1,25(OH)2VD3對大鼠肺纖維化中IL- 9及PU.1表達水平的影響①

鄭 靜 劉乃國 倪 娜 董洪亮 王 楠 成苗青

(濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學實驗室,濱州256603)

1,25(OH)2VD3對大鼠肺纖維化中IL- 9及PU.1表達水平的影響①

鄭 靜 劉乃國 倪 娜 董洪亮 王 楠 成苗青

(濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學實驗室,濱州256603)

目的：探討肺纖維化發(fā)生發(fā)展中IL- 9及PU.1的作用以及活性維生素D3[1,25(OH)2VD3]在纖維化過程中對兩種因子表達水平的影響。方法：90只SPF級雄性SD大鼠隨機分成三個組：對照組、模型組和治療組(n=30)。模型組和治療組經氣管注入博來霉素(5 mg/kg)建立肺纖維化模型，對照組注入等體積生理鹽水。治療組于手術后第2天腹腔注射活性維生素D3，模型組注射等量的活性維生素D3溶劑(丙二醇)，對照組注射等量的生理鹽水。各種處理均為兩天一次。分別于手術后第14、21和28天處死大鼠取材，各小組每個時間點10只大鼠。HE染色法觀察各組實驗大鼠肺部病理變化，Masson染色法觀察膠原纖維的差異，堿水解法檢測羥脯氨酸含量的變化。應用Real- time PCR和免疫組化技術分別從mRNA水平和蛋白質水平檢測大鼠肺組織中IL- 9及PU.1的表達，ELISA法檢測血清中IL- 9的表達水平。結果：博來霉素處理后，第14天大鼠肺部已經出現纖維化，隨著時間推移，纖維化進一步加重。在三個時間點，模型組和治療組的羥脯氨酸含量明顯高于對照組，而治療組明顯低于模型組。在三個時間點，治療組和模型組中IL- 9及PU.1的表達量均逐漸增高，且都顯著高于對照組；第14、21天治療組兩種因子的表達量均明顯低于相應時間點的模型組,第28天時治療組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第21天模型組和治療組IL- 9和PU.1的表達水平明顯高于第14天，第28天與第21天比較差異無統(tǒng)計學意義。結論：IL- 9和PU.1在博來霉素引起的大鼠肺纖維化早期可能發(fā)揮促纖維化作用?；钚跃S生素D3可能通過降低PU.1的表達水平，進而減少IL- 9的分泌，從而對大鼠肺纖維化的發(fā)生發(fā)展起一定的抑制作用。

肺纖維化；活性維生素D3；IL- 9；PU.1

特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)，以彌漫性肺實質、肺泡炎癥和間質纖維化為基本病理病變。目前該病發(fā)病機制尚不完全清楚，也缺乏有效的治療措施。因此探討其發(fā)病機制，尋找有效的治療方法具有重要意義。研究發(fā)現活性維生素D3(VD3)具有抑制小鼠肺纖維化的作用[1,2]。IL- 9(Interleukin9，IL- 9)是一種T細胞產生的細胞因子，其靶標細胞包括淋巴細胞、骨髓細胞、肥大細胞等，在自身免疫疾病的發(fā)生中具有重要作用[3]。小鼠中的IL- 9過度表達與肺纖維化的發(fā)展和發(fā)病率有關[4,5]。Chang等[6]通過實驗證實PU.1可以特異性地增強Th9細胞表型，為Th9特異轉錄因子。最近研究證實Th9細胞通過PU.1與其他因子的相互作用參與了大鼠肺纖維化的過程[7,8]。本實驗旨在探討由博來霉素誘導的大鼠肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中，IL- 9和PU.1的作用以及活性VD3對IL- 9和PU.1的影響，為闡明發(fā)病機制，探索有效治療方法提供科學資料。

1 材料與方法

1.1 材料 90只6～8周齡SPF級雄性 SD大鼠購自山東魯抗醫(yī)藥有限公司，動物合格證號：SCXK (滬)2008- 0016，體重為(200±20)g。博來霉素為日本化藥株式會社產品(15 mg/支，批號：030201),活性維生素D3[1,25(OH)2VD3，批號：#074M4028V]購自美國Sigma公司，PU.1小鼠抗大鼠抗體 (C- 3)(sc- 390405)購自Santa公司，IL- 9抗體(ab203386)購自Abcam公司，小鼠超敏二步法檢測試劑盒，兔超敏二步法檢測試劑盒等購自北京中杉金橋公司，外周血RNA提取試劑盒購自大連TaKaRa 生物技術公司(No9112/9113)，肺組織RNA提取試劑盒購自OMEGA公司，HiFiScript快速去基因組cDNA第一鏈合成試劑盒購自康為世紀生物技術公司，實時Real- time- PCR試劑盒購自Roche公司，大鼠 IL- 9 ELISA檢測試劑盒購自上海生工(C506549)，羥脯氨酸(HYP)測定試劑盒(堿水解法)購自南京建成生物工程研究所(A030- 2)。引物和大鼠GAPDH內參引物(B661204- 0001,10 μmol/L,100 μl)由上海生工合成。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立及分組 90只大鼠飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中，按隨機數字表法分為3組：對照組(生理鹽水+生理鹽水)、模型組(博來霉素+丙二醇)、治療組(博來霉素+活性VD3)。4%水合氯醛(10 μl/g)腹腔注射麻醉后，氣管滴注博來霉素5 mg/kg。對照組相同手術后氣管內注入等體積的生理鹽水。造模后自第2天起,治療組每兩天腹腔注射用丙二醇稀釋的活性VD3(2 μg/kg)給予治療，模型組腹腔注射等體積的丙二醇，對照組腹腔注射等體積的生理鹽水。各組術后第 14、21、28天各處死10只大鼠。處死前心臟穿刺取血2 ml，1 ml置于EDTA- K2抗凝管中，以供提取RNA；另1 ml置于促凝管中，分離血清。取右肺下葉用4%多聚甲醛固定，用于免疫組織化學染色和病理染色；左肺下葉提取RNA，其余肺組織液氮速凍用于羥脯氨酸含量測定。

1.2.2 病理檢測 HE染色法觀察各組實驗大鼠肺部病理變化，Masson染色法觀察膠原纖維的差異。

1.2.3 HYP測定 將肺組織在液氮中搗成粉末，按100 mg粉末加入1 ml生理鹽水的比例制備組織勻漿，按照 HYP試劑盒說明書操作，堿水解法及分光光度計法檢測肺組織HYP含量。

1.2.4 血清中IL- 9水平的檢測 心臟穿刺取血1 ml 置于促凝管中，自然凝固后4 000 r/min離心5 min，取血清，-20℃貯存，待測。按ELISA試劑盒說明書進行操作。

1.2.5 Real- time PCR檢測血液和肺組織PU.1 mRNA的表達水平 (1)按試劑盒說明書分別提取血液和肺組織總RNA。(2)反轉錄：按反轉錄試劑盒說明書，各組取1 μg總RNA應用逆轉錄試劑盒逆轉錄為cDNA，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?3) 熒光定量PCR：按照FastStart Essential DNA Green Master說明配制反應混合物，反應體系為20 μl，反應條件：95℃ 10 min，95℃ 10 s，65℃ 10 s，72℃ 15 s，重復40個循環(huán)；65℃至95℃，5 s增加0.5℃，制備熔解曲線。每個樣品設3個復孔。Spi1引物序列：上游5′- ACCTTCCAGTTCTCGTCCAA- 3′,下游5′- CCGTCTTGCCGTAGTTGC- 3′，產物長度124 bp。相對mRNA水平以2-ΔΔCT方法表示。

1.2.6 肺組織IL- 9、PU.1蛋白的檢測 石蠟切片脫蠟水化后，0.3%H2O2處理內源性過氧化氫酶，抗原熱修復，封閉液封閉后，分別滴加IL- 9、PU.1抗體(均按1∶100倍稀釋)。37℃孵化30 min，4℃過夜。加入生物素二抗，室溫孵育30 min，DAB顯色，蘇木素復染，常規(guī)脫水、透明、封片。以PBS代替一抗作陰性對照。陽性信號為棕黃色著色。在光鏡 10×40 放大倍數下每點隨機攝片3張，應用病理圖像分析系統(tǒng)(麥克奧迪數碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng))做半定量分析，以每例所有圖片的平均吸光度值的算術平均值作為最終平均吸光度值。

2 結果

2.1 實驗各組肺組織病理觀察 肺組織切片HE染色結果：對照組肺泡結構正常，肺泡腔內無炎癥細胞浸潤。在三個時間點，模型組肺泡炎由重至輕，而肺纖維化由輕至重，成纖維細胞逐漸增多；肺泡腔內有巨噬細胞和中性粒細胞滲出，肺泡間隔充血增厚，肺泡結構破壞。治療組也出現從肺泡炎到纖維化的變化過程，但較模型組輕(見圖1A1～I1)。

肺組織切片Masson染色結果：膠原纖維、黏液、軟骨呈藍色，肌纖維、纖維素呈紅色，胞核黑藍色。對照組局部肺泡間隔稍增厚，少量膠原纖維存在于支氣管壁周圍。在三個時間點，模型組膠原纖維明顯逐漸增多，肺泡結構破壞逐漸加重，肺泡間隔逐漸增厚，肺纖維化程度逐漸加重。治療組與同一時間點的模型組相比，肺泡結構破壞稍輕，膠原纖維含量稍降低，纖維化程度稍輕，說明活性維生素D3對肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展有一定的抑制作用(見圖1A2～I2)。

2.2 不同時間各組肺組織羥脯氨酸含量測定 不同時間點，各組肺組織羥脯氨酸含量檢測結果顯示，模型組均明顯高于對照組(P<0.01)，且隨建模時間延長而逐漸增高；治療組均明顯低于相應時間點的模型組(P<0.05)。組內比較可見，模型組羥脯氨酸含量在第21天和28天均明顯高于第14天(P<0.01)，第28天高于第21天(P<0.05)；治療組在第21天和28天均高于第14天(P<0.05，P<0.01)，見表1。

2.3 血清IL- 9的濃度測定 造模手術后，隨著時間的延長，模型組和治療組血清IL- 9的水平均逐漸增高，且均高于對照組，而對照組在各時間點沒有明顯變化；治療組在第14天、21天時血清IL- 9的水平均明顯低于相應時間點的模型組(P<0.05)，而第28天時治療組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；組內比較可見，模型組和治療組IL- 9含量第21天明顯高于第14天(P<0.05)，第28天高于第21天(P<0.05，見圖2)。

圖1 肺組織切片HE和Masson染色結果(×200)Fig.1 HE and Masson staining results of lung tissues slices(×200)Note: A1，B1，C1/D1，E1，F1/G1，H1，I1.HE staining results in control/model/treatment group on the 14th,21st and 28th day;A2，B2，C2/D2，E2，F2/G2，H2，I2.Masson staining results in control/model/treatment group on the 14th,21st and 28th day.

Groups 14d21d28dControl481±102452±127475±129 Model832±1371)1025±741)5)1182±751)5)7)Treatment650±702)3) 820±1281)3)6)858±851)4)5)

Note：Compared with control,1)P<0.01,2)P<0.05;compared with model,3)P<0.01,4)P<0.05;compared with 14 d,5)P<0.01,6)P<0.05;compared with 21 d,7)P<0.05.

GroupsLungtissue14d21d28dBlood14d21d28dControl1.046±0.3511.073±0.0471.167±0.2121.068±0.0341.060±0.0421.053±0.028Model1.725±0.1531)2.744±0.1591)5)2.840±0.2561)1.614±0.0591)2.799±0.1022)6)2.827±0.1461)Treatment1.477±0.0622)4)2.142±0.4001)4)6)2.402±0.0661)3)1.410±0.0201)3)2.325±0.0891)4)5)2.372±0.3651)

Note：Compared with control,1)P<0.01,2)P<0.05;compared with model,3)P<0.01,4)P<0.05;compared with 14 d,5)P<0.01,6)P<0.05.

GroupsIL-914d21d28dPU.114d21d28dControl0.634±0.0450.614±0.0450.632±0.0680.649±0.0270.665±0.0460.640±0.108Model0.758±0.0371)0.879±0.0551)5)0.898±0.0591)0.840±0.0091)1.017±0.0941)5)1.200±0.1881)Treatmant0.703±0.0032)4)0.813±0.0411)4)5)0.851±0.0191)0.809±0.0211)4)0.853±0.0321)3)5)0.896±0.1261)

Note：Compared with control,1)P<0.01,2)P<0.05;compared with model,3)P<0.01,4)P<0.05;compared with 14 d,5)P<0.01.

圖2 各組血清中IL- 9的濃度Fig.2 Concentration of IL- 9 in serum in each group±s)Note: Compared with control,*.P<0.01,#.P<0.05;compared with model,△.P<0.01;compared with 14 d,▽.P<0.05;compared with 21 d,☆.P<0.05.

2.4 肺組織和血液中PU.1 mRNA水平檢測 不同時間點，肺組織和血液PU.1 mRNA水平檢測顯示，模型組和治療組均明顯高于對照組，且隨建模時間延長而逐漸增高；治療組第14天和21天均明顯低于相應時間點的模型組；第28天時治療組PU.1 mRNA含量只有肺組織中明顯低于模型組(P<0.01)，血液中治療組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。組內比較可見，第21天時模型組和治療組肺組織及血液PU.1 mRNA水平均明顯高于第14天，而第28天與第21天比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表2)。

圖3 免疫組織化學DAB染色顯示IL- 9和PU.1在肺組織中的表達(×400)Fig.3 IL- 9 and PU.1 expression by DAB immunoh- istochemical staining in lung tissues(×400)Note: A1，B1，C1/D1，E1，F1/G1，H1，I1.IL- 9 expression in control/model/treatment group on the 14th,21st and 28th day;A2，B2，C2/D2，E2，F2/G2，H2，I2.PU.1 expression in control/model/treatment group on the 14th,21st and 28th day.

2.5 肺組織IL- 9和PU.1免疫組化檢測結果 肺組織IL- 9和PU.1蛋白主要表達在巨噬細胞、淋巴細胞的細胞質和部分細胞核內(見圖3)。經圖像分析量化后，在第14、21和28天三個時間點，模型組和治療組肺組織IL- 9和PU.1的蛋白質表達水平均明顯高于對照組，且隨造模時間延長而逐漸增高；在第14天和21天，治療組中兩種因子的蛋白質表達均明顯低于相應時間點的模型組中的表達，而第28天時治療組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。組內比較可見，第21天時模型組和治療組肺組織IL- 9和PU.1的蛋白表達水平明顯高于第14天，而第28天與第21天比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表3)。Spearman相關分析表明，肺組織中IL- 9蛋白質表達與PU.1 蛋白表達量之間表現為正相關(r=0.846,P<0.01)。

3 討論

Moeller等[9]研究發(fā)現，大鼠氣管內滴入博來霉素以后，首先發(fā)生急性炎癥反應，持續(xù)8 d左右，自第9天發(fā)生纖維化改變一直持續(xù)到第28～35天。與本研究動物模型病變發(fā)生情況相一致。本研究通過HE染色病理結果和Masson染色結果表明，與同一時間點的模型組相比，治療組肺泡結構破壞較輕，膠原纖維含量明顯降低，纖維化程度較低。羥脯氨酸含量檢測是判斷肺纖維化程度的金標準。在各時間點，模型組肺組織羥脯氨酸含量均明顯高于對照組，且隨建模時間延長而逐漸增高，說明模型組羥脯氨酸含量呈逐漸上升趨勢，反映了大鼠肺纖維化的程度隨時間推移而加重。這與以往文獻報道的肺纖維化模型相一致[10]。而且治療組羥脯氨酸含量均明顯低于相應時間點的模型組。以上研究結果同時提示活性VD3對大鼠肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展有一定抑制作用。

IL- 9是一種T細胞產生的細胞因子，研究證實Th2、Th9 和 Th17等T細胞、肥大細胞、嗜酸粒細胞和中性粒細胞等均可產生 IL- 9[11]。Jiang等[12]研究發(fā)現IL- 9在結締組織病伴間質性肺疾病(CTD- ILD)中的異常表達與肺纖維化的嚴重程度有關，且血清中IL- 9的水平明顯高于健康對照組[12]。Evans[13]研究哮喘患者發(fā)現IL- 9過度表達損傷肺功能[13]。Steenwinckel等[14]研究發(fā)現肺部損傷的機制可能與高表達的IL- 9增加了氣道上皮細胞黏液的分泌有關，而氣道上皮細胞與氣道的高反應性有關[14]。在鏈格孢屬慢性滴注模型中，IL- 9能夠加劇氣道纖維化，但對纖維化的發(fā)展可能是可有可無的[15,16]。van den Brle[4]利用慢性暴露在互隔交鏈孢霉提取物的方法制作了Tg5(IL- 9過表達小鼠)哮喘模型,發(fā)現IL- 9有促進氣道纖維化的作用。綜合以上研究結果我們推測，在肺纖維化的過程中IL- 9很可能起了促進作用。本實驗中大鼠血清IL- 9的濃度測定結果和IL- 9肺組織免疫組化結果同時顯示，三個時間點模型組IL- 9蛋白水平均明顯高于對照組，且隨建模時間延長而逐漸增高。此測定結果支持IL- 9的促纖維化作用，與上述諸多研究結果相符。最近研究發(fā)現活性VD3對博來霉素誘導的小鼠肺纖維化有抑制作用[1,2]。本研究結果顯示，治療組IL- 9的水平在第14、21天均明顯低于相應時間點的模型組且呈逐漸增高趨勢，第28天雖然也低于第21天但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明活性VD3治療后IL- 9水平在肺纖維化發(fā)生的早期階段明顯降低了，提示活性VD3在纖維化發(fā)生的早期階段(即第14天和21天)可能通過抑制IL- 9的表達發(fā)揮一定的抗纖維化作用；但是在后期階段(即第28天)此抑制作用減弱或消失，具體原因有待于進一步研究。

二氧化硅誘導的小鼠肺纖維化模型中，過表達的IL- 9有抗肺泡纖維化的作用，并且IL- 9減輕的肺纖維化與B淋巴細胞群落的擴增有關[5,17]。在Tg5(IL- 9過表達小鼠)氣道重塑模型中IL- 9的促纖維化作用可能與嗜酸性粒細胞有關[4]?？梢姡诓煌姆卫w維化模型中IL- 9發(fā)揮完全不同的功能，可能是因為在肺部定位的不同或效應細胞的變化。

最近研究發(fā)現ETS基因家族中的PU.1是促進Th9細胞轉錄分化的重要因素[6]。目前已經發(fā)現PU.1有110多個直接靶基因[18]。PU.1的表達具有明顯的組織特異性，表達水平的不同決定著多種免疫細胞的分化[19]。二氧化硅誘導的肺纖維化的發(fā)展主要位于炎性肺泡中的巨噬細胞[5]。顧兆偉等[20]研究過敏性鼻炎小鼠模型發(fā)現，小鼠鼻黏膜組織中IL- 9 mRNA表達水平與轉錄因子PU.1 mRNA表達水平呈正相關。本研究免疫組化檢測顯示，PU.1蛋白主要表達在巨噬細胞、淋巴細胞的細胞質和部分細胞核內，與以上諸多研究結果相符，與IL- 9的表達細胞種類相一致。相關性分析表明兩者又呈正相關，提示在大鼠肺纖維化發(fā)生過程中，它們之間可能存在某種聯系，也為以上理論提供了形態(tài)學依據。

PU.1 是Th9分化的特異性轉錄因子，在Th9細胞中PU.1直接與IL- 9基因啟動子結合，促進IL- 9的分泌，如果上調PU.1的表達，IL- 9的分泌也明顯增加；PU.1缺陷的小鼠IL- 9的表達極少[11]。PU.1綁定在IL- 9 基因位點上，通過促進IL- 9基因組蛋白乙?；龠MTh9細胞的表達[21]。同時PU.1也是抑制Th2細胞分化的轉錄因子，PU.1通過限制GATA- 3和IRF4的功能影響Th2分化，同時抑制Th2細胞因子的產生，促使Th2向Th9細胞轉化[11]。鮑文華等[7]研究發(fā)現隨著炎癥、纖維化進程的發(fā)展，肺纖維化組各時間點肺泡灌洗液中PU.1 mRNA含量明顯高于對照組[8]。本研究結果顯示，在纖維發(fā)生過程中，模型組和治療組PU.1無論從轉錄水平還是從蛋白質水平的表達均逐漸增高且其明顯高于對照組，與以上研究結果一致，提示PU.1可能在肺纖維化發(fā)生過程中起了促纖維化作用。肺組織免疫組化結果顯示PU.1和IL- 9呈正相關且表達細胞類型一致，進一步提示高表達的PU.1可能通過促進IL- 9的分泌進而起到促進肺纖維化發(fā)生發(fā)展的作用。本研究發(fā)現第14天和21天時治療組PU.1水平明顯低于相應時間點的模型組，差異有統(tǒng)計學意義；而第28天時治療組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。提示經活性維生素D3治療后，在肺纖維化發(fā)生的早期階段(即第14天和21天)PU.1的促纖維化作用被強烈抑制；而到后期(即第28天)此抑制作用減弱或消失，具體原因有待于進一步研究。

綜上所述，活性維生素D3在大鼠肺纖維化發(fā)生發(fā)展的早期階段具有一定的抑制作用，其機制可能是通過降低PU.1的表達水平，進一步減少IL- 9的分泌，從而對肺纖維化的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮抑制作用，因此活性維生素D3有望成為肺纖維化的一種輔助治療藥物。

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[收稿2016- 11- 29 修回2017- 01- 19]

(編輯 倪 鵬)

Impact of 1,25(OH)2VD3on expression levels of IL- 9 and PU.1 in rats with pulmonary fibrosis

ZHENG Jing,LIU Nai- Guo,NI Na,DONG Hong- Liang,WANG Nan,CHENG Miao- Qing.

Department of Clinical Medicine Laboratory,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256603,China

Objective:To explore the function of IL- 9 and PU.1 on genesis and development of pulmonary fibrosis,and the effect of active vitamin D3[1,25(OH)2VD3] on the expression levels of this two factors during the pathogenesis of fibrosis.Methods: 90 male SD rats were randomly divided into model group,treatment group,control group (n=30).Bleomycin(5 mg/kg) was injected into the trachea of rats to establish the model of pulmonary fibrosis in the model group and treatment group,while the control group was injected with isopyknic sterile saline.The treatment group,the model group and the control group were injected intraperitoneally with active vitamin D3,solvent of vitamin D3(propylene glycol) and sterile saline on the 2nd day after surgery respectively.All injections were carried out once every other day.10 rats were euthanized at 14th,21st and 28th day in each group in turn.After obtaining lung tissues from experimental rats,the pathological change of lung was compared by hematoxylin- eosin staining.The difference of collagen fiber and hydroxyproline content were compared by the Masson staining and basic- hydrolysis method respectively.The mRNA and protein expression of IL- 9 and PU.1 in lung tissue were detected by Real- time PCR and immunohistochemical technology respectively.The expression of IL- 9 in serum was detected by ELISA.Results: Fibrosis appeared in lungs of experimental rats treated with bleomycin after 14 days,and more and more aggravated with time.At three time points,the hydroxyproline content in model group and treatment group were significantly higher than that of control group,and the treatment group was significantly lower than the model group.At three time points,the expression of IL- 9 and PU.1 in model group and treatment group were risen gradually,and obviously higher than that in control group.On the 14th and 21st day,the expression of two factors in treatment group was significantly lower than model group;on the 28th day,there was no statistically significant difference between treatment group and model group(P>0.05).In model group and treatment group,the expression of two factors on 21st day was significantly higher than that on 14th day;there was no statistically significant difference between the 28th day and the 21st day.Conclusion: IL- 9 and PU.1 may play a profibrotic role at early stage of pulmonary fibrosis induced by bleomycin.The active vitamin D3may lower the expression level of PU.1,and then reduce the secretion of IL- 9，thus may play an inhibiting effect on genesis and development of pulmonary fibrosis in rats.

Pulmonary fibrosis;Active vitamin D3;IL- 9;PU.1

10.3969/j.issn.1000- 484X.2017.08.003

①本文受山東省自然科學基金(ZR2011HM062)和山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2015WS0490)資助。

鄭 靜(1981年-)，女，碩士，主管技師，主要從事分子免疫學方面的研究，E- mail：zhengjing2003@126.com。

及指導教師：劉乃國(1966年-)，男，博士，教授，主要從事分子免疫和細胞免疫學方面的研究，E- mail：liunaiguo1966@163.com。

R392.11

A

1000- 484X(2017)08- 1135- 06