惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達及意義

王黎，李紅，覃駿，楊華強

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北十堰442000)

惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達及意義

王黎，李紅，覃駿，楊華強

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北十堰442000)

目的檢測惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達情況，并分析其臨床意義。方法選擇58例惡性淋巴瘤患者和27例反應(yīng)增生性淋巴結(jié)炎患者，應(yīng)用免疫組化染色法檢測惡性淋巴瘤組織(觀察組)和反應(yīng)增生性淋巴結(jié)組織(對照組)中nm23、Survivin蛋白表達情況。結(jié)果觀察組nm23、Survivin呈過表達，對照組nm23、Survivin呈低表達(P均<0.01)。nm23過表達與B組癥狀、臨床分期高、惡性程度高、結(jié)外累計部位數(shù)多有關(guān)(P均<0.05)，Survivin過表達與臨床分期高、惡性程度高及乳酸脫氫酶增高有關(guān)(P均<0.05)。nm23與Survivin表達呈正相關(guān)(r=0.323，P<0.05)。結(jié)論惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白與Survivin蛋白均過表達，且nm23蛋白、Survivin蛋白過表達與惡性淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)。

惡性淋巴瘤；nm23蛋白；Survivin蛋白

惡性淋巴瘤由霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)兩大類組成[1]。nm23基因是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和植入過程中有十分重要的抑制作用[2]。在人體各組織細(xì)胞實體瘤中，nm23基因?qū)δ[瘤細(xì)胞遠處轉(zhuǎn)移的抑制作用均有研究報道[3]。Survivin基因是細(xì)胞凋亡的抑制基因之一[4]。Survivin基因表達蛋白存活素，在各種人類惡性腫瘤中具有不同程度的表達。有研究報道存活素是腫瘤患者預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一。本研究采用免疫組化法檢測惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達情況，分析二者在惡性淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展過程的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2005年1月～2017年1月在我院行手術(shù)切除的惡性淋巴瘤患者58例，男38例、女20例，年齡(57.35±6.57)歲。均經(jīng)病理學(xué)檢查證實。HL 9例，NHL 49例；臨床分期按照AnnAr-bor標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級20例，Ⅱ級13例，Ⅲ級16例，Ⅳ級9例。惡性度分級參照1993年“國際淋巴瘤預(yù)后指標(biāo)”。較低惡性程度淋巴瘤：Ⅰ級+Ⅱ級33例；較高惡性程度淋巴瘤：Ⅲ級+Ⅳ級25例。取手術(shù)切除的惡性淋巴瘤組織作為觀察組，另收集反應(yīng)增生性淋巴炎患者27例，取反應(yīng)增生性淋巴組織做為對照組。

1.2 nm23、Survivin蛋白檢測方法 采用免疫組化法。nm23抗體、Survivin抗體、免疫組化MaxvisionTM/HRP檢測試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。標(biāo)本遵照常例取材、固定、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。石蠟切片脫蠟、水化，抗原EDTA熱修復(fù)，PBS沖洗，3.3%雙氧水孵育10 min，PBS沖洗。切片上滴加一抗，4 ℃過夜，PBS沖洗；滴加MaxvisionTM/HRP試劑，室溫孵育15 min，PBS沖洗。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，PBS返藍，切片經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。以PBS替換一抗作為陰性空白對照，以邁新生物公司提供的陽性對照切片作為陽性對照。nm23陽性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈淡黃、棕黃或棕褐色顆粒，不著色或著色淺且不特異者為陰性。陽性細(xì)胞比例<10%為低表達，陽性細(xì)胞比例≥10%為過表達。Survivin陽性表現(xiàn)為細(xì)胞核呈淡黃、棕黃或棕褐色顆粒，不著色或著色淺且不特異者為陰性。陽性細(xì)胞比例<10%為低表達，陽性細(xì)胞比例≥10%為過表達。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法檢驗。等級相關(guān)分析應(yīng)用非參數(shù)Spearman檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組nm23、Survivin蛋白表達比較 對照組中nm23蛋白低表達27例、過表達0例，觀察組中低表達34例、過表達24例，兩組nm23蛋白過表達率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.593，P<0.01)。對照組Survivin蛋白低表達21例、過表達6例，觀察組低表達23例、過表達35例，兩組Survivin蛋白過表達率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.724，P<0.01)。

2.2 惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 nm23蛋白過表達與患者性別、年齡、HL/NHL、免疫表型及乳酸脫氫酶(LDH)增高無明顯相關(guān)性(P均>0.05)，而與B組癥狀、臨床分期高、惡性程度高、結(jié)外累計部位數(shù)多有關(guān)(P均<0.05)。Survivin蛋白過表達與患者性別、年齡、結(jié)外累計部位數(shù)、B組癥狀、HL/NHL及免疫表型無明顯相關(guān)性(P均>0.05)，與臨床分期高、惡性程度高及LDH增高有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1 惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

2.3 惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白與Survivin蛋白表達的相關(guān)性 58例惡性淋巴瘤中，nm23、Survivin蛋白均呈過表達19例，nm23過表達而Survivin呈低表達5例，nm23低表達而Survivin過表達16例，兩者均呈低表達18例。相關(guān)性分析顯示，nm23與Survivin蛋白表達呈正相關(guān)(χ2=4.794，r=0.323，P<0.05)。

3 討論

惡性淋巴瘤是來源于淋巴造血系統(tǒng)細(xì)胞異常增殖、分化的惡性腫瘤。研究顯示，nm23基因在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及浸潤轉(zhuǎn)移中起著十分重要的作用,抑制nm23基因表達可逆轉(zhuǎn)分化耐受細(xì)胞對分化誘導(dǎo)劑的敏感性[5]。Survivin基因具有腫瘤特異性，其只表達于腫瘤和胚胎組織，與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6]。這兩個基因均與惡性腫瘤的增殖分化和侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，本研究就nm23、Survivin蛋白在惡性淋巴瘤的表達情況進行分析，探討二者之間可能存在的關(guān)系。

nm23基因編碼蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中，擁有多種生物學(xué)功能，主要與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能緊密相關(guān)。在實體腫瘤組織(如乳腺癌、胃癌和黑素瘤等)中，nm23蛋白能有效抑制腫瘤細(xì)胞的遠處轉(zhuǎn)移與植入[7～11]。有研究發(fā)現(xiàn)，在正常淋巴組織細(xì)胞的早期發(fā)育中，nm23蛋白表達明顯增加，可以有效抑制小鼠和人白血病細(xì)胞分化；當(dāng)nm23基因被沉默、抑制或者敲除后，可有效提高分化誘導(dǎo)劑對耐受細(xì)胞分化作用的敏感性[5]。nm23基因的表達在正常淋巴組織細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞增殖與分化中起著十分重要的作用[12]。造血細(xì)胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程與nm23基因的過表達密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組nm23蛋白過表達率高于對照組，nm23過表達與患者性別、年齡、HL/NHL、免疫表型及LDH增高無關(guān)，而與B組癥狀、Ann Arbor分期高、惡性程度高、結(jié)外累及部位數(shù)多有關(guān)。惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白過表達率明顯高于對照組，且其過表達率與淋巴瘤惡性程度呈正相關(guān)。提示惡性淋巴瘤組織中nm23基因表達增強，nm23基因表達蛋白增加。在惡性淋巴瘤細(xì)胞中，負(fù)責(zé)浸潤、轉(zhuǎn)移的多種原癌基因表達增強，然而，多種原癌基因的增強程度超過了腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23所能拮抗的最大強度或是拮抗的范圍，因此，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23不能有效中止腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，從而導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞的浸潤、播散。這些結(jié)果表明，nm23基因的過表達率可以在一定程度上反映出惡性淋巴瘤的惡性程度，對惡性淋巴瘤的診斷存在著一定的參考價值。已有研究[5，13]發(fā)現(xiàn)，nm23基因可以抑制造血系統(tǒng)腫瘤中腫瘤細(xì)胞的分化，nm23基因過表達水平與腫瘤惡性腫瘤呈正相關(guān)。Niistsu等[2]采用免疫組織化學(xué)方法檢測惡性淋巴瘤患者nm23蛋白的表達情況，結(jié)果顯示，隨著淋巴瘤惡性程度的升高，nm23蛋白表達明顯升高，而且與患者血清LDH水平、結(jié)外病變數(shù)量、臨床分期、有無伴隨臨床癥狀和年齡存在著顯著相關(guān)性。此外，Lee等[14]研究150例NHL患者時發(fā)現(xiàn)，nm23蛋白的過表達率隨腫瘤惡性程度的增加而增加。藍建平等[15]對107例淋巴瘤的研究也證實，惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白表達水平高于正常淋巴結(jié)組織的對照組，nm23蛋白過表達水平與淋巴瘤惡性程度存在顯著相關(guān)性。

惡性腫瘤細(xì)胞存在一種典型、標(biāo)志的生物學(xué)行為是異常增強的細(xì)胞增殖、分裂能力。Survivin蛋白是參與細(xì)胞分裂、增殖的一種蛋白質(zhì)。已有研究[16]表明，Survivin蛋白的表達水平是推斷細(xì)胞惡性程度與增殖狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。Survivin蛋白在惡性淋巴瘤中的陽性表達主要定位于細(xì)胞核中。在反應(yīng)增生性淋巴結(jié)組織中Survivin蛋白呈低表達，而在惡性淋巴瘤中卻呈過表達。Survivin蛋白在反應(yīng)增生性淋巴結(jié)、惡性淋巴瘤組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Survivin的過表達與患者性別、年齡、結(jié)外累計部位數(shù)、B組癥狀、HL/NHL及免疫表型無相關(guān)性，與臨床分期高、惡性程度高及LDH增高有相關(guān)性。本研究表明，隨著惡性淋巴瘤惡化程度的增加，Survivin蛋白的表達水平逐漸升高，表明Survivin蛋白是評價惡性淋巴瘤細(xì)胞增殖、分裂的重要指標(biāo)，對惡性淋巴瘤的診斷有一定的參考價值。Survivin蛋白表達程度可為惡性淋巴瘤臨床分型、組織分級提供參考。相關(guān)性分析顯示，nm23與Survivin蛋白表達呈正相關(guān)。

綜上所述，nm23蛋白與Survivin蛋白過表達與惡性淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)。二者在基因通路信號中是否存在協(xié)同作用及其機制尚不清楚，需要進一步深入研究。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.42.031

R733

B

1002-266X(2017)42-0094-03

李紅(E-mail: 342517624@qq.com)

2017-06-02)