尿液Tenascin-C測(cè)定在膀胱腫瘤患者篩查中的應(yīng)用

李春夢(mèng), 張 紅, 賀龍梅，王建利

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710003)，2.陜西省咸陽(yáng)市干部保健局(咸陽(yáng)712000)

尿液Tenascin-C測(cè)定在膀胱腫瘤患者篩查中的應(yīng)用

李春夢(mèng)1, 張 紅1, 賀龍梅1，王建利2△

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710003)，2.陜西省咸陽(yáng)市干部保健局(咸陽(yáng)712000)

目的：分析TN-C在可疑膀胱腫瘤患者尿液中的含量，探討尿液TN-C含量與膀胱腫瘤及腫瘤分級(jí)之間的關(guān)系。方法：收集可疑膀胱腫瘤患者及健康志愿者尿液，離心后取上清液，用ELISA試劑盒測(cè)定其TN-C含量，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：可疑膀胱腫瘤患者尿液中TN-C含量顯著高于健康志愿者；尿液TN-C含量作為初步診斷膀胱腫瘤的靈敏度和特異度分別是0.9635和0.9452；膀胱腫瘤患者，尿液TN-C含量與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān)。結(jié)論：尿液TN-C含量可作為膀胱腫瘤患者初步診斷的一個(gè)參考因素，且與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān)，但需排除炎癥性疾病等。

世界范圍內(nèi)，每年大約有350 000例新增膀胱腫瘤患者，其中絕大多數(shù)為移行細(xì)胞癌，此類(lèi)患者中，約70%～80%患者初步診斷為表淺性膀胱腫瘤，其余則為浸潤(rùn)性膀胱腫瘤[1]；本研究通過(guò)測(cè)定膀胱腫瘤患者以及志愿者(作為對(duì)照)尿液中TN-C的含量，初步闡明TN-C在膀胱腫瘤篩查中的應(yīng)用。

資料與方法

1 一般資料 收集首診可疑膀胱腫瘤且無(wú)其它器官腫瘤病史患者的新鮮尿液(患者檢查如輸尿管鏡檢、膀胱鏡檢與碎石等治療前留取)98例(實(shí)驗(yàn)組)，其中男性57例，女性41例，平均年齡56.75歲(24～82歲)，膀胱腫瘤最后的病理分級(jí)由手術(shù)或膀胱鏡取活檢送病理科確診；同時(shí)，收集健康志愿者新鮮尿液80例(對(duì)照組)，其中男性48例，女性32例，平均年齡45歲(20～67歲)。

2 儀器與試劑 離心機(jī)(Eppendorf 5810R，德國(guó))，酶標(biāo)儀(Bio-Tek Epoch，美國(guó))，TN-C ELISA試劑盒購(gòu)于上海西塘生物科技公司(靈敏度大于2ng/ml)。

3 方 法 所有尿液3 000轉(zhuǎn)/min離心10 min，吸取上清液按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，酶標(biāo)儀測(cè)定尿液中TN-C濃度。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組尿液TN-C濃度通過(guò)t檢驗(yàn)分析，尿液TN-C濃度與腫瘤分級(jí)之間的關(guān)系通過(guò)Rank相關(guān)性分析進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組尿液TN-C含量測(cè)定結(jié)果比較 見(jiàn)表1。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組尿液中TN-C含量顯著升高(P<0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組尿液TN-C含量測(cè)定結(jié)果比較

注：*P<0.05

2 尿液TN-C診斷膀胱腫瘤的靈敏度和特異度 見(jiàn)表2。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)組尿液中TN-C含量的測(cè)定并結(jié)合后期對(duì)應(yīng)的病理學(xué)診斷，以對(duì)照組尿液TN-C含量平均值(0.0025±0.0023)μg/ml為分界線，大于該均值者初步判斷為尿液TN-C陽(yáng)性；發(fā)現(xiàn)以尿液中TN-C的含量作為標(biāo)記，初步判定膀胱腫瘤有很好的靈敏度(0.9635)和特異度(0.9452)。

表2 尿液TN-C診斷膀胱腫瘤的靈敏度和特異度(例)

注：靈敏度=0.9635；特異度=0.9452

3 尿液TN-C濃度作為膀胱腫瘤標(biāo)記物，對(duì)膀胱腫瘤誤診(漏診)情況 通過(guò)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在已確診的膀胱腫瘤患者中有8例與對(duì)照組相比，尿液TN-C濃度降低；在對(duì)照組中有9例尿液TN-C濃度高于膀胱腫瘤患者，即存在一定的誤診和漏診。

4 膀胱腫瘤患者尿液TN-C含量與其腫瘤分級(jí)呈正相關(guān) 為進(jìn)一步明確尿液TN-C含量與患者腫瘤分級(jí)的關(guān)系，依據(jù)病理診斷結(jié)果將其分為三組即G1、G2 和G3，分別計(jì)算其TN-C含量平均值，觀察尿液TN-C含量與腫瘤分級(jí)的關(guān)系，尿液TN-C含量在不同分級(jí)的膀胱腫瘤患者中含量不同，且G3組含量顯著高于G1和G2組的含量(P<0.05)；提示隨著膀胱腫瘤級(jí)別升高，尿液中TN-C顯著升高。

討 論

目前膀胱腫瘤診斷的金指標(biāo)即膀胱鏡下取得腫瘤標(biāo)本，但因其有創(chuàng)，加之花費(fèi)較大，應(yīng)用受限[2]。尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞有重要意義，但是多為陰性結(jié)果[3,4]。前期相關(guān)報(bào)道也指出了應(yīng)用相關(guān)體液中腫瘤標(biāo)記物諸如尿液中BTA[5]，NMP22[6]等來(lái)預(yù)測(cè)膀胱腫瘤相關(guān)情況，除NMP22為大家廣泛接受外，其余因報(bào)道各異，因而也存在爭(zhēng)議。因此，在膀胱腫瘤患者中尋求一種更好的、更簡(jiǎn)單易行的標(biāo)記物來(lái)初步估計(jì)膀胱腫瘤的情況顯得尤為重要。

Tenascin-C(TN-C，也稱(chēng)腱糖蛋白-C，腱生蛋白-C)是一種具有六臂體結(jié)構(gòu)的糖蛋白。廣泛表達(dá)于胚胎發(fā)育、炎癥反應(yīng)以及創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中，但在成熟的正常組織中很少見(jiàn)或缺如。TN-C最早于1983年在腦膠質(zhì)瘤中被發(fā)現(xiàn)，后期的相關(guān)研究證實(shí)，該糖蛋白在眾多腫瘤中表達(dá)升高，且與腫瘤進(jìn)展以及預(yù)后有重要關(guān)系，表現(xiàn)為一個(gè)腫瘤促進(jìn)因子，如乳腺癌、黑色素瘤、胰腺癌、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌等等。早期已有報(bào)道認(rèn)為體液(血液、尿液)中TN-C含量會(huì)在腫瘤患者中出現(xiàn)，且這種升高與腫瘤患者的腫瘤級(jí)別、預(yù)后顯著正相關(guān)。有學(xué)者測(cè)定了尿液中特異性TN-C剪切體片段(即并非包含全部外顯子的序列編碼蛋白)可以作為評(píng)估腫瘤情況的一個(gè)指標(biāo)。

本研究中，我們?cè)诳梢砂螂啄[瘤患者中通過(guò)ELISA測(cè)定的尿液TN-C濃度， 并通過(guò)與最終病理結(jié)果對(duì)比，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于健康志愿者，膀胱腫瘤患者尿液中TN-C含量極大升高，然而，我們注意到，在膀胱腫瘤患者中，仍有8例尿液TN-C含量極低，仔細(xì)分析此8例患者，發(fā)現(xiàn)6病理類(lèi)型為G1，T1N0，1例為G2，T1N0，1例為G2，T2N0。其表達(dá)低于健康志愿者，確實(shí)出乎意料。我們分析造成這個(gè)結(jié)果的原因可能與這8例患者尿液的留取、保存有關(guān)，例如，門(mén)診留尿前囑病人大量喝水導(dǎo)致尿液被稀釋等。然而此僅為推測(cè)，可能還存在某些需要進(jìn)一步深入研究的機(jī)制。另一方面，我們注意到，有9例非膀胱腫瘤患者尿液TN-C極大升高，這個(gè)結(jié)果令我們很疑惑。通過(guò)詳細(xì)分析這8例非膀胱腫瘤患者病史和相關(guān)病歷資料發(fā)現(xiàn)，9例患者中，2例有肝炎(乙肝)病史，內(nèi)科治療中，4例有腎炎，1例有較嚴(yán)重的潰瘍性結(jié)腸炎，還有2例分別因?yàn)閿?shù)月前的意外和車(chē)禍而行骨科手術(shù)治療。如前所述，TN-C被報(bào)道在炎癥反應(yīng)、損傷修復(fù)等過(guò)程中急劇升高，我們推測(cè)此9例非膀胱腫瘤患者尿液中TN-C升高可能與炎癥反應(yīng)及損傷修復(fù)有關(guān)。

此前，在乳腺癌的相關(guān)研究中，學(xué)者發(fā)現(xiàn)了促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展的特異性TN-C剪切體。在此基礎(chǔ)上，已經(jīng)有相關(guān)學(xué)者通過(guò)測(cè)定膀胱腫瘤患者尿液中TN-C不同剪切體的片段來(lái)預(yù)測(cè)膀胱腫瘤預(yù)后，并試圖測(cè)定某些與膀胱腫瘤關(guān)系最為密切的特異性剪切體。本研究中，我們采用的試劑盒針對(duì)的是完整的TN-C序列，即可以識(shí)別所有TN-C的剪切體。我們認(rèn)為，一方面，尿液中總的TN-C含量已經(jīng)很低，即達(dá)到ng級(jí)別，故而不同剪切體片段的濃度更低。所以，相對(duì)而言，測(cè)定不同剪切體片段含量時(shí)的誤差更大，針對(duì)總的TN-C的抗體即能識(shí)別所有TN-C片段的抗體反而有相對(duì)較低的測(cè)定誤差；另一方面，結(jié)合目前相關(guān)報(bào)道，我們認(rèn)為對(duì)TN-C多種剪切體的研究并沒(méi)有取得一致的結(jié)論，其功能尚未完全清楚，所以測(cè)定尿液中特異性的TN-C作為判斷膀胱腫瘤的意義有待深入一步研究證實(shí)。

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△通訊作者

膀胱腫瘤 腫瘤分級(jí) @尿液 Tenascin-C

R737.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.074

(收稿：2017-07-15)