高效液相色譜—紫外檢測(cè)法測(cè)定糕點(diǎn)中納他霉素的含量

朱聿元　李紅梅　周露

摘要：建立了高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定糕點(diǎn)中納他霉素含量的實(shí)驗(yàn)方法。色譜柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器測(cè)定了糕點(diǎn)中納他霉素的含量。納他霉素的線性范圍分別為5～100 μg/mL，檢出限為0.5 μg/mL，加標(biāo)回收率為97.2%～100.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.98%。結(jié)果表明：該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于糕點(diǎn)中納他霉素的定量分析。

關(guān)鍵詞：納他霉素；糕點(diǎn)；高效液相色譜；紫外檢測(cè)器

中圖分類號(hào)：TS207.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：16749944（2017）20019602

1引言

納他霉素[1，2]分子式為C33H47NO13，分子量為665.73。微溶于水、甲醇，溶于稀酸、冰醋酸及二甲苯甲酰胺，難溶于大部分有機(jī)溶劑，納他霉素是很好的真菌抑制劑，既能抑制真菌，又能抑制真菌毒素的產(chǎn)生。納他霉素安全性能好，因?yàn)槠潆y以被人體消化道吸收，微生物不容易產(chǎn)生抗體，通常噴霧方式用于食品表面的防霉變防腐。1997年我國(guó)衛(wèi)生部正式批準(zhǔn)納他霉素作為食品防腐劑。在GB 2760-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定糕點(diǎn)中納他霉素的限量值為0.5 g/kg。目前，納他霉素在文獻(xiàn)中報(bào)道的分析方法有導(dǎo)數(shù)光譜法[3]、紫外分光光度法[4，5]、生物檢測(cè)法[6]、液相色譜法[7～13]、液質(zhì)聯(lián)用法[14～16]等。筆者應(yīng)用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器檢測(cè)方法對(duì)糕點(diǎn)中納他霉素含量的測(cè)定進(jìn)行了研究。

2材料與方法

2.1材料和儀器

實(shí)驗(yàn)材料：納他霉素（Dr.Ehrenstorfer）、糕點(diǎn)（市場(chǎng)購(gòu)買）；甲醇（色譜純），aladdin公司。

實(shí)驗(yàn)儀器：E2695/2489液相色譜-紫外檢測(cè)器，Waters公司；超純水機(jī)，美國(guó)MILLIPORE公司；BSA224S電子天平，瑞士萬通公司。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1色譜條件選擇

色譜柱： Waters C8柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）， Waters C18柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40；紫外檢測(cè)器：305 nm；進(jìn)樣量10 μL；流速1.0 mL/min。

選擇流動(dòng)相，甲醇+乙酸水溶液（10%）選擇了20∶40；40∶60；60∶40三種比例，慢慢增加甲醇的比例，發(fā)現(xiàn)在甲醇+乙酸水溶液（10%）=60∶40時(shí)候，標(biāo)準(zhǔn)品達(dá)到很好的基線分離。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品1 mg，用甲醇溶解后定容至10 mL 容量瓶中，搖勻，該溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確移取上述溶液0.5、1、2.5、5、10 mL 分別置于10 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾，取濾液備用，配成5、10、25、50、100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.3樣品溶液配制

準(zhǔn)確稱取5 g左右制備樣，加入甲醇30 mL超聲30 min，加水10 mL，通過離心機(jī)4000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜后供液相色譜測(cè)定用。

3結(jié)果與討論

3.1線性關(guān)系的考察

精密吸取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程為：y=1.33E+005x-1.24E+005，R2=0.999002。結(jié)果表明納他霉素在5～100 μg/mL之間線性關(guān)系良好。信噪比等于3為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算納他霉素的檢出限為0.5 μg/mL。見圖1。

3.2精密度試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μL重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測(cè)定峰面積的平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果顯示相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.76%，本檢測(cè)方法具有良好的準(zhǔn)確度。

3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一糕點(diǎn)樣品，按照供試樣品溶液制備方法重復(fù)測(cè)定6次，記錄色譜圖，測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.61%。

3.4回收率實(shí)驗(yàn)

在上述優(yōu)化好的條件下，分別在糕點(diǎn)樣品中添加納他霉素標(biāo)樣，進(jìn)行加標(biāo)回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。由表3中可知回收率在97.2%～100.3%之間，表明高效液相色譜-紫外檢測(cè)法檢測(cè)糕點(diǎn)中納他霉素含量具有良好的準(zhǔn)確性。

3.5樣品測(cè)定

取6批糕點(diǎn)按2.2.3方法制備樣品溶液，樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別注入高效液相色譜儀，外標(biāo)法定量，見表4，樣品中納他霉素平均含量為0.547 μg/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.31%。納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品及樣品色譜圖見圖2，圖3，納他霉素的出峰時(shí)間5.3 min左右，結(jié)果令人滿意。

4結(jié)論

本文采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法來測(cè)定糕點(diǎn)中納他霉素含量，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，色譜柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40為流動(dòng)相分離效果好，本試驗(yàn)方法適用于糕點(diǎn)中納他霉素的含量測(cè)定。

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Separation and Identification of Pimaricin in Cakes by High Performance Liquid Chromatography- Ultraviolet Absorption Detector

Zhu Yuyuan， Li Hongmei， Zhou Lu

（Baoying Organic Food Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying， Jiangsu， 225800， China）

Abstract： This paper established ahigh performance liquid chromatography method for separation and determination of Pimaricin in cakes. The analytical column was Waters C18 （ 250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-acetic acid solution （10%） =（60：40， V/V）. The samples were determined by an ultraviolet absorption detector. The calibration curves had good linearity in the range of 5～100μg/mL for Pimaricin； the detection limit for Pimaricin was0.5 μg/Ml； the average recoveries of Pimaricin were 97.2%～100.3% and RSD is 0.98%（n=6）. The method was a convenient， rapid and effective method for qualitatively analysis of Pimaricin in cakes.

Key words： Pimaricin； cakes； HPLC； ultraviolet absorption detectorendprint