酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本的處理

王德軒

【摘要】目的：探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本的處理。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法和膠體金層析法進(jìn)行HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本檢查。結(jié)果：本次研究對(duì)66份弱陽(yáng)性標(biāo)本用膠體金法進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)49份標(biāo)本呈現(xiàn)陽(yáng)性。再采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行復(fù)查后，有53份標(biāo)本呈現(xiàn)陽(yáng)性，弱陽(yáng)性標(biāo)本2份，11份假陽(yáng)性標(biāo)本。結(jié)論：醫(yī)院在對(duì)HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本檢驗(yàn)的環(huán)節(jié)中，可以先采用膠體金層析法進(jìn)行檢查，然后再對(duì)陰性患者采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行復(fù)查，可以提升檢查的精確性。

【關(guān)鍵詞】HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定；乙肝病毒；膠體金層析法

乙型肝炎病毒表面抗原是一類常見(jiàn)的臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目，一般采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的方式對(duì)HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，這種方法的成本比較低，而且效率高，檢測(cè)方式簡(jiǎn)單，靈敏度可以得到保障，但是在檢測(cè)中會(huì)有外界因素的干擾。在實(shí)際的檢測(cè)中會(huì)出現(xiàn)弱陽(yáng)性標(biāo)本，在復(fù)查后與第一次檢查的結(jié)果存在出入。為了進(jìn)一步探討標(biāo)本的情況，本次研究進(jìn)行了一系列的研究。

1資料與方法

1.1一般資料

標(biāo)本來(lái)源為本院2016年10月至2017年3月，門(mén)診及住院檢測(cè)乙肝表面抗原的患者。HBsAg試劑盒采用山東3V生物工程集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，在復(fù)查中采用的試劑盒是上海晶抗生物工程有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。膠體金層析法試紙用的是北京藍(lán)十字生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。

1.2方法

相關(guān)的操作方法完全按照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容進(jìn)行，在采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的環(huán)節(jié)中，每次都采用質(zhì)控血清進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，在檢查完成后，如果患者的檢查結(jié)果為弱陽(yáng)性，那么患者的OD值一般在0.1-0.4之間，可以采用膠體金層析法進(jìn)行復(fù)查，然后患者于第二天采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行檢查。

2結(jié)果

本次研究中，有66份采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)的弱陽(yáng)性的標(biāo)本，然后采用膠體金層析法進(jìn)行復(fù)查，總共有49份標(biāo)本呈現(xiàn)出陽(yáng)性。66份標(biāo)本于第二天采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的方法進(jìn)行檢查，有53份標(biāo)本是陽(yáng)性，2份呈現(xiàn)弱陽(yáng)性，11份標(biāo)本呈現(xiàn)陰性。1份弱陽(yáng)性的標(biāo)本采用膠體金層析法檢測(cè)中呈現(xiàn)陽(yáng)性，將原有的標(biāo)本的陰性血清進(jìn)行稀釋，將其濃度稀釋到原來(lái)的10%，然后采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定雙孔測(cè)定的方式呈現(xiàn)陽(yáng)性。另1份呈弱陽(yáng)性的標(biāo)本在采用膠體金層析法檢測(cè)后，沒(méi)有出現(xiàn)任何的反應(yīng)。由于膠體金層析法的靈敏度只有2ng/ml，但是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的靈敏度卻高達(dá)0.5ng/ml，所以導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在誤差的主要原因在于膠體金層析法的靈敏度比較低。

在對(duì)11份采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定呈現(xiàn)假陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查后，發(fā)現(xiàn)采用相同的試劑，有5份標(biāo)本的血清不能充分的凝固，這5例標(biāo)本都是在冬季檢測(cè)。在醫(yī)院的部分實(shí)驗(yàn)室，由于室內(nèi)溫度不能控制的特別好，在對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行改善后，效果也更加的精確?；颊咴诙静裳话憧斓街形绮拍懿杉暄?，而且檢驗(yàn)結(jié)果要在當(dāng)天內(nèi)出，所以這種快速的檢測(cè)方法，導(dǎo)致血液在凝固的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性特征。盡管很多標(biāo)本已經(jīng)通過(guò)肉眼觀察到凝固，但是還是存在凝固不充分的情況，很多纖維蛋白還是與聚乙烯板孔結(jié)合，導(dǎo)致不能徹底的清洗，導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)。3份標(biāo)本出現(xiàn)了溶血的現(xiàn)象，在對(duì)標(biāo)本進(jìn)行充分檢測(cè)后，沒(méi)有出現(xiàn)假陽(yáng)性。2份標(biāo)本出現(xiàn)了污染的情況，這2份標(biāo)本的前一孔都是陽(yáng)性標(biāo)本。1份標(biāo)本結(jié)果無(wú)法解釋，需要進(jìn)行進(jìn)一步的觀察和論證。

3討論

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用非常廣泛，這種方法將抗原和抗體吸附在同一個(gè)載體上，采用酶標(biāo)記的方式，對(duì)抗原的反應(yīng)進(jìn)行分析，然后再采用洗滌的方式將游離的部分清除。常見(jiàn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要有雙抗體夾心法和間接法。前者在大分子抗原的檢測(cè)中廣泛應(yīng)用，后者在進(jìn)行特異抗體檢測(cè)中廣泛應(yīng)用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)首次是在1971年開(kāi)始使用，其速度非?？欤颐舾行愿?，操作簡(jiǎn)單，已經(jīng)制定了各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，使這項(xiàng)技術(shù)近年來(lái)快速發(fā)展，并且得到了非常廣泛的應(yīng)用。在早期這種方法的特異性并不是特別高，導(dǎo)致了實(shí)際應(yīng)用效果不是特別好。但是，如今，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在不斷的改進(jìn)，材料也在不斷的完善，特別是基因工程應(yīng)用在其中，對(duì)單克隆抗體進(jìn)行阻斷的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可以提升實(shí)驗(yàn)的特異性，而且如今在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)充分借助計(jì)算機(jī)技術(shù)，使酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)更加的簡(jiǎn)便和實(shí)用，成為最廣泛的檢測(cè)方法。

如今，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在不同的細(xì)菌和病毒診斷中都得到廣泛的使用，在動(dòng)物免疫的環(huán)節(jié)中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可以輔助診斷牛結(jié)核病、藍(lán)舌病等。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的基本原理是將酶分子和抗體分子結(jié)合，這種結(jié)合的方式不會(huì)將抗體的免疫學(xué)特征改變，而且也不會(huì)對(duì)生物學(xué)的活性產(chǎn)生任何的影響。采用酶標(biāo)記抗體的方式，可以與相同載體上的抗原發(fā)生特異性的結(jié)合。然后將底物溶液滴加后，可以在酶的作用下形成還原反應(yīng)，呈現(xiàn)出顏色的變化。所以，通過(guò)顏色的變化，醫(yī)護(hù)人員可以分析患者是否產(chǎn)生了免疫反應(yīng)，顏色變化的深淺與標(biāo)本中的抗體或抗原含量呈正比。這種顏色的變化反應(yīng)借助酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行，可以提升酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的特征非常的明顯，其活性非常突出，而且敏感性高。在室溫下反應(yīng)非常的穩(wěn)定，而且反應(yīng)產(chǎn)物很容易呈現(xiàn)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中容易受到外界因素的影響，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性或者假陰性，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不精確。實(shí)驗(yàn)室人員的文化素質(zhì)、思想素質(zhì)和心理素質(zhì)等都會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)該具備良好的心理素質(zhì)，提升自身的道德水平。在工作中如果存在標(biāo)本混淆的情況，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重后果的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)室工作人員還應(yīng)該完善自身的技術(shù)能力，掌握專業(yè)的基本原理，認(rèn)真學(xué)習(xí)新的知識(shí)，努力提升自己的業(yè)務(wù)水平。在繁忙的工作中，提升自己的心理素質(zhì)，做到有條不紊，沉著冷靜的處理各類問(wèn)題。

在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)前，操作人員應(yīng)該對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)非常的了解，了解實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度和反應(yīng)溫度等?？茖W(xué)規(guī)范的使用儀器，防止溶液溢出容器外，防止血清的殘留，加樣器的吸頭要清洗干凈，防止污染的產(chǎn)生，加樣的次序應(yīng)該按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。防止各類結(jié)果產(chǎn)生誤差，要重新進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。在手工洗板加入液體中，不要產(chǎn)生太大的沖擊力，洗滌的次數(shù)不能過(guò)多，嚴(yán)格的按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行。

現(xiàn)在，在對(duì)HBsAg進(jìn)行檢測(cè)中，一般都是采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，但是如果標(biāo)本呈現(xiàn)弱陽(yáng)性，就會(huì)導(dǎo)致判斷失誤的情況。而且在采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的過(guò)程中，會(huì)受到很多因素的影響，常常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性問(wèn)題，其S/CO值非常低。在國(guó)外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定中，會(huì)呈現(xiàn)出一段灰色區(qū)域的范圍，會(huì)顯示檢測(cè)結(jié)果的可疑性。但是在國(guó)內(nèi)進(jìn)行HBsAg測(cè)定中，不會(huì)呈現(xiàn)出灰色的區(qū)域，各個(gè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)灰色區(qū)域的理解還存在一定的差異。在報(bào)告的模式上，只是顯示陰性和陽(yáng)性，所以在不同的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)的結(jié)果會(huì)呈現(xiàn)出一定的差異。而且操作的流程也會(huì)存在一定的差異，醫(yī)院在實(shí)際的檢測(cè)工作中，由于條件受到限制，他們?cè)谶M(jìn)行膠體金試紙條法和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定時(shí)，需要對(duì)呈現(xiàn)弱陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行重新的檢測(cè)。本次研究中，有66例標(biāo)本采用了酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定后呈現(xiàn)出弱陽(yáng)性，其中假陽(yáng)性的標(biāo)本有11份，占總份數(shù)的16.7%，有3.0%的標(biāo)本是弱陽(yáng)性。說(shuō)明在初次檢測(cè)的環(huán)節(jié)中，出現(xiàn)了非常高的假陽(yáng)性，也會(huì)有一定的弱陽(yáng)性標(biāo)本，其主要原因在于，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的靈敏度還受到一定的限制，我國(guó)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法進(jìn)行HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)試中所使用的試劑盒具有一定的窗口期，如果試劑盒使用時(shí)超過(guò)了窗口期，就會(huì)導(dǎo)致血液的檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)陰性。在對(duì)病毒感染的檢測(cè)中，需要一定的過(guò)程，而且病毒的復(fù)制速度非?？欤诙ㄐ詫?shí)驗(yàn)中，只能分析患者的血液是陰性還是陽(yáng)性。我國(guó)生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑的檢出要求還不夠精確。相關(guān)的研究表明，我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血人群的HBsAg的檢出率只有0.27%，所以這項(xiàng)指標(biāo)會(huì)比HBV檢測(cè)的水平低，很多感染者還是不能被檢出，存在著潛在傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)。在臨床工作的人群在檢測(cè)中，只能檢測(cè)到一個(gè)灰色區(qū)域。

在進(jìn)行HBsAg檢測(cè)中，影響檢測(cè)精度的因素非常多，標(biāo)本之間也會(huì)出現(xiàn)互相感染的情況，標(biāo)本在收集后會(huì)出現(xiàn)溶血的情況。這時(shí)醫(yī)院應(yīng)該對(duì)弱陽(yáng)性的標(biāo)本采用膠體金層析法檢查，針對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本，可以直接生成報(bào)告。對(duì)陰性標(biāo)本于第二天再采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定進(jìn)行復(fù)查，對(duì)弱陽(yáng)性標(biāo)本繼續(xù)觀察。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭赫.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)肝炎病毒血清標(biāo)志物臨界結(jié)果的報(bào)告分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11（34）：81-82.

[2]夏麗娜.溶血標(biāo)本對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原影響的分析[J].中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21（11）：307-308.

[3]朱德文.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定HBsAg弱陽(yáng)性標(biāo)本的處理[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（21）：2629-2630.