妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中LXRα和Endoglin基因的表達(dá)

王則緋,姜 鋒，暴 蕾

1.陜西省第四人民醫(yī)院 (西安 710043)，2.空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院產(chǎn)科(西安 710000)，3.西安市第四醫(yī)院(西安 710004)

妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中LXRα和Endoglin基因的表達(dá)

王則緋1,姜 鋒2，暴 蕾3

1.陜西省第四人民醫(yī)院 (西安 710043)，2.空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院產(chǎn)科(西安 710000)，3.西安市第四醫(yī)院(西安 710004)

目的：探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中肝X受體α(LXRα)和Endoglin基因的表達(dá)及其臨床意義。方法：收集婦產(chǎn)科64例妊娠期高血壓疾病患者及28例用作對(duì)照的正常妊娠婦女，胎盤娩出后即刻取胎盤組織處理后用RT-PCR法檢測(cè)LXRα mRNA和Endoglin mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織LXRα mRNA和Endoglin mRNA表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，輕度子癇前期患者明顯高于妊娠期高血壓患者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，重度子癇前期患者明顯高于輕度子癇前期患者(P<0.05)。LXRα mRNA和Endoglin mRNA在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.473)。結(jié)論：研究表明LXRα和Endoglin基因的過(guò)度表達(dá)均能促進(jìn)妊娠期高血壓疾病的發(fā)病及發(fā)展，且二者可能共同參與疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

妊娠期高血壓疾病包括妊娠期高血壓、子癇前期、子癇、慢性高血壓并發(fā)子癇前期、妊娠合并慢性高血壓5種類型。目前認(rèn)為子癇前期滋養(yǎng)細(xì)胞缺血缺氧對(duì)妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有重要影響。醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肝X受體α(LXR-α)和Endoglin均被認(rèn)為與滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖或侵蝕有一定關(guān)系[1-2]。本研究探討了妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中LXRα和Endoglin基因的表達(dá)情況，以期提高對(duì)妊娠期高血壓疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。

資料與方法

1 一般資料 收集我院婦產(chǎn)科自2014年1月至2017年1月間收治的妊娠期高血壓疾病患者64例，年齡20～36歲，平均年齡29.62±3.19歲；孕齡250～292 d，平均(265.62±13.91) d，其中有妊娠期高血壓23例，輕度子癇前期21例，重度子癇前期20例。選擇同期產(chǎn)檢正常的妊娠婦女28例作為對(duì)照，年齡21～38歲，平均年齡(29.21±2.98)歲；孕齡249～291 d，平均(265.48±13.22) d；所有孕婦均為單胎，并將孕前患有原發(fā)性高血壓、糖尿病、肝腎功能不全等慢性病的患者排除在外，患者知情同意。

2 標(biāo)本采集及方法 胎盤娩出后即刻取臍帶對(duì)側(cè)胎盤組織300 mg，不含羊膜層，剪成1 cm×1 cm×1 cm大小，吸干水分，后用凍存管盛裝，投入液氮過(guò)夜后凍存。RNA提取與反轉(zhuǎn)錄：按總RNA提取試劑盒說(shuō)明書提取RNA，將組織總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，條件：30 ℃5 min，42 ℃ 60 min，99 ℃ 5 min，5 ℃ 5 min，建立20μLPCR反應(yīng)體系。RT-PCR法：LXRα上游引物為5'-TGGAG-ACATCTCGGAGGTAC-3'，下游引物為5'-GCAATGAGCAAGGCAAACT-3'；Endoglin上游引物為5'-TAGCCCTGCGTCCCAAGA-3'，下游引物為5'-CGATGAGGAAGGCACCAAA-3'。以葡萄糖磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參照，上游引物為:5′-TCATGGGTGTGAACCATGAGAA-3′，下游引物為5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′。采用SYBRGreen熒光染料法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃30 s，52 ℃30 s，72 ℃30 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，用計(jì)算機(jī)掃描分析，用基于??Ct的方法進(jìn)行相對(duì)定量分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用pearson線性相關(guān)分析，取P<0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組胎盤組織中LXRα mRNA和Endoglin mRNA表達(dá)水平比較 妊娠期高血壓疾病患者LXRα mRNA和Endoglin mRNA表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，輕度子癇前期患者明顯高于妊娠期高血壓患者(t=3.550，P<0.05)，重度子癇前期患者明顯高于妊娠期高血壓患者(t=5.767，P<0.05)，重度子癇前期患者明顯高于輕度子癇前期患者(t=3.432，P<0.05),見表1。

2 相關(guān)性分析 LXRα mRNA和Endoglin mRNA在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.473，P<0.05),見圖1。

表1 各組胎盤組織中LXRα mRNA和Endoglin mRNA表達(dá)水平比較

圖1 LXRαmRNA和EndoglinmRNA相關(guān)性分析

討 論

妊娠期高血壓疾病對(duì)母嬰的危害大，如何預(yù)防及治療該病一直以來(lái)都是臨床醫(yī)生十分關(guān)心的問題。目前妊娠期高血壓疾病的發(fā)病是多因素共同作用的結(jié)果，近年研究發(fā)現(xiàn)它與子宮胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞缺血、缺氧有關(guān)[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓疾病患者LXRα mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，且從妊娠期高血壓到重度子癇前期，LXRα mRNA的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，與既往研究相符，提示LXRα基因與娠期高血壓疾病的發(fā)病、進(jìn)展密切相關(guān)，可能是LXRα參與體內(nèi)多種生理活動(dòng)的調(diào)節(jié)，過(guò)度表達(dá)時(shí)通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)途徑，引起一些因子水平變化，影響滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)子宮血管的浸潤(rùn)，影響螺旋動(dòng)脈重塑，甚至出現(xiàn)粥樣硬化[4-5]，從而降低胎盤血流灌注，出現(xiàn)妊娠期高血壓疾病并加重。

此外研究也發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓疾病患者Endoglin mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，且從妊娠期高血壓到重度子癇前期，Endoglin mRNA的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，與既往研究相符，提示Endoglin不僅參與了妊娠期高血壓疾病的病理生理過(guò)程，而且還加速了疾病的進(jìn)展。Endoglin參與妊娠期高血壓疾病作用機(jī)制還不清楚。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究均有發(fā)現(xiàn)，低氧可誘導(dǎo)Endoglin表達(dá)。故而推測(cè)可能為低氧環(huán)境下，Endoglin表達(dá)上調(diào)，從而進(jìn)一步使具有誘導(dǎo)促血管形成作用的TGF-β信號(hào)途徑受到阻斷，減少胎盤血管生成，降低胎盤血流灌注，并且還可通過(guò)復(fù)雜的途徑使具有舒張血管功能的NO減少，導(dǎo)致外周血管阻力增加，最終引起高血壓、蛋白尿等臨床癥狀[6-7]。

相關(guān)性分析結(jié)果表明，LXRα mRNA和Endoglin mRNA在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，提示二者可能存在一定的相互作用共同促進(jìn)了妊娠期高血壓病的發(fā)生發(fā)展。國(guó)外的研究也表明，用LXRα的激活劑T0901317處理絨癌細(xì)胞系JAR細(xì)胞，可提高Endoglin啟動(dòng)子的活性，上調(diào)Endoglin基因和蛋白的表達(dá)[8]。但二者相互作用的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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高血壓, 妊娠 胎盤 @肝X受體α @Endoglin

R714.2

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.053

(收稿：2017-10-18)