測定比沙可啶腸溶片含量的測量不確定度

王書學(xué)

【摘要】 目的 分析采用超高效液相色譜（UPLC）測定比沙可啶腸溶片含量的測量不確定度。方法 采用外標(biāo)法， 應(yīng)用UPLC測定比沙可啶腸溶片中比沙可啶的含量， 并建立數(shù)學(xué)模型評估其測量不確定度。結(jié)果 UPLC外標(biāo)法測定得到的比沙可啶腸溶片的含量為98.8%， 置信概率為95%， 擴展測量不確定度為2.5%， 測量結(jié)果表示為（98.8±2.5）%， K=2。結(jié)論 含量測定的過程中應(yīng)嚴(yán)格控制儀器的狀態(tài)， 特別是對照品的稱量過程， 另外也應(yīng)該建立測量不確定度的評估， 對于保證實驗的精準(zhǔn)度極其重要。

【關(guān)鍵詞】 比沙可啶；超高效液相色譜；測量不確定度

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.114

比沙可啶腸溶片通過與腸黏膜直接接觸刺激其感覺神經(jīng)末梢增強腸反射性蠕動促進(jìn)排便， 臨床主要用于治療急、慢性便秘和習(xí)慣性便秘， 被收錄于2015版《中國藥典》中[1]?！吨袊幍洹分袑τ诒壬晨舌つc溶片的含量測定是采用紫外-可見光光度法， 吸收波長為264 nm[2]。作者本次通過UPLC來對其含量進(jìn)行測定， 并測定其含量的測量不確定度。UPLC借助于高效液相色譜的理論及原理， 涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)， 增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量[3]。本研究中作者依次建立數(shù)學(xué)模型、分析不確定度來源以及計算不確定度分量、合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴展不確定度的過程， 對UPLC外標(biāo)法測定比沙可啶腸溶片含量的測量不確定度進(jìn)行評定。

1 儀器與試劑

1. 1 儀器 Waters ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相系統(tǒng)， 包括PDA檢測器， 四元高壓泵等；分析天平：梅特勒-托利多公司XS 十萬分之一分析天平；色譜柱：Waters BEH C18；A級50 ml量瓶。

1. 2 試劑 比沙可啶對照品由中國食品藥品檢定研究院購買， 批號為10081-200402， 純度為100.0%；比沙可啶腸溶片由A公司提供， 批號為20160821， 規(guī)格為5 mg；乙腈為美國費歇爾公司色譜純乙腈；乙酸銨和冰乙酸由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司購買；水為實驗室自制超純水。

2 方法

2. 1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 流動相A為乙腈， 流動相B為乙酸銨溶液[20 mmol/L， 用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至（5.0±0.2）]， 洗脫比例為A∶B=55∶45， 柱溫為40℃， 樣品室溫度為15℃， 流速0.4 ml/min， 檢測波長265 nm， 進(jìn)樣量10 μl。在上述色譜條件下， 比沙可啶峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>1.5， 滿足系統(tǒng)適用性要求。

2. 2 樣品配制

2. 2. 1 對照品溶液 精密稱取比沙可啶對照品適量置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解， 并制成1 ml中約含0.2 mg的比沙可啶對照品溶液。

2. 2. 2 供試品溶液 取比沙可啶腸溶片20片， 精密稱定后置于碾缽中碾成細(xì)粉， 精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于比沙可啶10 mg）置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解并定容， 搖勻， 溶液過0.2 μm微孔濾膜后， 取續(xù)濾液作為供試品溶液， 平行配置2份。

2. 2. 3 空白輔料溶液 精密稱取生產(chǎn)工藝中的所有輔料適量， 并按“2.2.2供試品溶液”項下的方法配置成空白輔料溶液。

2. 3 樣品含量測定 分別取“2.2” 項下的對照品溶液和供試品溶液10 μl， 注入UPLC儀， 按“2.1”項中的色譜條件各進(jìn)樣2針進(jìn)行分析， 記錄色譜圖中相應(yīng)的峰面積， 求各自的平均值， 按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果， 比沙可啶腸溶片的含量為98.8%。

3 測量不確定度評價

3. 1 建立數(shù)學(xué)模型 根據(jù)含量測定的原理和測試過程可知， 比沙可啶腸溶片中比沙可啶的含量計算公式為：

式中， Y代表供試品中比沙可啶的標(biāo)示百分含量；A1、A2分別代表供試品的峰面積和對照品的峰面積；W1、W2分別表示供試品的稱樣量和對照品的稱樣量；V1、V2分別代表供試品溶液的稀釋體積和對照品溶液的稀釋體積；P2代表對照品的純度；W—代表供試品平均片質(zhì)量；標(biāo)示量為5 mg/片。因此可知， 比沙可啶腸溶片中比沙可啶含量測定的測定不確定度來源有：對照品的純度、對照品及供試品稱樣量、對照品及供試品的稀釋體積、對照品及供試品的峰面積、供試品平均片重量。

3. 2 測量不確定度評價結(jié)果 根據(jù)JJF1059.1-2012規(guī)程《測量不確定度評定與表示》[4]、《常用玻璃儀器檢定規(guī)程》[5]等標(biāo)準(zhǔn)對本次研究涉及到的不確定度類型及相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行評估。結(jié)果見表1。由表1可以得知比沙可啶腸溶片含量的測量不確定度Uc（X）=98.8%×1.26×10-2。因測量結(jié)果符合正態(tài)分布， 置信概率取為95%， 包含因子K=2， 則U=2×1.26%=2.5%。因此可知X=（98.8±2.5）%， K=2。

4 小結(jié)

從含量測定的整個過程可以看出測量不確定度主要來源于對照品的稱量過程， 因此要是想提高比沙可啶腸溶片中比沙可啶含量的測量準(zhǔn)確度就應(yīng)該盡可能從對照品的稱量上提高準(zhǔn)確度， 分析天平應(yīng)經(jīng)過計量并做好日常維護(hù)， 稱量室應(yīng)保證溫濕度適宜， 稱量前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)砝碼對天平的精準(zhǔn)度進(jìn)行檢驗。

綜上所述， 要想提高此類實驗的準(zhǔn)確度， 實驗過程中的所有儀器都應(yīng)該經(jīng)過計量院校準(zhǔn)， 并在儀器所適宜的溫濕度下進(jìn)行實驗。另外也要在進(jìn)行方法驗證的基礎(chǔ)上建立測量不確定度的評估， 這對于保證實驗的精準(zhǔn)度極其重要。

參考文獻(xiàn)

[1] 張西如， 孫婷， 郭永輝， 等. 比沙可啶原料藥和腸溶片中有關(guān)物質(zhì)測定方法研究. 中國藥房， 2016， 27（21）：2995-2997.

[2] 國家藥典委員會. 中國藥典（二部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2015.

[3] 畢曉黎， 羅文匯， 李素梅， 等. 超高速液相測定西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量研究. 中國藥師， 2012， 15（5）： 651-652.

[4] 全國計量標(biāo)準(zhǔn)、計量檢定人員考核委員會組. 測量不確定度評定與表示實例. 中國計量出版社， 2001.

[5] 羅正華， 李少旦. 常用玻璃量器檢定的測量不確定度評定. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2007， 17（8）：1505-1506.

[收稿日期：2017-03-09]endprint