高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞抑制人CD4+T細(xì)胞免疫活性①

劉瑞敏 張愛紅 晁瑋霞 孫丹妮 王明麗 馬遠(yuǎn)方 白慧玲

(抗體藥物開發(fā)技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，河南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，開封475000)

高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞抑制人CD4+T細(xì)胞免疫活性①

劉瑞敏 張愛紅 晁瑋霞 孫丹妮 王明麗 馬遠(yuǎn)方 白慧玲

(抗體藥物開發(fā)技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，河南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，開封475000)

目的：研究高表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的肺癌細(xì)胞對CD4+T淋巴細(xì)胞的作用。方法：利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法建立穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的NCIH- hFoxp3肺癌細(xì)胞株，熒光定量PCR和Western blot檢測細(xì)胞Foxp3的表達(dá)；ELISA法檢測NCIH- hFoxp3培養(yǎng)上清中IL- 8、IL- 10表達(dá)量的變化；分離并活化CD4+T淋巴細(xì)胞，用含20%NCIH- hFoxp3腫瘤上清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，檢測CD4+T淋巴細(xì)胞IL- 2表達(dá)量的變化；將NCIH- hFoxp3與活化的CD4+T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，MTT評價免疫效應(yīng)細(xì)胞增殖情況；免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察NCIH- hFoxp3細(xì)胞對活化CD4+T淋巴細(xì)胞黏附作用的抑制。結(jié)果：建立高表達(dá)Foxp3的NCIH- hFoxp3肺癌細(xì)胞株，與陰性對照相比，NCIH- hFoxp3細(xì)胞培養(yǎng)上清IL- 8表達(dá)量降低，IL- 10表達(dá)量升高，NCIH- hFoxp3腫瘤細(xì)胞能抑制活化的CD4+T淋巴細(xì)胞IL- 2的表達(dá)、增殖及浸潤。結(jié)論：肺癌細(xì)胞Foxp3的表達(dá)對活化的CD4+T淋巴細(xì)胞有免疫抑制作用，這可能與NCIH- hFoxp3分泌細(xì)胞因子IL- 8表達(dá)量降低，IL- 10表達(dá)量升高有關(guān)。

Foxp3；肺癌；IL- 8；IL- 10；CD4+T淋巴細(xì)胞；免疫活性

機體免疫系統(tǒng)可以通過免疫監(jiān)視作用識別、控制最終消滅腫瘤細(xì)胞，而腫瘤細(xì)胞可通過多種機制逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視而生存。腫瘤細(xì)胞能否逃逸免疫監(jiān)視是影響腫瘤形成和發(fā)展的主要原因。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)在機體免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要的作用，轉(zhuǎn)錄因子Foxp3是Treg 的標(biāo)志性分子之一，對Treg細(xì)胞的發(fā)育及功能發(fā)揮起著關(guān)鍵的作用[1]。

Treg細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。在人結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、黑色素瘤等腫瘤組織內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了高比率的Treg細(xì)胞，在子宮頸癌，其轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)內(nèi)發(fā)現(xiàn)有較高比率的Treg細(xì)胞[2]。在小鼠腫瘤模型中，腫瘤部位也具有很高比率的Treg細(xì)胞，用抗CD25的抗體預(yù)先處理小鼠，腫瘤細(xì)胞則被排斥，腫瘤不會形成[3]。這些研究結(jié)果說明，可能正是腫瘤組織存在和聚集的Treg細(xì)胞抑制了免疫功能，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸形成腫瘤。最近研究發(fā)現(xiàn)，一些高表達(dá)Foxp3的腫瘤具有類似于Treg細(xì)胞的免疫抑制作用。我們建立高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞株，探討高表達(dá)Fox3的肺癌細(xì)胞以何種方式和途徑影響活化的CD4+T細(xì)胞的免疫功能，為腫瘤的治療和預(yù)防提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 肺癌細(xì)胞NCIH- 1299來自本實驗室，pcDNA3- hFoxp3質(zhì)粒和pcDNA3對照質(zhì)粒由田文志教授饋贈。SYBR Green熒光定量PCRmix購自北京康為公司，鼠抗人Foxp3 單克隆抗體購自Abcam公司，人IL- 8、IL- 10的ELISA試劑盒、鼠抗人CD3單克隆抗體、鼠抗人CD28單克隆抗體購自武漢博士德生物公司。

1.2 方法

1.2.1 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染并篩選穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞株 轉(zhuǎn)染步驟按照Invitrogen公司Lipofectamine 2000試劑盒的說明書。用G418篩選轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，濃度為1 000 mg/L，用有限稀釋法挑選擴增穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的細(xì)胞株，命名為NCIH- hFoxp3。

1.2.2 熒光定量PCR、Western blot方法驗證轉(zhuǎn)染效果 取NCIH- hFoxp3及對照細(xì)胞，Trizol法提取RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明將獲得的RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA。熒光定量擴增Foxp3目的片段，上游引物5′- TTCTTCCTTGAACCCCATGC- 3′ ；下游引物5′- CTGGAGGAGTGCCTGTAAGT- 3′，產(chǎn)物為118 bp。β- actin為內(nèi)參:上游引物5′- CCTAGAAGCATTTGCG- GTGG- 3′；下游引物5′- GAGCTACGAGCTGCCTGA- CG- 3′，產(chǎn)物為220 bp。用熒光定量PCR儀所配軟件Rotor- Gene 6000 Series Software對實驗結(jié)果進(jìn)行分析。取NCIH- hFoxp3及對照組細(xì)胞提取蛋白做SDS- PAGE凝膠電泳，電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，加鼠抗人Foxp3抗體4℃過夜，加山羊抗鼠二抗，暗室顯影，用β- actin為內(nèi)參比較。

1.2.3 ELISA檢測NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL- 8、IL- 10的表達(dá)差異 把對數(shù)增長期的細(xì)胞接種到6孔板中，設(shè)3個復(fù)孔。在培養(yǎng)24、36、48 h后收集細(xì)胞的培養(yǎng)上清，低溫離心5 min后凍存。按照ELISA試劑盒的操作步驟檢測細(xì)胞IL- 8、IL- 10的表達(dá)量，實驗重復(fù)3次。

1.2.4 分離并活化CD4+T細(xì)胞 無菌抽取健康人外周血30 ml，密度梯度離心法分離單個核細(xì)胞，利用MACS磁性分離柱分離出CD4+T淋巴細(xì)胞。使用抗CD3和抗CD28抗體刺激分離的CD4+T淋巴細(xì)胞，方法為用抗CD3抗體2 μg/ml包被6孔板12 h，再加CD4+T淋巴細(xì)胞和抗CD28抗體2 μg/ml，刺激3 d。

1.2.5 ELISA方法檢測活化的CD4+T淋巴細(xì)胞用NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞上清培養(yǎng)后IL- 2表達(dá)量的變化 將NCIH- hFoxp3和對照組肺癌細(xì)胞按照相同數(shù)目接種，待細(xì)胞長至80%融合時，用PBS洗滌6次，改為無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，取培養(yǎng)上清備用?；罨腃D4+T細(xì)胞用加入含20%腫瘤細(xì)胞上清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)4、8、12、24 h時收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，離心5 min。按照人ELISA試劑盒說明書的操作步驟檢測IL- 2表達(dá)量。

1.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞對活化的CD4+T淋巴細(xì)胞黏附的抑制作用 把兩種肺癌細(xì)胞以相同的數(shù)目接種到6孔板中的蓋玻片上，加入活化的CD4+T細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞的比例為5∶1，設(shè)3個復(fù)孔。培養(yǎng)6 h后，取出細(xì)胞爬片，進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。用PBS沖洗爬片3次，95%酒精固定 10 min，滴加鼠抗人Foxp3抗體孵育4℃ 過夜。山羊抗鼠二抗孵育37℃ 30 min，滴加DAB顯色液顯色約3～10 min，中性樹膠封片。

1.2.7 共培養(yǎng)系統(tǒng)對 CD4+T 細(xì)胞增殖的影響 將磁珠分離的 CD4+T 細(xì)胞活化增殖 3 d 后調(diào)整濃度為1×105ml-1。與肺癌細(xì)胞NCIH- hFoxp3按1∶1的比例共同培養(yǎng)，共培養(yǎng)系統(tǒng)采用24孔Transwell 細(xì)胞共培養(yǎng)板，NCIH- hFoxp3在上室，T細(xì)胞在下室，用 10%血清的1640培養(yǎng)基，72 h 后收集下室T細(xì)胞，細(xì)胞吹打均勻后接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100 μl，設(shè)3個復(fù)孔，每孔加人MTT 10 μl，孵育4 h，然后加入DMSO 100 μl，繼續(xù)孵育2 h，用全自動酶標(biāo)儀測492 nm處吸光度(A值)。

2 結(jié)果

2.1 建立穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的細(xì)胞株NCIH- hFoxp3 熒光定量PCR的結(jié)果如圖1:熒光定量法對NCIH- hFoxp3及對照細(xì)胞進(jìn)行Foxp3基因擴增，重復(fù)3次，2-ΔΔCT值均在4以上，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。Western blot結(jié)果如圖2: NCIH- hFoxp3細(xì)胞在48 kD大小的位置出現(xiàn)明顯的條帶，而NCIH- 1299細(xì)胞和空白質(zhì)粒對照細(xì)胞在48 kD大小的位置沒有出現(xiàn)明顯的條帶，表明pcDNA3- hFoxp3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到NCIH- 1299細(xì)胞中，在蛋白水平上高表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞培養(yǎng)上清IL- 8、IL- 10表達(dá)差異 用ELISA方法檢測在不同的時間點細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL- 8、IL- 10表達(dá)量的差異，結(jié)果如圖3:兩組細(xì)胞上清中IL- 8的含量都隨著培養(yǎng)時間的增加而增加； NCIH- hFoxp3細(xì)胞組中IL- 8的含量明顯低于對照組，兩組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t24 h=76.72、t36 h=34.01、t48 h=43.76，P<0.01)。圖4所示，NCIH- hFoxp3細(xì)胞組上清中IL- 10的含量隨時間的增加有明顯升高，在36 h后含量高于對照組，36 h后兩組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t36 h=9.40，P<0.05；t48 h=23.93，P<0.01)。

2.3 活化的T淋巴細(xì)胞用NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞上清培養(yǎng)后IL- 2表達(dá)量變化 活化的T細(xì)胞用含20%腫瘤細(xì)胞上清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，在培養(yǎng)4、8、12、24 h時收集培養(yǎng)上清檢測IL- 2的濃度。結(jié)果如圖5所示: hFoxp3上清培養(yǎng)組T細(xì)胞IL- 2的表達(dá)量隨培養(yǎng)時間的增長而下降，NCIH- control上清培養(yǎng)組T細(xì)胞IL- 2的表達(dá)量先上升，培養(yǎng)8 h后逐漸下降。在各個時間點NCIH- hFoxp3上清培養(yǎng)組T細(xì)胞IL- 2的表達(dá)量都明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t4 h=16.50、t8 h=61.33、t12 h=6.87、t24 h=12.39,P<0.05)。

圖1 高表達(dá)Foxp3的細(xì)胞株NCIH- hFoxp3的PCR鑒定Fig.1 Identification of NCIH- hFoxp3 by quantitative PCRNote: Vs NCIH- control，**.P<0.01.

圖2 高表達(dá)Foxp3的細(xì)胞株NCIH- hFoxp3的Western blot圖及統(tǒng)計學(xué)分析圖Fig.2 Identification of NCIH- hFoxp3 by Western blotNote: Vs NCIH- control，**.P<0.01.

圖3 兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清不同時間IL- 8含量對比Fig.3 Concentration of IL- 8 in tumor cells supernatants at different timeNote: Vs NCIH- control，**.P<0.01.

圖4 兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清不同時間IL- 10含量對比Fig.4 Concentration of IL- 10 in the tumor cells superna- tants at different time Note: Vs control，*.P<0.05,**.P<0.01.

圖5 T細(xì)胞與兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清共培養(yǎng)后T細(xì)胞IL- 2表達(dá)量的變化Fig.5 Concentration of IL- 2 of CD4+T cells in superna- tants after culturing with tumor supernatants at different timeNote: Vs.NCIH- control，*.P<0.05.

圖6 NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞對活化CD4+T淋巴細(xì)胞黏附作用的抑制Fig.6 Inhibiting of CD4+T cells to adhesion to NCIH- hFoxp3 and control cells

表1 活化的CD4+T細(xì)胞周圍黏附的NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞比較

Tab.1 To contrast the numbers of NCIH- hFoxp3 and control cells around active CD4+T cells

GroupsTumorcellsCD4+TcellsCD4+Tcells/tumorcellsNCIH-hFoxp356.4±6.487.4±1.920.129±0.0251)NCIH-control32.9±4.8447.2±8.891.439±0.209

Note：1)P<0.01 vs NCIH- control.

圖7 NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞對 CD4+T 細(xì)胞增殖的影響Fig.7 Effects of NCIH- hFoxp3 and NCIH- control on CD4+T cells proliferating

2.4 NCIH- hFoxp3和對照組細(xì)胞對活化CD4+T淋巴細(xì)胞黏附作用的抑制 結(jié)果如圖6、表1所示:與 NCIH- control組腫瘤細(xì)胞周圍聚集的T細(xì)胞相比，NCIH- hFoxp3組腫瘤細(xì)胞周圍聚集的T細(xì)胞明顯減少。隨機取5個視野，分別計算視野中的腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞的個數(shù)。NCIH- hFoxp3組平均1個腫瘤細(xì)胞周圍有0.129個T淋巴細(xì)胞，NCIH- control組平均1個腫瘤細(xì)胞周圍有1.439個T細(xì)胞，兩組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5 共培養(yǎng)系統(tǒng)對 CD4+T 細(xì)胞增殖的影響 NCIH- hFoxp3和對照組分別與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)的MTT結(jié)果如圖7所示，在共培養(yǎng)系統(tǒng)中，與對照組相比，NCIH- hFoxp3肺癌細(xì)胞能抑制效應(yīng)性 CD4+T 細(xì)胞增殖，這種抑制增殖能力不依賴細(xì)胞接觸，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.69，P<0.01)。

3 討論

腫瘤形成及轉(zhuǎn)移是多階段連續(xù)的復(fù)雜過程，受多種因素的影響，腫瘤細(xì)胞能否逃逸免疫監(jiān)視是影響腫瘤形成的主要原因之一。Treg細(xì)胞在機體的免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要的作用，F(xiàn)oxp3主要在Treg表達(dá)，是Treg的標(biāo)志性分子，主要通過維持Treg發(fā)育發(fā)揮作用[4]。Treg 細(xì)胞可通過分泌免疫抑制因子IL- 10及IL- 35發(fā)揮其調(diào)節(jié)功能[5]，如IL- 10抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活性，而IL- 35則具有抑制T細(xì)胞的增殖等。Treg細(xì)胞的確與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。在多種腫瘤組織內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了高比率的Treg細(xì)胞，而且在非小細(xì)胞肺癌、胃癌均發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[6- 9]。這些研究結(jié)果說明，可能腫瘤組織存在和聚集的Treg細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。

Treg在腫瘤免疫逃逸中具有重要作用，而Treg發(fā)育和免疫抑制作用主要受Foxp3的調(diào)控。最近研究發(fā)現(xiàn)，一些高表達(dá)Foxp3的腫瘤具有類似于Treg細(xì)胞的免疫抑制作用，如人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制T細(xì)胞增殖等[10]。高表達(dá)Foxp3的腫瘤細(xì)胞對活化的CD4+T淋巴細(xì)胞免疫活性的影響的報道較少。本實驗的目的是觀察高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞株對活化CD4+T淋巴細(xì)胞的作用，更符合腫瘤免疫的過程。實驗中，我們測定了活化的CD4+T淋巴細(xì)胞用NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞上清培養(yǎng)后IL- 2表達(dá)量的變化，發(fā)現(xiàn)NCIH- hFoxp3上清培養(yǎng)組的CD4+T淋巴細(xì)胞IL- 2的表達(dá)量明顯低于NCIH- control上清培養(yǎng)組，NCIH- hFoxp3和對照組分別與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)的MTT顯示，在共培養(yǎng)系統(tǒng)中NCIH- hFoxp3肺癌細(xì)胞能抑制效應(yīng)性 CD4+T 細(xì)胞增殖，這種抑制增殖能力不依賴細(xì)胞接觸，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。以上實驗結(jié)果提示高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞可以抑制活化的CD4+T細(xì)胞的增殖及活性，IL- 2在CD4+T細(xì)胞的增殖中發(fā)揮重要作用[11]。

本實驗用ELISA方法檢測了肺癌細(xì)胞株NCIH- hFoxp3和對照細(xì)胞上清中IL- 8、IL- 10和TGF- β的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)NCIH- hFoxp3組細(xì)胞上清中IL- 8明顯降低，IL- 10明顯升高，而TGF- β的分泌量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(實驗結(jié)果中未列出)。IL- 10是一種重要的參與免疫負(fù)調(diào)控的細(xì)胞因子，能抑制CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，從而抑制Th1細(xì)胞對CD8+T細(xì)胞免疫的輔助作用[12]。而機體的抗腫瘤免疫，以效應(yīng)CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，高表達(dá)Foxp3的腫瘤細(xì)胞可能通過這種方式逃逸機體的免疫監(jiān)視作用，這和CD4+CD25+Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用相似。

我們用免疫細(xì)胞化學(xué)染色對活化的CD4+T細(xì)胞和兩組肺癌細(xì)胞共同培養(yǎng)時細(xì)胞的浸潤進(jìn)行統(tǒng)計，在NCIH- hFoxp3細(xì)胞周圍浸潤的T淋巴細(xì)胞明顯少于對照組，NCIH- hFoxp3可以通過直接接觸抑制CD4+T細(xì)胞的作用。

本實驗還發(fā)現(xiàn)NCIH- hFoxp3細(xì)胞表達(dá)IL- 8低于對照組細(xì)胞。IL- 8對特異性和非特異性的免疫細(xì)胞具有強烈的趨化作用，包括對嗜中性粒細(xì)胞的趨化和激活作用及對淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的趨化作用。有研究者發(fā)現(xiàn)表達(dá)Foxp3的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出和CD4+CD25+Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞相似的特性，即可抑制CD4+CD25-T 細(xì)胞的增殖，用Foxp3 siRNA抑制腫瘤細(xì)胞Foxp3表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞分泌的IL- 8增高[13]，同我們的研究結(jié)果一致。而大量研究表明，在腫瘤組織中Foxp3高表達(dá)的患者預(yù)后不良[14]，所以我們推測，腫瘤局部IL- 8低表達(dá)，對免疫細(xì)胞趨化作用減弱，抑制了免疫細(xì)胞的浸潤，這也是腫瘤細(xì)胞逃逸免疫殺傷的機制之一。

綜上所述，我們得出結(jié)論，高表達(dá)Foxp3的肺癌細(xì)胞抑制了T細(xì)胞的浸潤能力及活化的T細(xì)胞的免疫作用，這可能是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL- 8和IL- 10的分泌而實現(xiàn)的。

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[收稿2016- 11- 21 修回2017- 03- 07]

(編輯 倪 鵬)

Foxp3 overexpression in lung cancer cells suppresses immune activities of activa- ted CD4+T cells

LIU Rui- Min，ZHANG Ai- Hong，CHAO Wei- Xia,SUN Dan- Ni,WANG Ming- Li,MA Yuan- Fang，BAI Hui- Ling.

Joint National Laboratory for Antibody Drug Engineering,Medical College of Henan University,Kaifeng 475000,China

Objective:To determine the effects of Foxp3- overexpressing lung cancer cells on activated CD4+T lymphocyte.Methods: Stable Foxp3- overexpressing lung cancer cells NCIH- 1299,NCIH- hFoxp3,was generated by transfection of NCIH- 1299 cells with plasmid pcDNA3- hFoxp3 mediated by Lipofectamine 2000 and by selection with G418,and validated by quantitative PCR and Western blot.The expression levels of IL- 8 and IL- 10 secreted by NCIH- hFoxp3 and NCIH- control were measured by ELISA.IL- 2 secrection by activated human CD4+T lymphocyte which was tested after stimulation with 20% conditioned medium of NCIH- hFoxp3 and NCIH- control cells.The proliferation of activated human CD4+T lymphocytes was assessed by MTT after coculture with NCIH- hFoxp3 cells.The adhesive ability of activated human CD4+T lymphocytes was probed with NCIH- hFoxp3 cells by immunocytochemistry.Results: Compared with NCIH- control cells,NCIH- hFoxp3 secreted high level of IL- 10 and low level of IL- 8.NCIH- hFoxp3 with Foxp3 overexpression significantly suppressed the proliferation,adhesive potential and IL- 2 expression by activated CD4+T cells.Conclusion: Suppression of immune activities of activated CD4+T cells by Foxp3 overexpression in lung cancer cells may correlate with cytokine IL- 8 and IL- 10,which can contribute lung cancer progression.

Foxp3;Lung cancer;IL- 8;IL- 10;CD4+T lymphocyte;Immune activities

10.3969/j.issn.1000- 484X.2017.08.004

劉瑞敏(1974年-)，女，碩士，副教授，主要從事腫瘤免疫方面的研究。

及指導(dǎo)教師：白慧玲(1964年-)，女，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事自身免疫性疾病及腫瘤免疫方面的研究，E- mail:445950688@qq.com。

R730.3

A

1000- 484X(2017)08- 1141- 05

①本文為河南省衛(wèi)生廳2010醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計劃(2010003083)。