玉露組培誘導(dǎo)不同部位外植體及不同培養(yǎng)基配方篩選初報

郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 201201）

玉露組培誘導(dǎo)不同部位外植體及不同培養(yǎng)基配方篩選初報

郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 201201）

為建立玉露無性繁殖系，滿足其市場需求，進(jìn)行了玉露組培誘導(dǎo)不同部位外植體及不同培養(yǎng)基配方篩選試驗。結(jié)果表明，玉露幼嫩花莖的出菌率顯著低于葉片，誘導(dǎo)成功率也明顯高于葉片，建議采用玉露幼嫩花莖為外植體，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

玉露；葉片；幼嫩花莖；培養(yǎng)基配方；誘導(dǎo)

玉露（Haworthia cooperivar.pilferaM.B. Bayer）為百合科十二卷屬多肉植物中的軟葉系品種，是名貴的室內(nèi)觀賞花卉，具有良好的市場前景。目前，玉露大多采用分株繁殖和種子繁殖，但存在繁殖系數(shù)低、擴(kuò)繁速度慢等問題，而利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)[1]，建立玉露組織培養(yǎng)與快速擴(kuò)繁體系，對滿足其市場需求具有重要的現(xiàn)實意義。筆者以玉露花莖和葉片等外植體為試驗材料，進(jìn)行了玉露組培誘導(dǎo)不同部位外植體及不同培養(yǎng)基配方篩選試驗，以期建立其無性繁殖系，現(xiàn)將相關(guān)試驗結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

玉露的葉片和幼嫩花莖。

1.2 試驗方法

將選取的試驗材料用流水沖洗2 h，在無菌操作臺上用75%酒精浸泡15 s、無菌水清洗3遍，再用 0.1%升汞浸泡振蕩10 min、無菌水沖洗4次，將消毒后的材料用無菌濾紙吸干水后置于盤中待用。在無菌操作臺上，將消毒好的外植體切割分離，其中幼嫩花莖剪切成1 cm左右的小段、葉片切成1 cm×1 cm左右的小塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接入1個外植體，每個培養(yǎng)基重復(fù)10次，放入無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為（20±2） ℃，光照強(qiáng)度為2 000 Lx，光照時間12 h/d。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方分別為：（1）MS（CK）；（2）MS+BA 1.0 mg/L；（3）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（4）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；（5）MS+BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（6）MS+BA 2.0 mg/L；（7）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（8）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L ；（9）MS+BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（10）MS+BA 5.0 mg/L；（11）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；（12）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；（13）MS+BA 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；（14）MS+NAA 0.1 mg/L；（15）MS+NAA 0.5 mg/L；（16）MS+NAA 1.0 mg/L。培養(yǎng)基中均加入3%蔗糖和0.7%瓊脂，調(diào)節(jié)pH 5.6～5.8。

1.3 觀察項目

誘導(dǎo)期間，觀察各處理外植體出菌情況。材料接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基15 d后，每隔7 d切割轉(zhuǎn)接1次，轉(zhuǎn)接3次后觀察外植體誘導(dǎo)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體出菌情況

2種外植體、16個培養(yǎng)基配方、每個配方重復(fù)10次，每個外植體處理160瓶，經(jīng)過30 d的誘導(dǎo)培養(yǎng)后，接種葉片的有87瓶出菌，出菌率高達(dá)54.38%；接種幼嫩花莖的有21瓶出菌，出菌率僅為13.13%。

2.2 外植體誘導(dǎo)分化情況

由表1可知，以玉露葉片為試驗材料，僅有培養(yǎng)基配方（7）、（8）中零星出現(xiàn)葉片外植體膨大、形成少量愈傷組織且顏色不深的現(xiàn)象；培養(yǎng)基配方（1）、（2）、（3）、（4）、（5）、（6）、（10）中的葉片外植體均未出現(xiàn)膨大，絕大部分外植體均慢慢玻璃化，失去活性；培養(yǎng)基配方（9）、（11）、（12）、（13）、（14）、（15）和（16）中的葉片外植體盡管出現(xiàn)了不同程度的膨大，但均未出現(xiàn)愈傷組織。以玉露幼嫩花莖為試驗材料，培養(yǎng)基配方（7）中的花莖經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，逐漸膨大，形成大量蓬松且顏色較深的愈傷組織，表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)幕钚?；培養(yǎng)基配方（3）、（4）、（8）出現(xiàn)花莖外植體膨大、形成少量愈傷組織且顏色不深的現(xiàn)象；其他培養(yǎng)基配方中的花莖外植體誘導(dǎo)均未獲得成功。

表1 不同培養(yǎng)基配方對玉露外植體誘導(dǎo)分化情況比較

綜上，以玉露葉片和幼嫩花莖為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，均以培養(yǎng)基配方（7），MS+BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L的誘導(dǎo)效果為最好。

3 結(jié)論與討論

試驗結(jié)果表明，采用玉露不同部位為外植體，對外植體出菌率的影響較大，由于葉片生長時間較長，距離土壤較近，用相同消毒方法處理后，其出菌率是幼嫩花莖的4.14倍。用玉露不同部位為外植體，對外植體誘導(dǎo)的成功率影響較大，幼嫩花莖由于生長時間較短，組織活力較強(qiáng)，在多種配方的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中均形成了愈傷組織；而葉片組織活力較弱，僅在配方（7）、（8）中出現(xiàn)了少量愈傷組織，且顏色不深。不同激素水平配比對玉露外植體誘導(dǎo)結(jié)果影響較大，在誘導(dǎo)發(fā)生過程中，在BA濃度為2.0 mg/L、NAA濃度為0.1 mg/L時，能誘導(dǎo)出大量蓬松且顏色較深的愈傷組織，誘導(dǎo)效果最佳；過高濃度的NAA（1.0 mg/L）和BA（5.0 mg/L）對玉露外植體的誘導(dǎo)反而起抑制作用，僅產(chǎn)生少量愈傷組織且顏色不深，誘導(dǎo)效果一般；未添加BA的培養(yǎng)基誘導(dǎo)不出愈傷組織。綜上，建議采用玉露幼嫩花莖為外植體，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L。

[1]譚文澄,戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京:中國林業(yè)出版社,1991.

2016-12-15