瘦素在豬螺桿菌感染后胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織形成中的作用

劉亞倩，張翠萍，田字彬，楊 林，于亞男，楊若明，李曉宇，趙文君，任琳琳，張帥慶

1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 青島 266003； 2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院消化內(nèi)科

瘦素在豬螺桿菌感染后胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織形成中的作用

劉亞倩1，張翠萍1，田字彬1，楊 林1，于亞男1，楊若明1，李曉宇1，趙文君1，任琳琳1，張帥慶2

1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 青島 266003； 2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院消化內(nèi)科

目的研究瘦素在豬螺桿菌(Helicobacter suis,H.suis)感染后胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)形成中的作用及其可能的機(jī)制。方法C57BL/6野生型小鼠、瘦素缺陷(Ob/Ob)小鼠各20只隨機(jī)分為以下四組：正常小鼠未感染組(WT組)、正常小鼠H.suis感染組(WT+HS組)、Ob/Ob小鼠未感染組(Ob組)、Ob/Ob小鼠H.suis感染組(Ob+HS組)，每組10只，感染12周后處死，收集小鼠血清與胃組織。采用HE染色檢測各組小鼠胃黏膜淋巴濾泡的數(shù)量與大?。幻嘎?lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測各組小鼠血清中瘦素的濃度；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測各組小鼠胃黏膜中瘦素及其受體Ob-R、炎癥因子IFN-γ及趨化因子CXCL13 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果正常小鼠感染H.suis后可見胃黏膜淋巴濾泡形成；與WT+HS組相比，Ob+HS組小鼠血清及胃黏膜中均未檢測到瘦素的表達(dá)，胃黏膜中未觀察到淋巴濾泡形成，且IFN-γ與CXCL13 mRNA表達(dá)水平明顯降低；體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瘦素可刺激淋巴瘤B細(xì)胞分泌表達(dá)IFN-γ。結(jié)論瘦素可能通過促進(jìn)H.suis感染后胃黏膜IFN-γ的表達(dá)參與了胃MALT的形成。

瘦素；豬螺桿菌；干擾素γ；胃黏膜相關(guān)淋巴組織

豬螺桿菌(Helicobacter suis，H.suis)即海爾曼螺桿菌(Helicobacter heilmannii)1 型，是已知的人胃內(nèi)不同于幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)的另一種革蘭氏陰性桿菌，能自然定植于包括人在內(nèi)的諸多動(dòng)物胃內(nèi)，其感染率明顯低于H.pylori，多通過胃鏡檢出[1]，主要與慢性胃炎[2]、胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)[3]。H.suis感染胃黏膜后可引起淋巴細(xì)胞浸潤，激活上皮細(xì)胞和固有免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生，形成獲得性MALT。在此免疫學(xué)背景下，慢性炎癥的長期刺激可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞的克隆生長，形成以B細(xì)胞為主的MALT淋巴瘤。因此，深入研究螺桿菌感染后MALT形成的機(jī)制并進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù)，對預(yù)防胃MALT淋巴瘤的發(fā)生具有重要意義。

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和飲食結(jié)構(gòu)的變化，全世界肥胖人群的比例逐年上升，已經(jīng)成為威脅公眾健康的重要問題之一。目前許多流行病學(xué)資料顯示，肥胖是許多腫瘤(包括胃MALT淋巴瘤)發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素，并能增加其死亡率[4-6]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖可明顯促進(jìn)H.suis感染后胃MALT的形成，同時(shí)伴有瘦素表達(dá)水平的升高，說明肥胖與MALT淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)，其機(jī)制可能與瘦素的高表達(dá)有關(guān)[7]。瘦素作為一種由肥胖基因(obese,Ob)編碼的多肽類激素，主要在脂肪組織中表達(dá)，具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)[8]。脂肪組織分泌的瘦素也存在于正常胃黏膜組織中，目前被視為驅(qū)動(dòng)胃腸道腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一種新的生長因子，與其受體Ob-R結(jié)合后可通過激活信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(signal transducers and activators transcription，STAT)3等通路參與腫瘤的發(fā)生[9-10]。既往研究[11]發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞分泌的干擾素(Interferon-γ, IFN)及濾泡樹突狀細(xì)胞(follicular dendritic cells, FDC)分泌的CXCL13是H.suis感染后胃MALT形成的關(guān)鍵因子，IFN-γ可能通過促進(jìn)CXCL13的分泌參與了H.suis感染后胃MALT的形成[12]。另一方面，瘦素還可通過誘導(dǎo)多種炎癥因子和趨化因子的上調(diào)來間接發(fā)揮促癌效應(yīng)[13]。例如，瘦素可作用于CD4+T細(xì)胞，使其分泌IFN-γ增加，增強(qiáng)了Th1反應(yīng)[14-15]。因此，我們推測瘦素可能通過促進(jìn)H.suis感染后胃黏膜IFN-γ的表達(dá)參與了胃MALT的形成。本研究通過構(gòu)建H.suis感染的正常小鼠與瘦素缺陷小鼠(Ob/Ob小鼠)模型，探討瘦素在H.suis感染后胃MALT形成中的作用及其可能的機(jī)制，有望為螺桿菌感染后胃MALT的形成提供理論基礎(chǔ)，以指導(dǎo)螺桿菌感染相關(guān)性胃疾病的防治。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡雌性SPF級C57BL/6野生型小鼠與瘦素缺陷小鼠(Ob/Ob小鼠)各20只，分別購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司與常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，體質(zhì)量18～20 g，飼養(yǎng)于青島大學(xué)附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(SPF級)，溫度20～26 ℃，濕度40%～70%，照明12 h/d。水、鼠糧、墊料均經(jīng)高溫高壓滅菌，籠具定期消毒。

1.2小鼠感染模型的建立C57BL/6野生型小鼠20只隨機(jī)分為正常小鼠未感染組(WT組)與正常小鼠H.suis感染組(WT+HS組)；瘦素缺陷小鼠(Ob/Ob小鼠)20只隨機(jī)分為Ob/Ob小鼠未感染組(Ob組)與Ob/Ob小鼠H.suis感染組(Ob+HS組)，每組10只。取5只已感染H.suis的供體小鼠胃組織，加入無菌磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline, PBS)后刮取胃黏膜勻漿定容，將勻漿液等量灌胃于WT+HS組與Ob+HS組小鼠(每只小鼠0.2 ml)建立H.suis感染模型，根據(jù)文獻(xiàn)[16]方法行PCR檢測證實(shí)其胃內(nèi)只有H.suis定植而沒有H.pylori等其他螺桿菌的感染。WT組和Ob組小鼠分別給予等體積的來自正常小鼠的胃黏膜勻漿液灌胃。造模期間所有小鼠均自由攝食、飲水。

1.3小鼠血清與胃組織的收集感染12周后，各組小鼠腹腔注射質(zhì)量濃度為100 g/L水合氯醛(400 mg/kg)進(jìn)行麻醉，心臟取血 1 ml，4 ℃下12 000×g離心 10 min后分離血清；小鼠脫頸處死后取其胃組織，沿大彎剪開，以無菌PBS沖洗胃內(nèi)容物；一半胃組織石蠟包埋行蘇木精-伊紅(HE)染色，另一半胃組織用于提取RNA。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)與體外刺激實(shí)驗(yàn)人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株(Toledo)購自 ATCC (American Type Culture Collection)，培養(yǎng)于每孔含有2 ml RPMI-1640營養(yǎng)液(購自Sigma-Aldrich，加入青、鏈霉素與質(zhì)量濃度為100 g/L的胎牛血清)的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，共分為A-H共8個(gè)板，每孔細(xì)胞數(shù)為1×106。B板與D板加入重組的人瘦素(購自R&D Systems)使其終濃度為10 ng/ml后分別刺激24 h、48 h；F板與H板加入人瘦素使其終濃度為100 ng/ml后也分別刺激24 h、48 h；A板、C板加入與B板、D板等體積的雙蒸水后分別培養(yǎng)24 h、48 h；E板、G板加入與F板、H板等體積的雙蒸水后分別培養(yǎng)24 h、48 h作為對照。收集各孔培養(yǎng)體系離心后分別獲得細(xì)胞和上清液。

1.5相關(guān)指標(biāo)檢測小鼠胃組織經(jīng)石蠟包埋后10 μm連續(xù)切片，行HE染色后檢測單位長度胃黏膜中淋巴濾泡的數(shù)量及大小。采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測各組小鼠血清瘦素的濃度及體外實(shí)驗(yàn)各組上清液中IFN-γ的濃度，具體操作按試劑盒(均購自Neo Scientific)說明進(jìn)行。采用Trizol法 (購自TaKaRa公司)提取胃組織總RNA，測定RNA的純度和濃度后取1 μg RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到cDNA，用SYBR Green試劑盒 (TaKaRa) 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，利用ΔΔCt法確定各樣本胃黏膜中H.suis16S rRNA及其受體Ob-R、IFN-γ、CXCL13及體外實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞中IFN-γ mRNA相對表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)所用的引物序列如表1所示。

表1 引物序列表

2 結(jié)果

2.1各組小鼠胃內(nèi)菌量與MALT形成情況小鼠感染H.suis12周后，WT+HS組與Ob+HS組小鼠胃黏膜中均檢測到H.suis16S rRNA的表達(dá)，兩組相對菌量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。WT+HS組小鼠胃黏膜中可見明顯淋巴濾泡形成，而Ob+HS組小鼠胃黏膜中未檢測到淋巴濾泡形成(見圖1、表2)，說明瘦素是H.suis感染后胃MALT形成所必需的因子，且其對胃內(nèi)菌量水平無顯著影響。

2.2各組小鼠血清瘦素濃度及胃組織中瘦素、Ob-R、IFN-γ及CXCL13mRNA表達(dá)水平感染H.suis12周后， WT+HS組小鼠血清瘦素的濃度及胃黏膜中瘦素mRNA的表達(dá)水平均較WT組明顯增加；Ob組與Ob+HS組小鼠血清及胃黏膜中均未檢測到瘦素的表達(dá)。同時(shí)，WT+HS組小鼠胃黏膜中瘦素、受體Ob-R、炎癥因子IFN-γ與趨化因子CXCL13的mRNA表達(dá)水平也較WT組明顯增加；而上述因子在Ob組與Ob+HS組小鼠胃黏膜中的表達(dá)水平無顯著性差異，均明顯低于WT+HS組(見表3)，說明瘦素可能是H.suis感染后胃黏膜IFN-γ與CXCL13上調(diào)的重要因子。

表2 小鼠感染H.suis后胃內(nèi)菌量與淋巴濾泡的形成

圖1 各組小鼠感染H.suis后胃黏膜淋巴濾泡的形成情況(HE 40×) Fig 1 The formation of lymphoid follicles in the stomach of mice after H.suis infection (HE 40×)

表3 各組小鼠血清瘦素濃度與胃組織中瘦素及其受體Ob-R、IFN-γ、CXCL13 mRNA表達(dá)水平Tab 3 The expressions of leptin in serum and the expressions of leptin and its receptor Ob-R，IFN-γ，CXCL13 mRNA in the stomach of mice (±s)

注：與WT組相比，*P<0.01；與Ob組相比，&P>0.05；與WT+HS組相比，#P<0.01。

2.3不同瘦素刺激濃度及刺激時(shí)間對淋巴瘤B細(xì)胞分泌表達(dá)IFN-γ的影響人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株在體外經(jīng)不同濃度的瘦素分別刺激不同時(shí)間后發(fā)現(xiàn)，瘦素處理組培養(yǎng)液中IFN-γ的濃度及細(xì)胞中IFN-γ mRNA的表達(dá)水平分別較各自對照組顯著增加；隨著刺激濃度或刺激時(shí)間的增加，培養(yǎng)液中IFN-γ的濃度與細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)水平也相應(yīng)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表4)，說明瘦素在體外可刺激B細(xì)胞分泌IFN-γ。

表4 不同瘦素刺激濃度及刺激時(shí)間對淋巴瘤B細(xì)胞分泌表達(dá)IFN-γ的影響Tab 4 The effect of leptin under different concentrations and different time length on IFN-γ secretion and expression in the lymphoma B cells (±s)

注：與各自對照組相比，*P<0.01； 與10 ng/ml-24 h處理組相比，&P<0.01；與100 ng/ml-24 h處理組相比，#P<0.01。

3 討論

H.suis是人胃內(nèi)除H.pylori之外最常見的螺桿菌，雖然感染率較低，但能自然定植于人和諸多動(dòng)物胃內(nèi)并具有致病性。由于H.pylori長期感染小動(dòng)物模型的構(gòu)建一直有其局限性，如H.pylori較難長期穩(wěn)定定植于小鼠胃內(nèi)，誘導(dǎo)胃黏膜癌變或胃MALT淋巴瘤的形成耗時(shí)較長、成功率較低等，極大地阻礙了其致病機(jī)理、治療效果和疫苗的研究工作。國外有文獻(xiàn)[17]報(bào)道，小鼠感染H.suis6個(gè)月后胃中幾乎100%出現(xiàn)MALT淋巴瘤特征性的淋巴上皮病變(lymphoepithelial lesion，LEL)，因此可作為H.pylori研究的替代工具來研究胃 MALT淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制。

目前研究[18]認(rèn)為，H.pylori感染胃黏膜后可激活上皮細(xì)胞和固有免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)IFN-γ、白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-1β等炎癥因子的產(chǎn)生，作用于間質(zhì)細(xì)胞使其分泌CXCL13、CCL19、CCL21等趨化因子，募集淋巴細(xì)胞形成獲得性的MALT。近年來，我們研究[11]發(fā)現(xiàn)FDC分泌的CXCL13與濾泡B細(xì)胞分泌的IFN-γ在H.suis感染后胃淋巴濾泡形成過程中的重要作用：即腹腔注射抗CXCL13抗體可明顯抑制H.suis感染的小鼠胃黏膜中MALT的形成；IFN-γ基因缺陷小鼠感染H.suis6個(gè)月后未見胃淋巴濾泡形成，而給予來源于野生型小鼠的B細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移后，IFN-γ的表達(dá)與胃淋巴濾泡重新出現(xiàn)，表明H.suis感染后胃MALT的形成依賴于B細(xì)胞分泌的IFN-γ。此外，IFN-γ的上調(diào)可能通過誘導(dǎo)CXCL13的表達(dá)進(jìn)而募集B淋巴細(xì)胞遷移至胃黏膜參與了胃MALT的形成[12]。因此，IFN-γ是H.suis感染后胃MALT形成的關(guān)鍵因子。

肥胖是由不同炎癥因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種全身性的慢性低度炎癥狀態(tài)，可增加罹患惡性淋巴瘤的風(fēng)險(xiǎn)。研究[19]發(fā)現(xiàn)，肥胖時(shí)血清瘦素水平升高，且脂肪組織Ob mRNA表達(dá)量增加 ,說明肥胖時(shí)個(gè)體對瘦素的反應(yīng)減弱,此現(xiàn)象稱為瘦素抵抗。大部分肥胖是由于對瘦素的繼發(fā)性抵抗造成的，其原因可能與瘦素在血腦屏障處轉(zhuǎn)運(yùn)出現(xiàn)飽和、瘦素/Ob-R突變或下丘腦反饋信號(hào)被干擾，導(dǎo)致血清瘦素水平升高有關(guān)。研究[20]表明，肥胖與食管癌、結(jié)腸癌、胃癌、膽囊癌等多種消化道惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)，可增加這些疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。肥胖促腫瘤的發(fā)生機(jī)制與多種因素有關(guān)，而瘦素的高表達(dá)是其中一個(gè)重要原因。相關(guān)研究[21]表明，瘦素可刺激多種細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)等分泌，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖及新生血管的生成；許多腫瘤組織中瘦素與Ob-R呈高表達(dá)，參與了腫瘤細(xì)胞的惡性生長與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。另一方面，瘦素還可由正常胃黏膜組織分泌，其受體Ob-R高表達(dá)于B細(xì)胞淋巴瘤組織中。瘦素及其受體可通過激活 STAT3、ERK1/2 信號(hào)通路以及上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化，誘導(dǎo)胃癌的發(fā)生、發(fā)展[15]。我們最近研究[7]發(fā)現(xiàn)，高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖可明顯促進(jìn)H.suis感染后胃MALT的形成，并伴有瘦素表達(dá)水平的增高，為進(jìn)一步研究肥胖促胃MALT形成的機(jī)制是否與瘦素上調(diào)有關(guān)，我們同時(shí)感染Ob/Ob小鼠與正常野生型小鼠12周并進(jìn)行對比。Ob/Ob小鼠含有Ob基因，該基因?yàn)?號(hào)染色體隱性基因，純合子可導(dǎo)致單純肥胖并存在瘦素分泌缺陷；這種小鼠的肥胖癥與人類的肥胖癥很相似，可導(dǎo)致多種代謝失調(diào)，包括脂肪形成增加、分解減少。通過研究對比我們發(fā)現(xiàn)，WT+HS組小鼠胃黏膜中可見明顯的淋巴濾泡形成，同時(shí)胃組織中Ob-R、IFN-γ、CXCL13的mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)；而Ob/Ob小鼠感染H.suis后胃黏膜中無淋巴濾泡形成，且胃組織中Ob-R、IFN-γ、CXCL13的mRNA表達(dá)水平較WT+HS組明顯降低，因此我們認(rèn)為H.suis感染后胃黏膜瘦素表達(dá)水平的上調(diào)可能通過促進(jìn)IFN-γ的分泌參與了胃MALT形成。為證實(shí)該假說，我們體外培養(yǎng)了人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株，并加入不同濃度的瘦素刺激24 h或48 h后分別在蛋白水平與mRNA水平檢測培養(yǎng)液與細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)，結(jié)果顯示，瘦素可刺激B細(xì)胞分泌IFN-γ，并具有濃度與時(shí)間依賴性。瘦素作為一種促炎因子, 可刺激TNF-α、IL-6、IL-12等多種炎癥因子的分泌，并參與Th1/Th2細(xì)胞因子之間的平衡調(diào)節(jié)，還可通過激活JAK2/STAT3和p38MAPK/ERK1/2等信號(hào)通路，維持細(xì)胞增殖和自身免疫性疾病的易感性[15]。此外，瘦素還具有誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的趨化作用，可通過促進(jìn)氧自由基的釋放，誘導(dǎo)蛋白質(zhì)變性并損傷膜脂質(zhì)，來影響細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)，間接發(fā)揮促癌效應(yīng)。 因此，我們認(rèn)為H.suis感染后胃黏膜瘦素的高表達(dá)很可能也通過促炎效應(yīng)參與了淋巴細(xì)胞性胃炎的發(fā)生。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)瘦素可能通過促進(jìn)IFN-γ的分泌表達(dá)在H.suis感染后胃MALT的形成過程中發(fā)揮重要作用。今后對瘦素及其受體后信號(hào)傳導(dǎo)通路進(jìn)行深入探討有望為螺桿菌感染后胃MALT形成機(jī)制及肥胖促癌機(jī)制的相關(guān)研究提供理論基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編輯：馬 軍)

Theeffectofleptinontheformationofgastricmucosa-associatedlymphoidtissueafterHelicobactersuisinfection

LIU Yaqian1, ZHANG Cuiping1, TIAN Zibin1, YANG Lin1, YU Ya’nan1, YANG Ruoming1, LI Xiaoyu1, ZHAO Wenjun1, REN Linlin1, ZHANG Shuaiqing2

1.Department of Gastroenterology, the Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266003; 2.Department of Gastroenterology, Qilu Hospital of Shandong University, China

ObjectiveTo investigate the effect of leptin on the formation of gastric mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) after Helicobacter suis (H.suis) infection and its possible mechanism.MethodsTwenty female C57BL/6 wild type mice and twenty leptin-deficient (Ob/Ob) mice were randomly divided into four groups (ten mice per group)： normal uninfected wild type (WT) group,H.suisinfected wild type (WT+HS) group, uninfected Ob/Ob (Ob) group andH.suisinfected Ob/Ob (Ob+HS) group. At 12 weeks after infection, the serum and gastric tissue samples were collected from each mouse. The number and size of gastric lymphoid follicles were detected by HE staining and the expression of leptin in serum was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expressions of leptin and its receptor Ob-R, inflammatory cytokine IFN-γ and chemokine CXCL13 mRNA in the gastric mucosa were detected by real-time PCR.ResultsThe formation of gastric lymphoid follicles was observed in the gastric mucosa of WT group. Compared with WT + HS group, the expression of leptin was not detected in the serum and gastric mucosa and the formation of gastric lymphoid follicles was not observed in Ob+HS group. The expressions of IFN-γ and CXCL13 mRNA in the gastric mucosa of Ob+HS group were also reduced significantly. Vitro experiments results showed that leptin can stimulate lymphoma B cells to secret IFN-γ.ConclusionLeptin may be involved in the formation of gastric MALT afterH.suisinfection via the up-regulation of IFN-γ in the gastric mucosa.

Leptin; Helicobacter suis; IFN-γ; Gastric mucosa-associated lymphoid tissue

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81572320)；國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81502025)

劉亞倩，碩士研究生，研究方向：消化道腫瘤基礎(chǔ)與臨床。E-mail: lyq_118@163.com

楊林，副主任醫(yī)師，研究方向：消化道腫瘤基礎(chǔ)與臨床。E-mail: bobotony@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.11.022

R573.9

A

1006-5709(2017)11-1285-05

2017-05-25