黃土高原新造耕地1—氨基環(huán)丙烷—1—羧酸脫氨酶（ACCD）活性菌株的篩選及其功能特性

賈鳳安　甄麗莎　常帆　呂睿+劉晨

摘要：為了篩選性能良好的新造耕地產(chǎn)1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶（1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid deaminase，簡(jiǎn)稱ACCD）菌株，對(duì)菌株進(jìn)行多項(xiàng)分類鑒定，分離所產(chǎn)生的ACCD菌株并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行研究。以 1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（ACC）作為唯一氮源分離純化普魯蘭酶產(chǎn)生菌，通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定、16S rRNA序列分析等試驗(yàn)確定菌株的分類地位。通過(guò)Biolog自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，使用GenⅢ鑒定板進(jìn)行生理生化測(cè)定，以及不同條件下酶活性的檢測(cè)，研究菌株的產(chǎn)酶特性。通過(guò)平皿促生試驗(yàn)，研究菌株不同組分的促生作用。結(jié)果表明，從陜北新造耕地樣品中分離得到6株ACCD產(chǎn)生菌，經(jīng)過(guò)多項(xiàng)分類鑒定顯示，這些菌株主要分為假單胞菌屬（Pseudomonas）、腸桿菌屬（Enterobacter）、伯克氏菌屬（Burkholderia），其中Enterobacter菌株YAnl_w2產(chǎn)酶迅速，在最適溫度和pH值條件下ACCD活性達(dá)0.54 μmol/（mg·h）（以單位質(zhì)量酶蛋白在單位時(shí)間內(nèi)生成α-丁酮酸的物質(zhì)的量表示）。促生試驗(yàn)表明，YAnl_w2對(duì)麥種具有明顯的促生作用，具有促生應(yīng)用前景。對(duì)6株新造耕地分離菌株的多項(xiàng)分類結(jié)果鑒定發(fā)現(xiàn)，它們均為產(chǎn)ACCD的細(xì)菌，其中YAnl_w2菌株ACCD產(chǎn)率、產(chǎn)量較其他來(lái)源的酶高，對(duì)麥種促生作用明顯，具有進(jìn)一步的研究?jī)r(jià)值。

關(guān)鍵詞：1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸；ACC脫氨酶；新造耕地；根際促生菌；腸桿菌屬

中圖分類號(hào)： S182 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2017）19-0289-05

收稿日期：2016-05-23

基金項(xiàng)目：陜西省科學(xué)院科技計(jì)劃青年人才項(xiàng)目（編號(hào)：2015K-21）；陜西省科學(xué)院青年聯(lián)合創(chuàng)新項(xiàng)目（編號(hào)：2016k-18）；陜西省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：2016SF-450）。

作者簡(jiǎn)介：賈鳳安（1985—），女，陜西西安人，碩士，研究實(shí)習(xí)員，主要從事微生物肥料及微生物代謝產(chǎn)物相關(guān)研究。Tel：（029）85350847；E-mail：jiafengan@hotmail.com。

通信作者：甄麗莎，博士，助理研究員，主要從事微生物肥料及石油污染土壤修復(fù)相關(guān)研究。E-mail：zhenlisha2002@163.com。 黃土高原是全國(guó)水土流失較嚴(yán)重的地區(qū)之一，自退耕還林還草工程實(shí)施以來(lái)，黃土高原的植被覆蓋度大幅提高，生態(tài)環(huán)境逐步改善。但是在退耕還林還草工程取得巨大成就的同時(shí)，黃土高原地區(qū)退耕土地面積已經(jīng)超出可退耕面積的上限，導(dǎo)致耕地面積減少[1]，農(nóng)民口糧難以保障[2]。為有效保障地方糧食生產(chǎn)，鞏固退耕還林草的成效，達(dá)到耕地占補(bǔ)平衡的政策目標(biāo)[3]，陜西省延安市率先開(kāi)展治溝造地整治工程，以期擴(kuò)大區(qū)域內(nèi)可耕地的面積。而由治溝造地方式產(chǎn)生的新造耕地，土壤結(jié)構(gòu)已被破壞，肥力低下，難以形成高標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)田，成為制約產(chǎn)量的關(guān)鍵性因素[4]。

土地土壤的生物指標(biāo)、化學(xué)指標(biāo)及其物理指標(biāo)的退化是導(dǎo)致土地土壤質(zhì)量退化最直接的表現(xiàn)。在逆境條件下，作物會(huì)持續(xù)產(chǎn)生高濃度的乙烯，對(duì)自身的生長(zhǎng)造成阻礙。為了減緩這一阻礙效果，需要降低作物體內(nèi)逆境乙烯的產(chǎn)生量。乙烯生物合成途徑中的前體物質(zhì)1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid，簡(jiǎn)稱ACC）可在ACC脫氨酶（ACC deaminase，簡(jiǎn)稱ACCD）的作用下被分解為α-丁酮酸（α-KA）和氨[5]。而直接產(chǎn)生ACCD的植物細(xì)胞還未見(jiàn)報(bào)道[6]。植物根際促生細(xì)菌（plant growth-promoting rhizobacteria，簡(jiǎn)稱PGPR）是一類游離在土壤或共生于植物根系的可促進(jìn)植物生長(zhǎng)及其對(duì)礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的吸收和利用，同時(shí)能抑制有害生物的有益菌群[7]。許多PGPR可誘導(dǎo)產(chǎn)生ACCD，因此，具有ACCD活性的PGPR菌株在促進(jìn)植株養(yǎng)分吸收[8]、增加生物量[9]、促進(jìn)豆科植物結(jié)瘤[10]，以及保護(hù)植物免受鹽堿[11]、干旱、真菌及細(xì)菌等致病菌[12]對(duì)生長(zhǎng)產(chǎn)生的抑制作用方面具有較好的應(yīng)用前景。

目前，關(guān)于ACCD活性的PGPR菌株研究主要集中在對(duì)自然土壤改良和增加肥效方面[13]，對(duì)人工干預(yù)土地中的原生PGPR鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)延安新造耕地、淤地壩等人工干預(yù)土地中PGPR菌株篩選、酶活性和促生效果的初步研究，以期尋找具有潛在促生作用的菌株，為延安人造土地提供原生菌種資源，為植物-微生物聯(lián)合改良土壤研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品來(lái)源：樣品采自陜西省延安市安塞縣南溝村新造耕地表層下15～20 cm的土壤樣本。采用“S”形采樣法，每個(gè)采樣地采集20個(gè)點(diǎn)，混合土樣采用四分法處理保留約500 g，4 ℃冰盒保存運(yùn)輸。

1.2 培養(yǎng)基

PAF培養(yǎng)基（富集培養(yǎng)基）：10 g/L蛋白胨，10 g/L酪蛋白水解物，1.5 g/L MgSO4，1.5 g/L K2HPO4，10 mL甘油，pH值7.2。

DF培養(yǎng)基（篩選培養(yǎng)基）：組分（1），含10 mg H3BO3，112 mg MnSO4·H2O，124.6 mg ZnSO4·7H2O，78.2 mg CuSO4·5H2O，10 mg MnO3，將以上成分溶解于100 mL無(wú)菌水中，4 ℃保存；組分（2），含100 mg FeSO4·7H2O，將其溶于10 mL無(wú)菌水中，4 ℃保存。各取0.1 mL組分（1）與組分（2）溶液，再加入4.0 g/L KH2PO4、6.0 g/L Na2HPO4、0.2 g/L MgSO4·7H2O、2.0 g/L葡萄糖、2.0 g/L葡萄糖酸鈉、2.0 g/L檸檬酸、2.0 g/L （NH4）2SO4。分離純化培養(yǎng)基：在DF培養(yǎng)基中添加20g瓊脂。endprint

ADF培養(yǎng)基（加富培養(yǎng)基）：將ACC溶于超純水，過(guò)濾滅菌，加入到不含（NH4）2SO4的滅菌DF培養(yǎng)基中，終濃度為30 mmol/L。

TSB培養(yǎng)基（保存培養(yǎng)基）：17 g/L胰蛋白胨，3 g/L大豆胨，5 g/L NaCl，2.5 g/L葡萄糖，2.5 g/L K2HPO4，pH值7.1。

1.3 主要試劑與儀器

ACC，購(gòu)自Sigma公司；Taq酶及細(xì)菌DNA提取試劑盒，購(gòu)自TaKaRa公司。Centrifuge 5804R高速冷凍離心機(jī)，購(gòu)自Eppendorf公司；梯度PCR儀，購(gòu)自Biometra公司；Synergy H1多功能酶標(biāo)儀，購(gòu)自BioTek公司；Gen Ⅲ Microstation自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，購(gòu)自Biolog公司。

1.4 新造土壤中ACCD細(xì)菌的富集和分離

采用Penrose等的方法[14]并有所改進(jìn)。稱取延安新造耕地土壤樣品各5 g，分別加入50 mL無(wú)菌水中，振蕩制成土壤懸浮液，吸取1 mL懸浮液加入50 mL PAF培養(yǎng)液中，28 ℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)。24 h后，從其中吸取1 mL菌懸液重復(fù)轉(zhuǎn)接1次。從第2次菌懸液中轉(zhuǎn)移1 mL至50 mL DF培養(yǎng)液中，在相同條件下培養(yǎng)24 h后，從中吸取1 mL菌懸液加入 50 mL ADF培養(yǎng)液中，在相同條件下培養(yǎng)24 h，用于具有ACC脫氨酶活性細(xì)菌的篩選。梯度稀釋ADF培養(yǎng)液中的菌懸液，并涂布于ADF固體平板上，在28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，待長(zhǎng)出單菌落后，挑取單菌落純化后保存于TSB斜面培養(yǎng)基上。

1.5 ACCD促生活性菌的篩選與鑒定

1.5.1 菌株產(chǎn)ACCD活性測(cè)定 采用Penrose等的方法[14]并有所改進(jìn)。（1）將-80 ℃凍存管中保存的菌種接入5 mL TSB液體培養(yǎng)基，擴(kuò)大培養(yǎng)24 h后，4 ℃、9 000 r/min離心 10 min，棄上清，收集菌體。用不含（NH4）2SO4的DF液體培養(yǎng)基離心洗滌菌體2次，重懸于7.5 mL ADF培養(yǎng)基中，28 ℃培養(yǎng)24 h以誘導(dǎo)其產(chǎn)ACCD，4 ℃、9 000 r/min離心10 min，棄上清，收集菌體并記錄菌體質(zhì)量。（2）將菌體重懸于 600 mL 0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液（pH值8.5）中，加入 30 μL 甲苯，迅速振蕩30 s，破碎細(xì)胞，4 ℃貯存，即為粗酶液。（3）取 200 μL 粗酶液放入1.5mL離心管中，加入20 μL 0.5 mol/L ACC混勻，于30 ℃水浴60min。隨即加入1 mL 056 mol/L HCl終止反應(yīng)，12 000 r/min離心5 min，取上清液。（4）每毫升上清液加入800 μL 0.56 mol/L HCl和 300 μL 0.2% 2，4-二硝基苯肼溶液（在2 mol/L HCl中溶解），30 ℃保溫 30 min。加入2 mL 2 mol/L NaOH混勻，540 nm 處測(cè)定吸光度。（5）繪制α-丁酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制10 mmol/L的α-丁酮酸，分別取0、10、20、40、60、80、100、120 μL 母液稀釋液加入試管中，用0.1 mol/L Tris-HCl（pH值8.5）補(bǔ)足至1 mL，α-丁酮酸濃度范圍為0.024～0.293 μmol/mL。按步驟（4）操作。ACC脫氨酶活性以反應(yīng)體系中1 mg酶蛋白1 h內(nèi)生成α-丁酮酸的物質(zhì)的量表示，單位為μmol/（mg·h）。

1.5.2 新造土壤細(xì)菌多項(xiàng)分類鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析 （1）生理生化鑒定：參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》（8版）[15]。（2）16S rRNA序列擴(kuò)增和序列分析：菌株在LB培養(yǎng)基中于28 ℃振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，離心收集菌體，用TaKaRa試劑盒提取DNA。根據(jù)原核生物16S rRNA保守序列通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1492R（5′-GGTTACC TTGTTACGACTT-3′）[16]進(jìn)行16S rRNA的PCR擴(kuò)增，采用50 μL反應(yīng)體系，擴(kuò)增程序：95 ℃ 4 min，94 ℃ 30 s，53 ℃ 35 s，72 ℃ 1.5 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物由生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序。將測(cè)定的序列在GenBank中用BLAST在線軟件與已知的16S rRNA序列進(jìn)行同源性分析，利用DNASTAR（SeqMan）拼接序列，并手工適當(dāng)校正。采用ClustX 2.1軟件進(jìn)行多序列比對(duì)。用Mega 7.0軟件包中的Kimura 2-Parameter Distance模型進(jìn)行多序列匹配排列，用鄰接法（Neighbor-Joining Method）構(gòu)建16S rRNA 基因系統(tǒng)發(fā)育樹。（3）Biolog自動(dòng)微生物鑒定：選擇IF-A培養(yǎng)液，利用Biolog GEN Ⅲ細(xì)菌鑒定板對(duì)微生物進(jìn)行94種表型測(cè)試，微生物在測(cè)試板上所顯示出的表型指紋被用來(lái)在種的水平上鑒定該微生物。

1.6 菌株產(chǎn)ACCD的培養(yǎng)條件研究

（1）溫度對(duì)酶活性的影響：制得的粗酶液分別在溫度為15～45 ℃條件下加入底物反應(yīng)30 min，測(cè)定酶活性；（2）pH值對(duì)酶活性的影響：設(shè)置pH值范圍為4.0～10.0的處理，分別用不同pH值的緩沖液配制底物和酶液，測(cè)定酶活性。

1.7 菌株促生作用研究

用飽和NaCl溶液選種，挑出飽滿完整的麥種，用10%H2O2表面消毒5 min，蒸餾水漂洗4～5次晾干備用。以無(wú)菌水作為對(duì)照，分別用促生菌株菌體重懸液、發(fā)酵液、離心后的上清浸麥種24h，將不同處理的麥種置于裝有濕潤(rùn)濾紙的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，放入28 ℃光照培養(yǎng)箱內(nèi)，定期觀察種子萌發(fā)情況，5 d后測(cè)量麥種的根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)，用以表征促生作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 ACC脫氨酶活性菌株篩選endprint

采樣地地理信息：36°35′N，109°17′E，海拔1 212 m；采樣點(diǎn)YA-1種植玉米，為1年新造耕地混合土樣；采樣點(diǎn)YA-2種植白菜，為平整1月新造耕地混合土樣；采樣點(diǎn)YA-3為淤地壩混合土樣，種植櫻桃。

利用ADF篩選培養(yǎng)基從3份混合土樣中共分離到43株菌株，根據(jù)菌落顏色、形態(tài)、大小、長(zhǎng)勢(shì)等特征初步去重得到18株菌株。根據(jù)Penrose等以ACC脫氨酶酶活性不低于 20 nmol/（mg·h） 作為篩選指標(biāo)，得到6株ACCD活性較高的菌株[14]。

6株菌在ADF培養(yǎng)基經(jīng)5次傳代后仍正常生長(zhǎng)，表明它們有產(chǎn)ACCD的能力。從表1可以看出，6株菌的酶活性差異較大，其中YAnl_w2、YAnl_ty7、YAnl_011 ACCD活性分別為（0291±0.010）、（0.185±0.021）、（0.136±0.015） μmol/（mg·h），其中YAnl_w2酶活性最高。

2.2 菌株16S rRNA 基因序列的測(cè)定、Biolog細(xì)菌鑒定以及系統(tǒng)發(fā)育分析

從延安安塞南溝村新造耕地初步分離后經(jīng)初步篩選，得到6株具有產(chǎn)ACCD活性的細(xì)菌，經(jīng)DNA提取和16SrRNA基因序列擴(kuò)增、測(cè)序，由圖2可以看出，6株菌主要分為假單胞菌屬（Pseudomonas）、腸桿菌屬（Enterobacter）、伯克氏菌屬（Burkholderia）。結(jié)果表明，南溝村新造耕地具ACCD活性細(xì)菌多樣性并不豐富，本試驗(yàn)中只篩選到3屬共6株產(chǎn)ACCD細(xì)菌。研究表明，假單胞菌屬作為土壤常駐細(xì)菌在生物防治[17]、促生作用[18]方面有巨大潛力。而腸桿菌屬是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有ACCD活性的促生菌[19]，同時(shí)可產(chǎn)生吲哚乙酸（IAA）、鐵載體等物質(zhì)[20]。此外，發(fā)現(xiàn)分泌ACCD的伯克氏菌屬[21]對(duì)番茄[22]、小麥[23]、茶葉[24]等農(nóng)作物均有促生作用。

經(jīng)MEGA 7構(gòu)建Neighbor-Joining系統(tǒng)進(jìn)化樹分析（圖2）以及在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)、StrainInfo數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行有效種16S rRNA基因序列相似性檢索后發(fā)現(xiàn)，在假單胞菌屬中，YAnl_w1 與Pseudomonas moraviensis strain CCM 7280 （AY970952.1）的相似性為98%，YAnl_011與斯氏假單胞菌（Pseudomonas stutzeri）strain VKM B-975 （EU883663.1）的相似性為99%，YAnl_ty7與假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）C36 strain （AJ575816.1）的相似性為99%，但與棲稻假單胞菌（Pseudomonas oryzihabitans）strain IAM 1568T （AM262973.1）的進(jìn)化距離較遠(yuǎn)，還需要進(jìn)一步確定其進(jìn)化關(guān)系。腸桿菌屬中，YAnl_w2與路德維希腸桿菌（Enterobacter ludwigii）strain EN-119T （AJ853891.1）的序列相似性為99%，表明YAnl_w2屬于腸桿菌屬（Enterobacter）。伯克氏菌屬YAnl_t2與Burkholderia gladioli pv. gladioli strain CFBP 2427 （GU936677.1）的相似性為98%，YAnl_ty5與Burkholderia caribiensis strain MWAP64 （Y17009.1）的序列相似性為100%，表明YAnl_t2和YAnl_ty5屬于伯克霍爾德菌（Burkholderia）。

YAnl_w2對(duì)蔗糖、水蘇糖、α-D-乳糖等多種寡糖，對(duì)D-山梨醇、D-甘露醇、肌醇等醇類，對(duì)D-絲氨酸、L-絲氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸等氨基酸，以及對(duì)乳酸、檸檬酸、乙酸、L-蘋果酸等短鏈酸呈陽(yáng)性反應(yīng)，其中能利用檸檬酸、乙酸為腸桿菌屬（Enterobacter）典型反應(yīng)[15]；Enterobacter屬利用明膠速度慢[15]，亦表現(xiàn)為陰性反應(yīng)。綜上可知，YAnl_w2表現(xiàn)為典型的Enterobacter屬特征。最終確定細(xì)菌的分類地位，仍需要通過(guò)各自形態(tài)特征、生理生化與化學(xué)分類特征及近緣菌株 DNA-DNA同源性結(jié)果來(lái)判斷。

2.3 YAnl_w2性質(zhì)及促生作用

2.3.1 YAnl_w2產(chǎn)酶條件初步研究 研究表明，腸桿菌屬是一類產(chǎn)ACCD且具有促生潛力的細(xì)菌[25]，同時(shí)具有耐鹽[26]、耐重金屬[27]等優(yōu)良特性，研究YAnl_w2菌株生長(zhǎng)條件，對(duì)研究其酶學(xué)性質(zhì)、優(yōu)化產(chǎn)酶條件有重要意義。根據(jù)“2.1”節(jié)的試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)酶活性最高、具有應(yīng)用潛力的YAnl_w2菌產(chǎn)酶條件進(jìn)行初步研究。

由圖3-a可以看出，YAnl_w2細(xì)菌ACCD和底物反應(yīng)時(shí)，溫度和pH值的變化對(duì)ACCD活性影響較大。在溫度較低（15 ℃）時(shí)，幾乎沒(méi)有酶活性，而隨著溫度的上升，酶活性逐漸升高，在30 ℃時(shí)，YAnl_w2酶活性最高，而隨著溫度繼續(xù)上升，酶活性呈下降趨勢(shì)，但37 ℃時(shí)ACCD活性仍約為最高酶活性的40%。

由圖3-b可以看出，在30 ℃體系中，YAnl_w2的ACCD最適pH值為7.0[酶活性為0.54 μmol/（mg·h）]，pH值從4.0開(kāi)始酶活性逐漸升高，pH值達(dá)到7.0后酶活性隨著pH值的升高而逐漸下降。pH值在6.0～7.0之間時(shí)，YAnl_w2擁有較高的酶活性，表明YAnl_w2分泌的ACCD可能是一類中性酶。

2.3.2 YAnl_w2的促生作用 由圖4可見(jiàn)，與無(wú)菌水浸種對(duì)比，YAnl_w2的各組分均有促生長(zhǎng)作用，其中發(fā)酵液對(duì)麥種促生作用與CK相比，對(duì)麥種根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)的促生作用顯著，其次為菌體重懸液。菌體重懸液促生效果明顯優(yōu)于發(fā)酵液上清，說(shuō)明細(xì)菌YAnl_w2通過(guò)附著在根系表面，可能在ACCD作用下吸收植物生成的ACC，從而達(dá)到促生效果；同時(shí)YAnl_w2可能還擁有其他促生因子。有報(bào)道指出，除產(chǎn)生ACCD外，腸桿菌可能還具有清除活性氧自由基等快速調(diào)節(jié)機(jī)制，從而對(duì)植株產(chǎn)生抗逆和促生的作用[28]，因此發(fā)酵液上清亦有促生效果，它對(duì)YAnl_w2的促生作用之后將進(jìn)一步研究。endprint

3 結(jié)論

目前，人們對(duì)產(chǎn)ACCD的PGPR菌株已進(jìn)行了大量報(bào)道。該菌株作為土壤改良劑、微生物活菌制劑等對(duì)土壤的改良正在成為土壤改良的研究熱點(diǎn)[29-30]。具有ACCD活性的PGPR作用于其根際區(qū)域的生態(tài)位，利用與宿主植物的共生作用對(duì)環(huán)境脅迫條件作出響應(yīng)[28，31]，同時(shí)通過(guò)風(fēng)力、雨水等作用在地表和地下以游離形式運(yùn)動(dòng)，從而降低地區(qū)植株根際乙烯水平，減輕逆境脅迫環(huán)境對(duì)作物的不利影響[32]。

本研究以ACC為唯一氮源，采用富集定向篩選方法，從陜西延安新造耕地土壤中分離到6株具有ACC脫氨酶活性的植物促生菌，并測(cè)定了ACC脫氨酶活性，分析了16S rDNA 序列及其進(jìn)化地位。本研究發(fā)現(xiàn)1株酶活最高、具有潛在應(yīng)用價(jià)值的細(xì)菌YAnl_w2，研究發(fā)現(xiàn)該菌株可能產(chǎn)中溫中性ACCD，酶活性最高可達(dá)0.54 μmol/（mg·h）；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，YAnl_w2及其分泌的物質(zhì)均對(duì)麥種產(chǎn)生促生效果，提示除ACCD外可能還有其他促生機(jī)制。YAnl_w2分離自延安地區(qū)新造耕地土壤，相較于其他來(lái)源的微生物制劑，對(duì)當(dāng)?shù)丨h(huán)境具有更好的適應(yīng)性。今后，有待深入關(guān)于該菌株的促生作用以及相關(guān)微生物肥料的研究。

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