 mL 43例；行標(biāo)準(zhǔn)淋巴結(jié)清掃術(shù)68例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例。卵巢漿液性囊腺瘤32例，患者年齡16～77歲，中位年齡57歲。卵巢交界性漿液性囊腺瘤30例，患者年齡21～70歲，中位年齡39.5歲。所有患者均為初次治療。

1.2 主要試劑

兔抗人DUSP6多克隆抗體購自博奧森公司。SP試劑盒及DAB顯色試劑盒購自中衫金橋公司。

1.3 免疫組化

收集經(jīng)石蠟包埋的組織，經(jīng)過切片、脫蠟、蒸餾水浸泡；抗原微波修復(fù)，PBS浸泡；3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化氫酶 （37 ℃ 40 min） ，PBS浸泡；山羊血清封閉 （37 ℃ 40 min） ，滴加一抗 （濃度1∶1 000）；濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜 （16 h） ；復(fù)溫 （室溫30 min，37 ℃孵育30 min） ，PBS浸泡；滴加抗兔IgG第二抗體 （37 ℃孵育30 min） ，PBS浸泡；滴加辣根過氧化物酶 （37 ℃孵育30 min） ，PBS浸泡；DAB顯色；自來水沖洗，蘇木精復(fù)染；脫水，透明，封片。

1.4 結(jié)果判定

所有切片均選取5個(gè)高倍視野，由2位病理科醫(yī)生采用盲法閱片，根據(jù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度和著色比例進(jìn)行評分。不著色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。著色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)：≤5%，0分；＞5%～25%，1分；＞25%～50%，2分；＞50%～75%，3分；＞75%，4分。2項(xiàng)相乘得到最后的評分，＜7分為低表達(dá)，≥7分為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。DUSP6的表達(dá)情況及其與臨床病理特征之間的關(guān)系應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 DUSP6在不同卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

DUSP6的表達(dá)主要位于腫瘤上皮組織的胞質(zhì)內(nèi)。DUSP6在卵巢良性及交界性腫瘤中的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P = 0.830） ；在卵巢癌中的表達(dá)顯著低于卵巢良性及交界性腫瘤 （P ＜ 0.001） 。見圖1、表1。

2.2 DUSP6表達(dá)與卵巢漿液性癌臨床病理特征的關(guān)系

DUSP6表達(dá)與卵巢癌患者術(shù)前血清CA125及腹水量相關(guān) （P ＜ 0.05） 。DUSP6在血清CA125≤900 U/mL組表達(dá)低于CA125＞900 U/mL組；在腹水≤500 mL組中的表達(dá)低于腹水＞500 mL組。DUSP6表達(dá)與患者年齡、FIGO分期、組織分化程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān) （均P ＞ 0.05） ，見表2。

3 討論

DUSP6是MAPK激酶家族的重要成員。其基因存在于染色體12q22-23，由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成，cDNA的長度約2.5×103bp［9］。DUSP6是一個(gè)具有雙重特異性磷酸酶性質(zhì)的MAPK磷酸酶，通過使酪氨酸/蘇氨酸殘基去磷酸化抑制ERK1/2的生物學(xué)功能。上述過程是一個(gè)負(fù)反饋過程，當(dāng)這一過程的平衡被打破，就可能引起惡性腫瘤的發(fā)生［1，10］。

本研究結(jié)果證實(shí)，DUSP6在卵巢漿液性癌中的表達(dá)水平低于良性及交界性腫瘤，提示DUSP6表達(dá)下調(diào)與卵巢漿液性癌的發(fā)生有關(guān)。FURUKAWA等［2］研究發(fā)現(xiàn)在胰腺癌中，DUSP6可以抑制細(xì)胞生長并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。有研究［3］證實(shí)DUSP6表達(dá)上調(diào)可以抑制DU-145人前列腺癌細(xì)胞的侵襲及生長，DUSP6表達(dá)缺失促進(jìn)LNCap人前列腺癌細(xì)胞的侵襲及擴(kuò)散，并且發(fā)現(xiàn)在小鼠體內(nèi)DUSP6可以促進(jìn)DU-145細(xì)胞的擴(kuò)散及肝臟轉(zhuǎn)移。有學(xué)者［4］發(fā)現(xiàn)DUSP6參與了細(xì)胞凋亡的過程。CHAN等［11］通過質(zhì)粒及RNA干擾技術(shù)和細(xì)胞活力測定實(shí)驗(yàn)證實(shí)DUSP6表達(dá)上調(diào)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖速率及錨定依賴性生長能力。因此，當(dāng)DUSP6表達(dá)下調(diào)時(shí)，可能促進(jìn)了卵巢上皮細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、增殖能力，或者抑制細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而促進(jìn)了卵巢漿液性上皮癌的發(fā)生。ERK1/2的異常激活可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、異常分化或者抑制細(xì)胞凋亡；DUSP6是ERK1/2重要的負(fù)反饋因子，當(dāng)DUSP6表達(dá)下調(diào)時(shí)，會異常激活ERK1/2信號傳導(dǎo)通路，引起腫瘤發(fā)生甚至惡性轉(zhuǎn)化［1］。因此，DUSP6可能通過ERK1/2傳導(dǎo)通路參與卵巢漿液性上皮癌的發(fā)生。

圖1 DUSP6在不同卵巢腫瘤組織中的表達(dá) ×400Fig.1 Expression of DUSP6 in ovarian serous tumors ×400

表1 DUSP6在不同卵巢腫瘤組織中的表達(dá)［n （%） ］Tab.1 Expression of DUSP6 in ovarian serous tumors ［n （%） ］

本研究結(jié)果顯示，DUSP6在腹水＞500 mL組的表達(dá)較腹水≤500 mL組上調(diào)；血清CA125＞900 U/mL組表達(dá)較CA125≤900 U/mL組上調(diào)。腹水是卵巢癌腹腔轉(zhuǎn)移常見的癥狀，淋巴管的堵塞是腹水形成的早期改變，甚至在腹水形成之前即可出現(xiàn)淋巴管堵塞，當(dāng)腹水生成與清除的平衡被打破時(shí)便形成了腹水。CA125是一種癌胚抗原，腹膜、子宮內(nèi)膜、卵巢生發(fā)上皮等均可生成并釋放CA125，其中，腹膜是CA125的重要來源。當(dāng)卵巢癌發(fā)生腹膜、膈、網(wǎng)膜等廣泛種植及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，阻塞淋巴管形成腹水，并且刺激腹膜產(chǎn)生大量CA125。本研究證實(shí)DUSP6與卵巢漿液性癌的腹水及血清CA125具有一定相關(guān)性，表明DUSP6可能與卵巢漿液性上皮癌的盆腹腔轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，DUSP6表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)了卵巢漿液性癌的盆腹腔轉(zhuǎn)移。

綜上所述，DUSP6與卵巢漿液性癌的發(fā)生相關(guān)，可能成為卵巢漿液性癌早期診斷的新的分子標(biāo)志物。DUSP6與卵巢漿液性癌的術(shù)前腹水量及血清CA125有一定的相關(guān)性，有望成為阻斷卵巢癌盆腹腔轉(zhuǎn)移的潛在治療靶點(diǎn)。

表2 DUSP6的表達(dá)與卵巢漿液性癌臨床病理特征的關(guān)系 ［n （%） ］Tab.2 Correlation between the expression of DUSP6 and clinical characteristics in ovarian serous cystadenocarcinoma ［n （%） ］

［1］ ARKELL RS，DICKINSON RJ，SQUIREES M，et al. DUSP6/MKP-3 inactivates ERK1/2 but fails to bind and inactivate ERK5［J］. Cell Signal，2008，20（ 5） ：836-843. DOI：10.1016/j.cellsig.2007.12.014.

［2］ FURUKAWA T，SUNAMURA M，MOTOI F，et al. Potential tumor suppressive pathway involving DUSP6/MKP-3 in pancreatic cancer［J］. Am J Pathol，2003，162（ 6） ：1807-1815. DOI：10.1016/S0002-9440（ 10） 64315-5.

［3］ ZHAI X，HAN Q，SHAN Z，et al. Dual specificity phosphatase 6 suppresses the growth and metastasis of prostate cancer cells［ J］. Mol Med Rep，2014，10（ 6） ：3052-3058. DOI：10.3892/mmr.2014.2575.

［4］ MA JJ，YU XY，GUO L，et al. DUSP6，a tumor suppressor，is involved in differentiation and apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma［ J］. Oncol Lett，2013，6（ 6） ：1624-1630. DOI：10.3892/ol.2013.1605.

［5］ DEGL’INNOCENTI D，ROMEO P，TARANTINO E，et al. DUSP6/MKP3 is overexpressed in papillary and poorly differentiated thyroid carcinoma and contributes to neoplastic properties of thyroid cancer cells［ J］. Endocr Relat Cancer，2013，20（ 1） ：23-27. DOI：10.1530/ERC-12-0078.

［6］ LEE JU，HUANG S，LEE MH，et al. Dual specificity phosphatase 6 as a predictor of invasiveness in papillary thyroid cancer［ J］. Eur J Endocrinol，2012，167（ 1） ：93-101. DOI：10.1530/EJE-12-0010.

［7］ YANG B，TAN Y，SUN H，et al. Higher intratumor than peritumor expression of DUSP6/MKP-3 is associated with recurrence after curative resection of hepatocellular carcinoma［ J］. Chin Med J（ Engl） ，2014，127（ 7） ：1211-1217. DOI：10.3760/cma.j.issn.0366-6999.20122329.

［8］ LI W，SONG L，RITCHIE AM，et al. Increased levels of DUSP6 phosphatase stimulate tumourigenesis in a molecularly distinct melanoma subtype［ J］. Pigment Cell Melanoma Res，2012，25（ 2） ：188-199. DOI：10.1111/j.1755-148X.2011.00949.x.

［9］ FURUKAWA T，YATSUOKE T，YOUSSEF EM，et al. Genomic analysis of DUSP6，a dual specificity MAP kinase phosphatase，in pancreatic cancer［ J］. Cytogenet Cell Genet，1998，82（ 3/4） ：156-159. DOI：10.1159/000015091.

［10］ EKEROT M，STAVRIDIS MP，DELAVAINE L，et al. Negative-feedback regulation of FGF signalling by DUSP6/MKP-3 is driven by ERK1/2 and mediated by Ets factor binding to a conserved site within the DUSP6/MKP-3 gene promoter［ J］. Biochem J，2008，412（ 2） ：287-298. DOI：10.1042/BJ20071512.

［11］ CHAN DW，LIU VW，TSAU GS，et al. Loss of MKP3 mediated by oxidative stress enhances tumorigenicity and chemoresistance of ovarian cancer cells［ J］. Carcinogenesis，2008，29（ 9） ：1742-1750.DOI：10.1093/carcin/bgn167.

Expression of Dual-specificity Phosphatase 6 in Ovarian Serous Epithelial Carcinomas and Its Clinical Significance

XU Pingping，NI Sha，ZHOU Xin
（Department of Obstetrics and Gynecology，Shenjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the expression of dual-specificity phosphatase 6（DUSP6） in ovarian epithelial serous tumors and the relationship between DUSP6 expression and the clinicopathological parameters of ovarian serous cystoadenocarcinoma.MethodsThe expression of DUSP6 was analyzed by immunohistochemistry. Relationships between the expression of DUSP6 and the clinicopathological parameters of ovarian serous cystadenocarcinoma were also analyzed.ResultsDUSP6 expression was lower in patients with ovarian serous cystadenocarcinoma group with serum CA125 levels of less than or equal to 900 U/mL than in patients with serum CA125 levels of greater than 900 U/mL （P ＜ 0.05） and in patients whose ascites volume was less than or equal to 500 mL than in patients whose ascites volume was greater than 500 mL （P ＜ 0.05） .ConclusionDUSP6 is related to the occurrence of ovarian serous carcinoma and is potentially related to the peritoneal metastasis of ovarian serous carcinoma. DUSP6 may be a new molecule for the early diagnosis and therapy of ovarian serous carcinoma and peritoneal metastasis.

dual-specificity phosphatase 6； ovarian serous carcinoma； ascite； CA125

R711.75

A

0258-4646 （2017） 12-1067-04

http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20171130.1758.006.html

10.12007/j.issn.0258-4646.2017.12.003

遼寧省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目 （LS201602） ；沈陽市科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金 （F15-139-9-34）

徐平平 （1989-） ，女，醫(yī)師，碩士.

周欣，E-mail：zhouxin001@medmail.com.cn

2017-06-07

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2017-11-30 17:58

（編輯 武玉欣）