神經(jīng)酸對(duì)小腸隱窩細(xì)胞IEC-6紫杉醇損傷的保護(hù)機(jī)制研究

譚 為，馬 柯，趙優(yōu)雅，周衛(wèi)東，付婷婷，趙曉山，丘偉中，閔存云，王昌俊

1.廣東省人民醫(yī)院 (廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)中醫(yī)科 廣東省老年醫(yī)學(xué)研究所，廣東 廣州 510080；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院中醫(yī)科； 3.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)教研室；4.廣東省人民醫(yī)院 (廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)急危重癥醫(yī)學(xué)部；5.江西省新余市人民醫(yī)院中醫(yī)科

神經(jīng)酸對(duì)小腸隱窩細(xì)胞IEC-6紫杉醇損傷的保護(hù)機(jī)制研究

譚 為1，馬 柯2，3，趙優(yōu)雅4，周衛(wèi)東5，付婷婷1，趙曉山3，丘偉中1，閔存云1，王昌俊1

1.廣東省人民醫(yī)院 (廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)中醫(yī)科 廣東省老年醫(yī)學(xué)研究所，廣東 廣州 510080；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院中醫(yī)科； 3.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)教研室；4.廣東省人民醫(yī)院 (廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)急危重癥醫(yī)學(xué)部；5.江西省新余市人民醫(yī)院中醫(yī)科

目的探討神經(jīng)酸(nervonic acid,NA)對(duì)紫杉醇損傷的小腸隱窩細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。方法采用紫杉醇處理IEC-6細(xì)胞，檢測(cè)紫杉醇IC50濃度。MTS法檢測(cè)不同濃度NA(5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)對(duì)紫杉醇(IC50濃度)干預(yù)后的IEC-6細(xì)胞的相對(duì)增殖率。原位缺口末端檢測(cè)法(TUNEL法)檢測(cè)DNA斷裂情況。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果紫杉醇促進(jìn)正常IEC-6細(xì)胞凋亡。NA對(duì)維持細(xì)胞形態(tài)、保持細(xì)胞活力有一定作用。TUNEL法顯示,與空白對(duì)照相比較，紫杉醇組細(xì)胞凋亡明顯增加；與紫杉醇組細(xì)胞比較，NA組細(xì)胞凋亡明顯減少。與紫杉醇組比較，NA組A-FABP、p-p38、Bax、CytC、cl-Caspase-3降低(P<0.01)，Bcl-2、Bcl-2/Bax升高(P<0.01)。p38無明顯變化(P>0.05)。結(jié)論NA可通過調(diào)節(jié)p38通路、Bcl-2/Bax等減輕紫杉醇誘導(dǎo)的小腸隱窩細(xì)胞的凋亡損傷。

神經(jīng)酸；紫杉醇；小腸隱窩細(xì)胞；凋亡

神經(jīng)酸(nervonic acid，NA)相對(duì)分子量為366.6，分子式為C24H46O2，屬長(zhǎng)鏈單不飽和脂肪酸，是大腦白質(zhì)細(xì)胞膜的重要組成部分，能有效地促進(jìn)神經(jīng)組織的修復(fù)和再生，具有促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)發(fā)育、防止神經(jīng)纖維萎縮和延緩腦細(xì)胞衰老的功效。本課題組前期研究[1]發(fā)現(xiàn)，乳腺癌小鼠中，較紫杉醇模型組生存期顯著延長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)組的NA水平顯著升高(P<0.01)。NA在體內(nèi)合成代謝主要涉及脂肪酸代謝等通路。脂肪主要在小腸上段經(jīng)各種酶及膽汁酸鹽的作用水解為甘油、脂肪酸等。其主要發(fā)生場(chǎng)所在腸黏膜細(xì)胞。小腸黏膜細(xì)胞平均5 d自我更新1次。黏膜自我更新的動(dòng)力源于隱窩內(nèi)腸道干細(xì)胞。提示NA與腸隱窩細(xì)胞密切相關(guān)。目前NA對(duì)化療導(dǎo)致的隱窩細(xì)胞損傷研究尚少。本課題組體外試驗(yàn)觀察NA對(duì)紫杉醇導(dǎo)致的腸隱窩細(xì)胞IEC-6脂質(zhì)代謝及凋亡作用的影響，為化療性胃腸道黏膜炎的治療提供線索。

1 材料與方法

1.1一般材料紫杉醇注射液(30 mg/5 ml，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號(hào)100302C03)。NA(純度≥99%)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)和RPMI 1640培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；中等裂解強(qiáng)度RIPA裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)體系、一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；兔抗鼠A-FABP、NF200、Bcl-2、Bax、CytC、活性Caspase-3、p38 MAPK多克隆抗體，GAPDH單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。圖像分析軟件購(gòu)自惠州賽特電子公司。IEC-6細(xì)胞(大鼠小腸隱窩細(xì)胞)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心。

1.2方法

1.2.1 IEC-6細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)于含質(zhì)量濃度為100 g/L的胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2恒溫培養(yǎng)箱中，2～3 d換液1次，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至鋪滿培養(yǎng)瓶底80%時(shí)，加入質(zhì)量濃度為2.5 g/L胰酶溶液消化細(xì)胞，進(jìn)行傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 紫杉醇及NA量選擇：MTS法檢測(cè)不同濃度的紫杉醇作用于IEC-6細(xì)胞24 h的吸光度值(OD)。CompuSyn軟件分析紫杉醇IC50的濃度。IEC-6細(xì)胞計(jì)數(shù)后，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105ml-1，分到96孔板，每孔100 μl，即每孔細(xì)胞為1×104個(gè)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組3個(gè)孔。過夜貼壁，加入紫杉醇濃度分別為0、1、4、16、64、256 μmol/L處理24 h。檢測(cè)時(shí)加入比例為1∶10的MTS試劑，即100 μl培養(yǎng)液加入10 ml檢測(cè)液。37 ℃孵育30 min后，酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nmOD值。

MTS法檢測(cè)不同濃度NA作用于紫杉醇(IC50)引起的IEC-6細(xì)胞損傷的OD值。37 ℃搖動(dòng)水浴中將NA溶于甲醇，制成1.0 mmol/L的使用液。根據(jù)本室研究結(jié)果，NA分別予5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L作用于IEC-6 細(xì)胞24 h，以MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。選擇490 nm的波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上以空白組調(diào)零，測(cè)定各孔OD值，計(jì)算平均OD值。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組的溶液中加入和其他實(shí)驗(yàn)組相同終濃度的等體積溶媒)、紫杉醇組(空白對(duì)照組+IC50濃度的紫杉醇)、NA組(1、2、3，紫杉醇組+NA分別為5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)，每次實(shí)驗(yàn)需保證各試劑的效應(yīng)。各組培養(yǎng)液中甲醇終濃度≤0.5 g/L。

1.2.4 原位缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：根據(jù)紫杉醇的終濃度和NA終濃度結(jié)果，檢測(cè)NA對(duì)IEC-6細(xì)胞凋亡的影響。培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞，PBS洗3次；質(zhì)量濃度為40 g/L的多聚甲醛固定細(xì)胞30 min，PBS洗3次；用質(zhì)量濃度為1g/L的 TritonX-100的PBS(TPBS)重懸細(xì)胞，冰浴孵育2 min。2 min后PBS洗3次，避光加入50 μl 進(jìn)行TUNEL檢測(cè)(10 μl TdT酶+240 μl 熒光標(biāo)記液)，37 ℃避光孵育60 min。PBS洗3 次后，用300 μl PBS懸浮細(xì)胞，激光共聚焦掃描顯微鏡觀察，激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)513～523 nm。

1.2.5 檢測(cè)NA對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的影響：蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)NA對(duì)IEC-6細(xì)胞脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)、p38、p-P38、Bcl-2、Bax和CytC、cl-Caspase-3表達(dá)的影響。收集各組經(jīng)過處理的細(xì)胞，以中等裂解強(qiáng)度的RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量，取60～80 μg/孔蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量濃度為100 g/L的 SDS-PAGE，將電泳分離后的蛋白電轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上；質(zhì)量濃度為50 g/L的脫脂牛奶25 ℃封閉1 h，加入1∶1 000稀釋的相關(guān)抗體及1∶400稀釋的抗GAPDH抗體(內(nèi)參照)，4 ℃反應(yīng)過夜；TBST洗膜3次，加入1∶3 000稀釋的相應(yīng)二抗，室溫反應(yīng)1 h；TBST洗膜3次，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑顯色。以Image J圖像分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，以目的蛋白條帶的灰度值與GAPDH蛋白條帶的灰度值的比值表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1紫杉醇及NA劑量選擇與空白對(duì)照組相比，紫杉醇不同濃度處理組OD值均有明顯下降(P<0.01，見圖1)。用CompuSyn軟件分析得到紫衫醇IC50為12 μmol/L。與空白對(duì)照組相比，紫杉醇組、NA1組OD值顯著下降(P<0.01)，NA2、NA3組OD值無明顯變化(P>0.05)。與紫杉醇組相比，NA1組OD值無變化(P>0.05)，NA2、NA3組OD值顯著上升(P<0.01)。NA2組與NA3組比較，OD值無變化(P>0.05，見圖2)。根據(jù)以上結(jié)果，選取NA 10 μmol/L研究紫杉醇(12 μmol/L)引起IEC-6細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01。

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化光鏡下，空白對(duì)照組IEC-6細(xì)胞大小一致，輪廓清晰，無飄浮的細(xì)胞，透亮，無空泡；紫杉醇組細(xì)胞變小，部分細(xì)胞輪廓模糊，細(xì)胞飄浮較多；NA組細(xì)胞大小與空白對(duì)照組相比無明顯變化，細(xì)胞輪廓基本清晰，飄浮的細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)較空白對(duì)照組增加，較紫杉醇組減少。

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01;與紫杉醇組比較，#P<0.01。

圖2不同濃度NA對(duì)紫杉醇引起的IEC-6細(xì)胞損傷的OD值的影響

Fig2TheODvalueofpaclitaxel-injuredIEC-6cellsafterdifferentconcentrationsofNAtreated

2.3TUNEL檢測(cè)NA對(duì)IEC-6細(xì)胞的影響空白對(duì)照組和NA組的IEC細(xì)胞無明顯凋亡；與空白對(duì)照組相比，紫杉醇組細(xì)胞凋亡明顯增加；與紫杉醇組相比，NA組細(xì)胞凋亡明顯減少(見圖3)。

圖3 不同處理組IEC-6細(xì)胞凋亡檢測(cè)(200×)Fig 3 The apoptosis of IEC-6 cells in different treatment groups (200×)

2.4NA對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的影響與空白對(duì)照組相比，紫杉醇組A-FABP、p-p38、Bax、CytC、cl-Caspase3表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)，Bcl-2、Bcl-2/Bax表達(dá)下調(diào)(P<0.01)。

與紫杉醇組相比，NA組A-FABP、p-p38、Bax、CytC、cl-Caspase3表達(dá)下調(diào)(P<0.01)，Bcl-2、Bcl-2/Bax表達(dá)上調(diào)(P<0.01)，p38無明顯變化(P>0.05，見圖4～5)。

圖4 凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)Fig 4 The expressions of apoptosis related proteins in different groups

3 討論

NA是大腦中神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)、再發(fā)育及維持的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素，具有促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)發(fā)育、防止神經(jīng)纖維萎縮和延緩腦細(xì)胞衰老的功效。研究[2]證實(shí)，NA是幼兒腦部發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)成分，足月小樣兒的NA濃度低于正常足月兒，NA濃度與嬰幼兒心理與行為發(fā)展呈正相關(guān)。攝入NA同樣可改善Zellweger綜合征的癥狀，可調(diào)節(jié)和改善腦細(xì)胞膜的組成、結(jié)構(gòu)、功能，使細(xì)胞間信息傳遞更加迅速、準(zhǔn)確，改善大腦功能，增強(qiáng)記憶力[3]。NA與腸隱窩細(xì)胞密切相關(guān)，目前NA對(duì)于胃腸損傷的作用研究尚少。NA在體內(nèi)合成代謝多涉及氨基酸代謝、脂肪酸代謝等多個(gè)代謝通路。A-FABP是細(xì)胞內(nèi)脂肪酸結(jié)合蛋白家族中最具特征和最顯著生物學(xué)活性的亞型，在機(jī)體代謝、炎癥及免疫等方面均具有調(diào)節(jié)作用。多項(xiàng)研究[4-6]發(fā)現(xiàn),脂質(zhì)代謝性疾病如肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病都有血清FABP水平的升高。本研究發(fā)現(xiàn),NA對(duì)紫杉醇損傷的神經(jīng)細(xì)胞IEC-6的A-FABP有降低作用，提示NA在保護(hù)紫杉醇對(duì)隱窩細(xì)胞脂質(zhì)代謝方面有顯著保護(hù)作用。

注：##P<0.01;1.空白對(duì)照組；2.紫杉醇組;3.NA組。

圖5IEC-6細(xì)胞相關(guān)目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量A：A-FABP；B：p38；C：p-p38；D：Bcl-2；E：Bax；F：Bcl-2/Bax；G：CytC；H：cl-Caspase3

Fig5TheexpressionsofrelativeproteinsinIEC-6cellsA: A-FABP; B: p38; C: p-p38; D: Bcl-2; E: Bax; F: Bcl-2/Bax; G: CytC; H: cl-Caspase3

細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是一個(gè)多基因嚴(yán)格控制的過程。凋亡的發(fā)生既是調(diào)亡相關(guān)基因表達(dá)的結(jié)果，又受到各種內(nèi)外因素的調(diào)節(jié)。p38 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用，p38 MAPK可被磷酸化激活后調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)一些特定基因的表達(dá)，引起B(yǎng)cl-2、Caspase-3介導(dǎo)的凋亡通路[7-9]。本研究發(fā)現(xiàn),紫杉醇可顯著升高神經(jīng)細(xì)胞IEC-6的p-p38，從而引發(fā)Bcl-2-Caspase-3凋亡程序，NA可以抑制其反應(yīng)。Bcl-2和Caspase-3分別是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡兩個(gè)分子家族中的重要成員，特別是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中的作用已得到廣泛證實(shí)[10-11]。Caspase-3為Bcl-2的下游調(diào)控蛋白，是引起凋亡的始發(fā)因子，Bcl-2過量表達(dá)能有效地抑制Caspase-3激活和細(xì)胞凋亡。Bcl-2的裂解產(chǎn)物主要定位于線粒體區(qū)，從而導(dǎo)致CytC釋放入胞裝，調(diào)亡誘導(dǎo)因素和CytC可激活導(dǎo)致DNA損傷，最后導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的Caspase家族的級(jí)聯(lián)激活，從而不可避免地導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。NA抑制神經(jīng)元凋亡可能是多途徑多靶點(diǎn)的，可通過抑制p-p38、間接或直接升高Bcl-2、抑制Caspase-3等依賴的蛋白水解級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而抑制線粒體釋放細(xì)胞色素C，減少細(xì)胞調(diào)亡的發(fā)生。

本研究采用MTS法、TUNEL、Western blotting等方法，印證了NA對(duì)腸隱窩細(xì)胞IEC-6脂質(zhì)代謝A-FABP的影響及活力和凋亡相關(guān)蛋白p-p38、Bcl-2、CytC、Caspase-3和Bcl-2/Bax的影響。結(jié)果表明，NA通過下調(diào)細(xì)胞內(nèi)A-FABP、CytC、cl-Caspase3，上調(diào)Bcl-2、Bcl-2/Bax對(duì)化療導(dǎo)致的腸隱窩細(xì)胞IEC-6損傷起到保護(hù)作用，為NA臨床應(yīng)用提供依據(jù)，為化療性胃腸道黏膜炎的治療提供線索。

[1] 譚為. 五子衍宗丸對(duì)腫瘤相關(guān)性疲勞小鼠的影響及作用機(jī)制研究[D]. 南方醫(yī)科大學(xué), 2012.

Tan W. The influence and mechanism of Wu-Zi-Yan-Zong pill on cancer related fatigue in mice [D]. Southern Medical University, 2012.

[2] Strandvik B, Ntoumani E, Lundqvist-Persson C, et al. Long-chain saturated and monounsaturated fatty acids associate with development of premature infants up to 18 months of age [J]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 2016, 107: 43-49.

[3] Tanaka K, Shimizu T, Ohtsuka Y, et al. Early dietary treatments with Lorenzo’s oil and docosahexaenoic acid for neurological development in a case with Zellweger syndrome [J]. Brain Dev, 2007, 29(9): 586-589.

[4] Xu A, Tso AW, Cheung BM, et al. Circulating adipocyte-fatty acid binding protein levels predict the development of the metabolic syndrome: a 5-year prospective study [J]. Circulation, 2007, 115(12): 1537-1543.

[5] Yeung DC, Wang Y, Xu A, et al. Epidermal fatty-acid-binding protein: a new circulating biomarker associated with cardio-metabolic risk factors and carotid atherosclerosis [J]. Eur Heart J, 2008, 29(17): 2156-2163.

[6] Hoo RL, Lee IP, Zhou M, et al. Pharmacological inhibition of adipocyte fatty acid binding protein alleviates both acute liver injury and non-alcoholic steatohepatitis in mice [J]. J Hepatol, 2013, 58(2): 358-364.

[7] 楊申. P38MAPK抑制劑對(duì)血管性癡呆大鼠海馬細(xì)胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)及其學(xué)習(xí)記憶能力的影響[D]. 山東大學(xué), 2013.

[8] 徐霞, 李睿, 任嬙, 等. 硫化氫在p38MAPK信號(hào)通路對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡中的作用[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2014, 23(7): 798-802.

Xu X, Li R, Ren Q, et al. Influence of hydrogen sulfide in p38MAPK signaling pathway on rat hepatic stellate cell apoptosis [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2014, 23(7): 798-802.

[9] 朱玉俠, 趙明星, 姜登鴿, 等. 抑癌基因p53、凋亡抑制基因Bcl-2、促凋亡基因Bax在胃癌及癌前病變中的表達(dá)[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2016, 25(9): 1040-1043.

Zhu YX, Zhao MX, Jiang DG, et al. Expression of tumor suppressor gene p53, apoptosis-suppressing gene Bcl-2, proapoptotic gene Bax in gastric cancer and precancerous lesions [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2016, 25(9): 1040-1043.

[10] Hua F, Cornejo MG, Cardone MH, et al. Effects of Bcl-2 levels on Fas signaling-induced caspase-3 activation: molecular genetic tests of computational model predictions [J]. J Immunol, 2005, 175(2): 985-995.

[11] Gross A. BCL-2 family proteins as regulators of mitochondria metabolism [J]. Biochim Biophys Acta, 2016, 1857(8): 1243-1246.

(責(zé)任編輯：陳香宇)

Theprotectionmechanismofnervonicacidonpaclitaxel-inducedIEC-6cellinjury

TAN Wei1, MA Ke2,3, ZHAO Youya4, ZHOU Weidong5, FU Tingting1, ZHAO Xiaoshan3, QIU Weizhong1, MIN Cunyun1, WANG Changjun1

1.Department of Traditional Chinese Medicine, Guangdong General Hospital & Guangdong Academy of Medical Sciences; Guangdong Geriatric Institute, Guangzhou 510080; 2.Department of Traditional Chinese Medicine, Nanfang Hospital of Southern Medical University; 3.Department of Combined Traditional Chinese and Western Medicine School of Traditional Chinese Medicine, Southern Medical University; 4.Department of Emergency & Critical Care Medicine, Guangdong General Hospital & Guangdong Academy of Medical Sciences; 5.Department of Traditional Chinese Medicine, Xinyu General Hospital, China

ObjectiveTo investigate the effect of nervonic acid (NA) on IEC-6 cell induced by paclitaxel (PTX) , including mechanism and vitality.MethodsIEC-6 cell treated with PTX to detective PTX IC50. IEC-6 cells’ relative proliferative rates of NA in different levels (5 μmol/L, 10 μmol/L, 20 μmol/L) were detected by MTS assay, the expression levels of A-FABP, p38, Bcl-2, Bax, Bcl-2/Bax, CytC and cl-Caspase-3 were detected by Western blotting, and apoptotic cells of IEC-6 were detected by TUNEL.ResultsPTX could encourage normal cells apoptosis. NA was characterized with biological functions such as maintenance of cell shape and vitality. TUNEL showed that PTX could promote cells apoptosis, and NA had a protective effect on IEC-6 apoptosis induced by PTX. The expressions of A-FABP, p-p38, Bax, CytC, cl-Caspase-3 were reduced and Bcl-2, Bcl-2/Bax expression were increased in NA group compared with PTX group (P<0.01). There was no significant difference of p38 in two groups (P>0.05).ConclusionNA can reduce paclitaxel-induced apoptosis of IEC-6 cells by regulating p38 pathway and Bcl-2/Bax.

Nervonic acid; Paclitaxel; IEC-6 cell; Apoptosis

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81302958，81373582)；廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省課題資助(20131102，20151019，20151018)

譚為，主治醫(yī)師，博士，研究方向：腫瘤的臨床與基礎(chǔ)。E-mail：tanweioy@163.com

王昌俊，主任醫(yī)師，博士，研究方向：腫瘤的臨床與基礎(chǔ)。E-mail：gzwchj@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.11.018

R574.5

A

1006-5709(2017)11-1268-05

2017-01-27