• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    新疆紅棗棗果主要致病菌交鏈格孢菌產生毒素種類及黑斑病病果毒素含量測定

    2017-08-30 17:35:02何麗郭開發(fā)艾尼古麗依明趙思峰
    新疆農業(yè)科學 2017年6期
    關鍵詞:孢霉鏈格棗果

    何麗,郭開發(fā),艾尼古麗·依明,趙思峰

    (新疆綠洲農業(yè)病蟲害治理與植保資源利用自治區(qū)高校重點實驗室/石河子大學農學院,新疆石河子 832003)

    新疆紅棗棗果主要致病菌交鏈格孢菌產生毒素種類及黑斑病病果毒素含量測定

    何麗,郭開發(fā),艾尼古麗·依明,趙思峰

    (新疆綠洲農業(yè)病蟲害治理與植保資源利用自治區(qū)高校重點實驗室/石河子大學農學院,新疆石河子 832003)

    【目的】研究新疆紅棗縮果病和棗果黑斑病兩種病害的主要致病菌交鏈格孢菌(Alternariaalternate)產生的主要毒素種類,以及栆果黑斑病病果中的毒素種類和含量,為紅棗加工和食用的安全性評價提供依據。【方法】采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法,測定10株鏈格孢菌產生的毒素種類及含量,并對棗果黑斑病不同嚴重度發(fā)病棗果和人工接種果實中毒素種類及含量進行測定?!窘Y果】10株交鏈格孢供試菌株可產生4種毒素,分別為鏈格孢酚(alternariol,AOH)、交鏈格孢酚單甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交鏈孢烯(altenuene,ALT)和細交鏈格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)。TeA、ALT、AME和AOH在不同病級發(fā)病棗果和人工培養(yǎng)條件下均有檢出,其中TeA檢出含量最高,范圍為3.1×103~5.5×103mg/kg;AME、AOH和ALT的含量范圍分別為7.2×102~6.4×102mg/kg,1.2~3.8×102mg/kg和0.09~5.08 mg/kg。人工接種鏈格孢菌后,無傷、有傷棗果內均檢測到大量TeA。不止在發(fā)病棗果中檢測到了毒素,無傷接種未發(fā)病棗果亦發(fā)現(xiàn)大量毒素,且未接種健康棗果中亦有少量鏈格孢霉毒素?!窘Y論】新疆紅棗棗縮果病和棗果黑斑病病原菌兩種病害的主要致病菌交鏈格孢菌(Alternariaalternate)均可產生鏈格孢霉毒素,且產毒量高,危害嚴重,影響了新疆紅棗的產量及商品價值,患病棗果無法安全食用。在紅棗鮮食加工和風險評估中應引起關注和重視,并在紅棗種植和貯存期間減少病原菌侵染,以避免更多的污染。

    紅棗;棗果縮果??;棗果黑斑??;鏈格孢霉;毒素

    0 引 言

    【研究意義】鏈格孢屬真菌已報道約500種,其廣泛存在于水果、蔬菜和田間作物上導致多種農作物病害,同時該屬真菌還可以產生多種真菌毒素,主要種類有鏈格孢酚(AOH)、交鏈格孢酚單甲醚(AME)、交鏈孢烯(ALT)和細交鏈格孢菌酮酸(TeA)等[1-3],這些毒素具有誘變性、致癌性、基因毒性等多種毒性作用[4]。【前人研究進展】目前已在蘋果、柑橘、番茄、土豆、小麥、葵花籽等農產品中檢測到AME、AOH等鏈格孢毒素[5-8]。Dong等[9]從林縣的谷物上測出多種鏈格孢霉毒素,并認為AOH和AME兩種毒素很有可能與中國河南林縣的食道癌發(fā)生密切相關。AOH能引起食道上皮細胞增殖,并能引起胚胎食道鱗狀細胞癌變,用AOH處理老鼠皮下,可誘導鱗狀上皮細胞癌[10]。AME作為直接誘變劑,可使姊妹染色體交換率上升,誘導NIH 3T3細胞轉化,轉化后的細胞易癌變[11];AME也可選擇性作用于特定的基因組或DNA序列引發(fā)誘變[12]。TeA在鏈格孢霉毒素中毒性最強,具多種生物特性,如抗病毒[13]、抗腫瘤、抑菌[14]、細胞毒性、植物毒性[15],抑制蛋白質的合成[16]等。TeA對哺乳動物(小鼠、大鼠等[17])具有急性毒性,其鈉鹽、鎂鹽與一種發(fā)生在非洲的人類出血性疾病-奧尼賴病(Onyalai)密切相關[18]。目前歐盟已就食品與飼料中鏈格孢霉毒素對人畜的健康進行風險發(fā)布,其中TeA已列入美國食品藥物管理局(FDD)有毒化學物質登記冊?!颈狙芯壳腥朦c】新疆棗縮果病和棗果黑斑病的主要病原菌均為交鏈格孢菌(Alternariaalternate)[19,20],而其是否產生鏈格孢菌毒素以及毒素的種類和量目前尚未有明確報道?!緮M解決的關鍵問題】研究采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法,對分離自新疆棗縮果病和棗果黑斑病的交鏈格孢菌毒素種類及含量進行測定和分析,并測定及分析棗果黑斑病不同發(fā)病病級的果實和人工接種交鏈格孢菌后紅棗中毒素種類和含量,為新疆紅棗果實的安全食用風險評估提供依據。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    1.1.1 供試菌株

    鏈格孢菌代表菌株(Alternariaalternate)10株,分離自新疆紅棗主產區(qū)的棗縮果病和棗果黑斑病病樣上,經形態(tài)學和分子生物學方法鑒定為交鏈格孢菌(A.alternate),菌種保藏于石河子大學新疆綠洲農業(yè)病蟲害治理與植保資源利用自治區(qū)高校重點實驗室。

    1.1.2 發(fā)病棗果樣品

    采自新疆阿拉爾市周邊駿棗發(fā)病果實,按發(fā)病面積進行分級:0級,果實表面沒有病斑;1級,病斑面積<25%;2級,病斑面積25%~50%;3級,病斑面積50%~75%;4級,病斑面積>75%[21]。

    1.1.3 接種用棗果

    采自阿拉爾市周邊駿棗膨大期果實,快遞至石河子市實驗室內供接種用。

    1.1.4 培養(yǎng)基

    DRYES培養(yǎng)基[22]:酵母膏 20 g、蔗糖150 g、虎紅0.5 g、氯霉素0.1 g(0.2%溶于乙醇)、水1 L,pH 6.8。

    PDA培養(yǎng)基[23]:馬鈴薯(去皮) 200 g、葡萄糖 20 g、瓊脂粉 15 g、水1 L,pH 6.8。

    交鏈格孢酚單甲醚(AME,純度>98%)和鏈格孢酚(AOH,純度>98%)標準品購買于美國Sigma公司;細交鏈格孢菌酮酸(TeA,純度>98%)和交鏈孢烯(ALT,純度>98%)標準品購買于北京萊耀生物公司;其余乙酸乙酯、乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、乙腈等試劑購買于石河子市試劑公司。

    Xevo TQ/MS超高效液相色譜串聯(lián)質譜儀(美國Waters公司),配有Acquity UPLC EH C18液相色譜柱(2.1 mm×150 mm,1.7 μm)。

    1.2 方 法

    1.2.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質譜條件

    色譜柱:Acquity UPLC BEH C18液相色譜柱(1.7 μm,50 mm×2.1 mm);流動相:乙腈-水(0.1%甲酸);離子化模式:電噴霧離子源,正離子模式(ESI+);質譜掃描方式:多反應監(jiān)測(MRM);毛細管電壓3.5 kV,錐孔電壓40 kV,離子源溫度150℃,霧化溫度500℃,脫溶劑氣流量1 000 L/h,錐孔氣流速50 L/h。列出4種鏈格孢霉毒素的監(jiān)測離子、錐孔電壓和碰撞電壓等質譜參數。表1

    表1 4種鏈格孢霉毒素的串聯(lián)質譜測定參數
    Table 1 MS/MS parameters for the 4 Alternaria mycotoxins

    成分Compound電離模式IonizationMode母離子Precursor(m/z)子離子Daughter(m/z)保留時間Dwell(s)毛細管電壓Cone(kV)錐孔電壓Collision(kV)AOHESI+259.2213.2185.2*1.093.53.54040AMEESI+273.2199.1128.2*2.33.53.54040TeAESI+198.2153.2125.2*1.123.53.54040ALTESI+293.2257.2257.3*0.823.53.54040

    注:*定量離子

    Note:*Quantitative ion

    1.2.2 10株交鏈格孢菌毒素種類及含量測定

    將10株交鏈格孢菌菌株在PDA培養(yǎng)基上活化后,用打孔器打5 mm菌餅,接種到DRYES培養(yǎng)基上,三次重復,以空白為對照,28℃恒溫、12 h晝夜交替培養(yǎng)14 d后,分別從三次重復中取1 g菌餅,用液氮研磨充分,于2 mL離心管中。離心管內加入1 mL乙酸乙酯(含1%甲酸),震蕩1 h,在4 000 r/min下離心5 min,將提取液轉入一個新2 mL離心管內,以氮吹器蒸發(fā)干燥,將凍干粉末溶解到400 μL甲醇,取上清液過0.45 μm有機濾膜,濾液經UPLC-MS/MS分析。

    1.2.3 不同病級發(fā)病棗果樣品處理

    將采集的不同發(fā)病級數紅棗栆果樣品用清水洗凈晾干,用75%酒精表面消毒,再用無菌水將果實沖洗干凈,最后用滅菌濾紙吸干果實上殘留的水分,分別稱取健康棗果和發(fā)病果實病斑附近果肉2 g(精確至0.01 g),于50 mL尖底具塞離心管中,加入10 mL 1%甲酸乙腈溶液,7.5 mL無菌水,震蕩4 min;再加入4 g無水MgSO4和1 g NaCl,劇烈震蕩2 min 后,在4 000 r/min下離心5 min;取上清液轉入15 mL離心管,加入0.2 g PSA和0.6 g無水MgSO4,劇烈震蕩2 min后,在4 000 r/min下離心5 min;取上清液以氮吹器蒸發(fā)干燥,將凍干粉末溶解到400 μL甲醇,過0.45 μm有機濾膜,濾液經UPLC-MS/MS分析。10株棗縮果病和棗果黑斑病代表性的致病菌株在DRYES培養(yǎng)基上培養(yǎng)14 d后,提取粗提取物,測量4種鏈格孢霉毒素。

    1.2.4 人工接種鏈格孢后發(fā)病棗果樣品處理

    將活化的10株采用離體菌塊貼接法[20],對健康棗果進行無傷、有傷接種,將活化后的供試菌株,用打孔器打5 mm菌餅,將采集的健康無傷的紅棗果實用清水洗凈晾干,用75%酒精表面消毒,再用無菌水將果實沖洗干凈,最后用滅菌濾紙吸干果實上殘留的水分,用滅菌牙簽刺孔,在超凈工作臺中將菌餅菌面朝下接種到紅棗果實上,以DRYES培養(yǎng)基塊為對照,然后放入鋪有濕潤濾紙的方形發(fā)芽盒內(12 cm×12 cm×1.5 cm)中,每個代表菌株接種3個果實,28℃條件下12 h光照、12 h黑暗交替培養(yǎng),5 d后稱取病斑附近果肉2 g,按1.2.3方法處理后測定4種鏈格孢霉毒素種類及含量。

    試驗分別準確稱取健康果肉、DRYES培養(yǎng)基,在20、100、500和1 000 ppb 4個水平下加標,每個水平重復測定6次,按1.3.2樣品處理方法處理并測定,以進樣質量濃度X(ng/mL)為橫坐標、峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線。

    2 結果與分析

    2.1 4種鏈格孢霉毒素總離子流

    在乙腈-水(0.1%甲酸)流動相體系中質量濃度為100 ng/mL的混標溶液(AOH、AME、ALT和TeA混合物)在3 min內達到有效分離且峰型良好。保留時間為0.81和2.3 mim的物質分別為ALT和AME,1.09和1.12 min分別為AOH和TeA。4種鏈格孢霉毒素的總離子流中有3個顯示峰,AOH和TeA聚集在一個峰上,但試驗采用超高效液相色譜質譜連用技術,結合濃度為100 ng/mL標準溶液中4種鏈格孢霉毒素(AOH、AME、ALT和TeA)的MRM定量離子對質譜圖,以離子比為參照確定混合物中組分,并不影響試驗結果,試驗可行。圖1,圖2

    圖1 4種鏈格孢霉毒素的混合標準溶液(100 ng/mL)總離子流
    Fig.1 Total ion current of 4 mycotoxins mixed standard solution(100 ng/mL)

    2.2 方法驗證

    4種鏈格孢霉毒素在2~100 ng/mL范圍內均有良好的線性關系,R2>0.99,平均回收率在70%~95%,相對標準偏差均小于8.9%在S/N=3時,ALT、AME、AOH和TeA的檢出限在5~20 ppb。研究表明,該方法對紅棗樣品的不同含量的4種鏈格孢霉毒素的測定均具有較高的回收率和精密度,滿足檢測要求。表2,表3

    2.3 10株鏈格孢菌菌株中毒素種類及含量

    研究表明,10株菌均可產生TeA,在4種鏈格孢霉毒素中TeA含量最高,其中菌株21-HB含量最高,可達5.39×103mg/kg,hm-16產毒最低,含量為35.9 mg/kg;菌株92-3-1和hm-24產生的毒素種類最多,4種鏈格孢霉毒素均可產生;菌株30-HB-2和36-3-3產生毒素種類最少,僅產生TeA;菌株hm-16、hm-31和hm-35可產生AOH、AME、ALT,產毒范圍分別為5.52~3.82×102mg/kg,1.96~7.16×102mg/kg,0.22~2.53 mg/kg。表3

    注:A.ALT;B.AOH;C.TeA;D.AME

    Notes:A.ALT; B.AOH; C.TeA; D.AME

    圖2 4種鏈格孢霉毒素混合標準溶液在ESI+模式下MRM色譜


    Fig.2 Mutiple reaction monitoring (MRM) chromatograms of mixed solution

    of 4 mycotoxins standards in ESI+

    表2 4種鏈格孢霉毒素的線性范圍、線性方程、R2、檢出限(LOD)


    Table 2 Linear equations, correlation coefficients, linear ranges, detections limi, recoveries and precisions for the 4Alternariamycotoxins

    基質成分Components線性方程R2線性范圍(ng/mL)檢出限(LOD)回收率Recovery(%)RSD(%)CKAOHAMETeAALTY=402.347X+2014.14Y=240.212X+1292.26Y=889.202X+12622.6Y=125.01X+227.1710.98510.99130.97630.99262~1001020510847688864.54.73.28.9果肉AOHAMETeAALTY=253.954X+2974.11Y=204.011X+1456.73Y=720.905X+4860.95Y=171.612X+7196.060.98510.99490.99060.98912~1001020510707295844.46.55.97.1培養(yǎng)基AOHAMETeAALTY=253.371X+1116.79Y=191.023X+1620.98Y=728.674X+20711Y=192.937X+302.4590.99790.9980.94840.92942~1001020510736987795.25.96.16.3

    表3 DRYES培養(yǎng)基中10株鏈格孢菌產生毒素種類及含量
    Table 3 The species and content of 10Alternariastrains produce mycotoxins in DRYES medium (mg/kg)

    菌號成分CK34T11L30-HB-2hm-35hm-1692-3-1hm-2421-HB36-3-3hm-60hm-31AOH40.13381.5811.895.5212.8955.70AME12.0264.9836.561.96716.10375.42TeA1.751261.5744.06429.935.882396.634647.965389.21537.31724.404943.01ALT2.530.220.52

    2.4 不同病級發(fā)病棗果中4種鏈格孢霉毒素含量

    研究表明,不同發(fā)病程度發(fā)病棗果中4種鏈格孢霉毒素均有檢出。隨著棗果發(fā)病程度增加,鏈格孢霉毒素含量逐漸升高,3級時毒素含量最高;4種毒素中TeA含量最高,最高可達3.1×103mg/kg,AME、AOH、ALT分別可達6.4×102mg/kg,94.5 mg/kg,16.5 mg/kg。且0級果實中也檢測到了4種毒素,但檢出量較低,可能是運輸儲藏過程中健康棗果受到病果污染所致。表4

    表4 不同病級發(fā)病棗果中4種鏈格孢霉毒素含量
    Table 4 The content of 4Alternariamycotoxins in effected jujube fruit (mg/kg)

    病級TeAAOHAMEALT030.910.040.620.031126.970.401.790.182524.9977.22638.643.3333102.2794.51995.3816.484186.463.092.131.68

    2.5 人工接種棗果后4種鏈格孢霉毒素含量

    研究表明,10株菌人工接種健康棗果后,無傷、有傷棗果內均產生大量鏈格孢霉毒素,其中TeA含量最高,4種毒素含量范圍分別為4.6~2.1×103mg/kg,4.7~1.4×103mg/kg,1.2~122 mg/kg,0.09~5.08 mg/kg。用菌株hm-24接種的產毒量最高,TeA為2 102.90 mg/kg,AME為1 390.86 mg/kg;hm-16產毒量最低,TeA僅為5.40 mg/kg;34T11L、hm-35、hm-24、hm-604個菌株接種后可產生4種鏈格孢霉毒素;30-HB-2、92-3-1、21-HB、和36-3-3接種后在紅棗果肉中僅檢測出了TeA。且CK果肉中也檢測到TeA,可能是樣品在運輸儲藏的過程中健康棗果受到病果污染。表5

    表5 棗果接種后4種鏈格孢霉毒素含量測定
    Fig.5 The content of four Alternaria mycotoxins after inoculated withA.alternateon Jujube fruit (mg/kg)

    成分菌號TeAAOHAMEALTCK-+1.202.8034T11L-+4.6046.407.1032.000.391.2230-HB-2-+16.1041.50hm-35-+54.00429.904.7030.100.09hm-16-+4.505.401.20122.20249.1892-3-1-+5.6070.40hm-24-+17.002102.900.4999.101390.860.685.0821-HB-+6.60151.7036-3-3-+6.2071.10hm-60-+11.8012.207.2922.021.19hm-31-+10.601455.402.90

    注:空白表示未檢測到毒素

    Note:Blank said undetectedAlternaria Mycotoxins

    3 討 論

    鏈格孢菌種類繁多,適應性強,寄主范圍廣,95%以上的種能兼性寄生于植物上,可引起多種植物尤其是糧食作物、蔬菜、水果等農作物和經濟作物病害。A.tenuissima、A.alternata、Alternariasp、A.triticina等可侵染引起小麥葉斑病等[24],A.arborescens、A.tenuissima、A.mali、A.alternata/A.longipes等[25]多種鏈格孢菌可引起蘋果葉斑病和果斑病。A.tenuissima侵染引起的小麥黑胚病(Black point of wheat)是一種世界性籽粒病害,在中國、美國、墨西哥、加拿大、印度、英國、前蘇聯(lián)、秘魯等國均有發(fā)生[26,27]。A.alternata侵染引起的梨黑斑病(裂果病)是梨的三大病害之一,是梨樹上廣泛發(fā)生的世界性病害,尤其在亞洲的日本、韓國和中國發(fā)病十分嚴重[28]。梨黑斑病主要侵染葉片,造成大量落葉;有時也可危害果實和新梢,能造成較大的經濟損失,發(fā)生嚴重時可使梨采后損失達50%以上[29]。2004 年我國鴨梨曾因黑斑病被停止出口美國和加拿大[30]。史文景[31]、程月萌等[32]測定了蘋果、桃和梨中鏈格孢霉毒素,檢測結果表明,蘋果中檢測到AOH和AME,含量分別為49和30 μg/kg。Birgitte等[33]運用超高液相色譜質譜串聯(lián)技術測定了小麥、番茄、核桃、藍莓中的鏈格孢霉毒素,結果表明均存在AOH、AME、ALXII、ALT、TeA、TEN等毒素。Peter 等[34]測定了谷物中鏈格孢霉毒素,檢測結果表明83份樣品中均檢測到AOH、AME,含量分別為0.34和0.13 ng/g。Miller等[17]對小鼠分別經靜脈注射、腹腔、皮下、口腔單次給TeA鈉鹽的LD50分別為(125±10)、(150±10)、(145±20)、(225±25) mg/kg;AOH和AME對實驗動物的急性毒性較弱,小鼠的LD50>100 mg/kg。鏈格孢霉毒素在全球多種農產品中均已檢測到,對人類和動物健康的潛在危害已不容忽視。

    紅棗種植目前已成為新疆近年來發(fā)展最快、效益最突出和惠民成效最為顯著的一項林果產業(yè)[35,36],然而棗果黑斑病在很多地區(qū)均有發(fā)生。研究以新疆紅棗縮果病和棗果黑斑病病果分離的10株交鏈格孢菌以及不同發(fā)病級數的棗果作為研究對象,10株供試菌株均能產生鏈格孢菌毒素,不同菌株產生的毒素種類以及含量有差異,其中從哈密分離到的hm-24菌株可以產生4種毒素,且產生毒素的量也最高,用其接種健康棗果后也可以在果肉中檢測到4種毒素。不同病級棗果中4種鏈格孢霉毒素均有檢出,TeA、AME、AOH、ALT含量分別為30.9~3.1×103mg/kg,0.6~6.4×102mg/kg,0.3~94.5 mg/kg,0.2~16.5 mg/kg。這與Magnani等[30]蔣黎艷等[31]檢測到鏈格孢霉毒素中TeA含量最高而相一致。其中在健康棗果上也檢測到了微量的TeA毒素,可能是運輸過程中污染所致,也有可能健康果實表面也有鏈格孢菌的污染產生的毒素。

    4 結 論

    鏈格孢菌毒素分布面廣,對人以及哺乳動物均有誘變性、致癌性、基因毒性等多種毒性作用,研究采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法,明確了引起棗縮果病和棗果黑斑病的主要致病菌交鏈格孢菌可以產生TeA、AME、AOH和ALT 4種毒素,毒素含量分別為1.2~2 102.9、22.02~1 390.86、1.2~122.2和0.39~5.08 mg/kg,其中TeA毒素的產生量最高,最高可達2 102.9 mg/kg。用其接種健康棗果5 d后,可在接種部位檢測到大量鏈格孢菌毒素;同時對田間自然條件下采集的不同發(fā)病級數的棗果黑斑病果實進行檢測后也能檢測到4種鏈格孢菌毒素,在健康未發(fā)病的果實上也檢測到了少量鏈格孢菌毒素。因此,安全、有效、及時控制棗果黑斑病已成為新疆紅棗種植過程中的一個影響紅棗食用安全性的關鍵問題,采收時應當將健康果實與病果分開,防止健康果實被病果污染。

    References)

    [1] Logrieco, A., Bottalico, A., Mulé, G., Moretti, A., & Perrone, G. (2003). Epidemiology of toxigenic fungi and their associated mycotoxins for some Mediterranean crops.EuropeanJournalofPlantPathology, 109(7): 645-667.

    [2] Thomma, B. P. H. J. (2003). Alternaria, spp.: from general saprophyte to specific parasite.MolecularPlantPathology, 4(4): 225-236.

    [3] Patriarca, A., Azcarate, M. P., Terminiello, L., & Fernández, P. V. (2007). Mycotoxin production by alternaria strains isolated from argentinean wheat.InternationalJournalofFoodMicrobiology, 119(3): 219-222.

    [4] Janardhanan, K. K., & Husain, A. (1983). Studies on isolation, purification and identification of tenuazonic acid, a phytotoxin produced by alternaria alternata, (fr.) keissler causing leaf blight of datura innoxia, mill.Mycopathologia, 83(3): 135-140.

    [5] Logrieco, A., Moretti, A., & Solfrizzo, M. (2009). Alternaria toxins and plant diseases: an overview of origin, occurrence and risks.WorldMycotoxinJournal, 2(2): 129-140.

    [6] O Ostry, V. (2008). Alternaria mycotoxins: an overview of chemical characterization, producers, toxicity, analysis and occurrence in foodstuffs.WorldMycotoxinJournal, 1(2): 175-188.

    [7] Magnani, R. F., Souza, G. D. D., & Rodrigues-Filho, E. (2007). Analysis of alternariol and alternariol monomethyl ether on flavedo and albedo tissues of tangerines ( citrus reticulata ) with symptoms of alternaria brown spot.JournalofAgricultural&FoodChemistry, 55(13): 4,980-4,986.

    [8] Logrieco, A., Visconti, A., & Bottalico, A. (1990). Mandarin fruit rot caused by alternaria alternata and associated mycotoxins.PlantDisease, 74(6): 415-417.

    [9] Dong, Z. G., Liu, G. T., Dong, Z. M., Qian, Y. Z., An, Y. H., & Miao, J. A., et al. (1987). Induction of mutagenesis and transformation by the extract of alternaria alternata isolated from grains in linxian, china.Carcinogenesis, 8(7): 989-991.

    [10] Liu, G. T., Qian, Y. Z., Zhang, P., Dong, W. H., Qi, Y. M., & Guo, H. T. (1992). Etiological role of alternaria alternata in human esophageal cancer.ChineseMedicalJournal, 105(5): 394-400.

    [11] Lehmann, L., Wagner, J., & Metzler, M. (2006). Estrogenic and clastogenic potential of the mycotoxin alternariol in cultured mammalian cells.Food&ChemicalToxicology, 44(3): 398-408.

    [12] An, Y. H., Zhao, T. Z., Miao, J., Liu, G. T., Zheng, Y. Z., & Xu, Y. M., et al. (1989). Isolation, identification, and mutagenicity of alternariol monomethyl ether.JournalofAgricultural&FoodChemistry, 37(5): 1,341-1,343.

    [13]M Miller, F. A., Rightsel, W. A., Sloan, B. J., Ehrlich, J., French, J. C., & Bartz, Q. R., et al. (1964). Antiviral activity of tenuazonic acid.Nature,200(4913): 1,338-1,339.

    [14] Gitterman, C. O. (1965). Antitumor, cytotoxic, and antibacterial activities of tenuazonic acid and congeneric tetramic acids.JournalofMedicinalChemistry, 8(4): 483-486.

    [15] Lebrun, M. H., Nicolas, L., Boutar, M., Gaudemer, F., Ranomenjanahary, S., & Gaudemer, A. (1988). Relationships between the structure and the phytotoxicity of the fungal toxin tenuazonic acid.Phytochemistry, 27(1): 77-84.

    [16] Shigeura, H. T., & Gordon, C. N. (1963). The biological activity of tenuazonic acid.Biochemistry, 2(2): 1,132-1,137.

    [17]吳春生,馬良,江濤,等.鏈格孢霉毒素細交鏈格孢菌酮酸的研究進展[J].食品科學,2014,35(19): 295-301.

    WU Chun-sheng, MA Liang, JIANG Tao, et al. (2014). A review on tenuazonic acid, a toxic produced byAlternaria[J].FoodScience, 35(19):295-301.(in Chinese)

    [18] Steyn, P. S., & Rabie, C. J. (1976). Characterization of magnesium and calcium tenuazonate from phoma sorghina.Phytochemistry, 15(12): 1,977-1,979.

    [19]董寧,馮宏祖,王蘭,等.南疆駿棗黑斑病癥狀表現(xiàn)及病原菌鑒定[J].植物保護學報,2016,43(6): 922-927.

    DONG Ning, FENG Hong-zu, WANG Lang, et al. (2016). The disease symptom and the pathogen identification of jujube black spot in southern Xinjiang [J].JournalofPlantProtection, 52(7):53-58. (in Chinese)

    [20]向征,鐘聰慧,胡軍,等.新疆棗果黑斑病病原鑒定[J].新疆農業(yè)科學,2013,50(5): 845-850.

    XIANG Zheng, ZHONG Cong-hui, HU Jun, et al. (2013). Identification of Jujube black spot pathogens in Xinjiang, China [J].XinjiangAgriculturalSciences, 50(5):845-850. (in Chinese)

    [21]馬榮,劉曉琳,梁英梅,等. 棗果黑斑病發(fā)生相關因素分析及田間藥效試驗[J]. 中國農學通報,2015,(16): 182-189.

    MA Rong, LIU Xiao-lin, LIANG Ying-mei, et al. (2015). Analysis of the influencing factors on disease occurrence of Jujube black pot and field efficacy Test [J].ChineseAgriculturalScienceBulletin, (16):182-189. (in Chinese)

    [22] Andersen, B., Hansen, M. E., & Smedsgaard, J. (2005). Automated and unbiased image analyses as tools in phenotypic classification of small-spored alternaria spp.Phytopathology, 95(9): 1,021-1,029.

    [23]方中達.植病研究方法[M].第三版. 北京:中國農業(yè)出版社,1998.

    FANG Zhong-da. (1998).Methodofplantpathologyresearch[M]. Third Edition. Beijing: China Agriculture Press, 1998.(in Chinese)

    [24] Zhao, K., Shao, B., Yang, D., Li, F., & Zhu, J. (2015). Natural occurrence of alternaria toxins in wheat-based products and their dietary exposure in China.PLOSOne. 10(6), e0132019.

    [25] Harteveld, D. O. C., Akinsanmi, O. A., & Drenth, A. (2013). Multiple alternaria, species groups are associated with leaf blotch and fruit spot diseases of apple in australia.PlantPathology, 62(2): 289-297.

    [26] Machacek, J. E., & Greaney, F. J. (2011). The "black-point" or "kernel smudge" disease of cereals.CanadianJournalofResearch, (16): 84-113.

    [27]Y B Kang, Y J Zhang , H J Li , et al. (1999). State of the field of wheat on black point disease (in Chinese) [J].TriticalCrops, 19(2): 58- 60. (in Chinese)

    [28]楊曉平,胡紅菊,王友平,等. 梨黑斑病病原菌的生物學特性及其致病性觀察[J].華中農業(yè)大學學報,2009,(12):680-684.

    YANG Xiao-ping, HU Hong-ju, WANG You-ping, et al. (2009). Biological characteristics and pathogencity of pear black spot byAlternariaalternate(Fr.) Keissl [J].JournalofHuazhongAgriculturalUniversity, (12):680-684. (in Chinese)

    [29]謝莉,張鐸,張麗萍,等. 拮抗梨黑斑病菌的鏈霉菌的篩選及鑒定[J].河北師范大學學報(自然科學版),2008,32(4):526-529.

    XIE Li, ZHANG Duo, ZHANG Li-ping, et al. (2008). Isolation and identification of an antagonisticStreptomycesstrain againstAlternariaalternate. [J].JournalofHebeiNormalUniversity(NaturalScienceEd.) , 32(4): 526-529. (in Chinese)

    [30]嚴進,施宗偉,宋福,等. 河北和山東鴨梨果實上鏈格孢菌鑒定[J].植物保護學報,2009,36(1) :37-43.

    YAN Jin, SHI Zong-wei, SONG Fu, et al. (2009). Identification ofAlternariaisolates from Ya-pear fruits in Hebei and Shandong provinces [J].JournalofPlantProtection, 36( 1) :37-43. (in Chinese)

    [31]史文景,趙齊陽,張耀海,等. 超高效液相色譜結合分散液液微萃取同時測定果汁中的7種真菌毒素[C]//. 中國儀器儀表學會分析儀器分會、中國儀器儀表行業(yè)協(xié)會分析儀器分會、中國儀器儀表學會檢驗檢疫儀器應用技術分會第三屆中國食品與農產品質量安全檢測技術國際論壇暨展覽會論文集.北京: 中國北京雄鷹國際展覽有限公司,2014:13-19.

    SHI Wen-jing, ZHAO Qi-yang, ZHANG Yao-hai, et al. (2014).SimultaneousDeterminationofSevenMycotoxinsinFruitJuicebyUltraPerformanceLiquidchromatographyCombinedwithModifiedDispersiveLiquid-LiquidMicroextraction[C]//. China Instrument Society Analysis Instrument Branch, China Instrument Industry Association Analysis Instrument Branch, China Instrument Society inspection and quarantine instrument application technology branch. The third Chinese food and agricultural products quality and safety testing technology international forum and Exhibition proceedings. Beijing, Beijing Lanneret International Exhibition Co, Ltd. : 13-19. (in Chinese)

    [32]陳月萌,李建華,張靜,等. 高效液相色譜-熒光檢測法同時測定水果中的3種鏈格孢霉毒素[J]. 分析試驗室,2012,(6):70-73.

    CHEN Yue-meng, LI Jian-hua, ZHANF Jing, et al. (2016). Simultaneous determination of threeAlternariasin fruits by HPLC with fluorescence detection [J].ChineseJournalofAnalysisLaboratory, (6):70-73. (in Chinese)

    [33] Andersen, B., Nielsen, K. F., Pinto, V. F., & Patriarca, A. (2015). Characterization of alternaria, strains from argentinean blueberry, tomato, walnut and wheat.InternationalJournalofFoodMicrobiology: (196): 1-10.

    [34] Scott, P. M., Zhao, W., Feng, S., & Lau, P. Y. (2012). Alternaria, toxins alternariol and alternariol monomethyl ether in grain foods in canada.MycotoxinResearch, 28(4):261-266.

    [35]張棟海,李克福,趙思峰.新疆南疆矮化密植棗園三種紅棗病害發(fā)生規(guī)律及其影響因素研究[J].北方園藝,2015,(3):105-108.

    ZHANG Dong-hai, LI Ke-fu, ZHAO Si-feng. (2015). Study on law and its influence factors of three main jujube disease in south xinjiang under dwarf and close-planting managements [J].NorthernHorticulture, (3):105-108. (in Chinese)

    [36]趙燕,郭慶元,王洪凱,等.新疆紅棗病害種類及田間發(fā)生[J].新疆農業(yè)科學, 2015,52(3):511-516,589.

    ZHAO Yan, GUO Qin-yuan, WANG Hong-kai, et al. (2015). Investigation of Chinese jujube diseases and their field occurrence in Xinjiang [J],XinjiangAgriculturalSciences, 52(3):511-516,589. (in Chinese)

    [37]王志霞,孫潔,趙思峰,等.新疆矮化密植棗園紅棗葉斑病病原鑒定[J].中國森林病蟲,2013,32(4):1-5.

    WANG Zhi-xia, SUN Jie, ZHAO Si-feng, et al. (2013). Identification of the pathogenic fungus causing leaf spot ofZizyphusjujubein dwarf and close-planting orchards in Xinjiang [J].ForestPestandDisease, 32(4):1-5. (in Chinese)

    [38]蔣黎艷,趙其陽,龔蕾,等.超高效液相色譜串聯(lián)質譜法快速檢測柑橘中的5種鏈格孢霉毒素[J].分析化學,2015,(12): 1 851-1 858.

    JIANG Li-yan, ZHAO Qi-yang, GONG Lei, et al. (2015). Rapid Determination of fiveAlternariaMycotoxins in citrus by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry [J].AnalyticalChemistry, (12):1,851-1,858. (in Chinese)

    Mycotoxin Analysis of Main PathogenAlternariaalternateof Jujube Fruit Shrink and Determination of Black Spot Disease Toxin Content in Xinjiang

    HE Li,GUO Kai-fa,Ainiguli Yiming,ZHAO Si-feng

    (KeyLaboratoryforOasisAgriculturalPestManagementandPlantResourceUtilizationatUniversitiesofXinjiangUygurAutonomousRegion/CollegeofAgronomy,ShiheziUniversity,ShiheziXinjiang832003,China)

    【Objective】 In order to make clear mycotoxins species and content of mainly pathogenAlternariaalternateof jujube fruit shrink, jujube black spot, and mycotoxins species and content of jujube black spot diseased fruits, this study aims to provide the basis for the safety evaluation of jujube processing and consumption in Xinjiang.【Method】Utra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was established as the method to determine the variation and content of mycotoxins from 10Alternariastrains and the onset fruit of jujube black spot in different severities and the species and content of toxin in artificially inoculated fruits.【Result】The results showed that 10Alternariastrains could produce 4 kinds ofAlternariamycotoxins: alternariol (AOH), alternariol monomethylether (AME), altenuene(ALT) and tenuazonic acid (TeA).TeA, ALT, AME and AOH were detected in different disease onset of jujube fruit which were affected byA.alternateand artificial cultivation conditions, the highest content of TeA, range of 3.1×103-5.5×103mg/kg; AME, AOH and ALT were 7.2×102-6.4×102mg/kg, 1.2-3.8×102mg/kg and 0.09-5.08 mg/kg. After inoculation withA.alternaria, alarge number of TeA were not only detected injuring jujube fruit, but also detected in the uninjured jujube fruit. Not only the toxin was detected in the onset jujube fruit, but also a large amount of toxin was found in the jujube without injury, although there was a small amount ofAlternariatoxin in healthy jujube fruit.【Conclusion】The main pathogens (Alternariaalternate) leading to jujube fruit shrink and jujube black spot in Xinjiangcan produce a lot ofAlternariamycotoxins, which have such great influence on the production and value of Xinjiang red jujube that it was inedible. Therefore, it should be paid more attention to in fresh jujube processing and risk assessment, and to reduce the infection of pathogens in jujube planting and storage, so as to avoid more pollution. So in jujube planting and storage period, the pathogen infection must be reduced in order to avoid more contamination.

    jujube; short ultivars; growth stages; major gene plus polygene inheritance; genetic analysis

    ZHAO Si-feng (1975- ), male, native place: Bazhong Sichuan. Professor, PhD. research field: Biological control of plant pest. (E-mail)Zhsf_agr@shzu.edu.cn

    10.6048/j.issn.1001-4330.2017.06.014

    2017-03-09

    國家星火計劃“南疆紅棗主要病蟲害綠色防控技術示范與推廣”(2015GA891007)

    何麗(1991-),女,四川南充人,碩士研究生,研究方向為植物病理學,(E-mail)602157044@qq.com

    趙思峰(1975-),男,教授,博士,博士生導師,研究方向為植物病蟲害生物防治,(E-mail)zhsf_agr@shzu.edu.cn

    S432.4+2

    A

    1001-4330(2017)06-1076-09

    Supported by: The National Spark Program of China "Demonstration and Popularization of Green Prevention and Control Technology for Main Diseases and Pests of Jujube in Southern Xinjiang"(2015GA891007)

    猜你喜歡
    孢霉鏈格棗果
    不同時期施用不同肥料提高山地棗果維生素C 含量
    被孢霉對土壤養(yǎng)分有效性和秸稈降解的影響*
    土壤學報(2022年1期)2022-03-08 08:52:56
    “二月蘭葉斑病菌甘藍鏈格孢生物學特性觀察實驗”的教學設計
    甘肅教育(2021年10期)2021-11-02 06:14:26
    16個棗樹品種棗果營養(yǎng)成分分析
    食用菌工廠化生產防治鏈孢霉技術探究
    食用菌(2019年4期)2019-08-27 06:34:58
    中國月季上兩株鏈格孢屬真菌的分離鑒定及TeA毒素的測定
    歐盟評估鏈格孢霉毒素在不同人群中的膳食暴露風險
    桃色頂孢霉代謝產物對綠豆白粉病的防治作用
    西藏砂生槐莖內鏈格孢屬真菌生物學特性研究
    西藏卷葉黃精莖內鏈格孢屬真菌生物學特性研究
    西藏科技(2015年9期)2015-09-26 12:15:34
    国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美日韩视频精品一区| 日本黄色日本黄色录像| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲四区av| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品久久久久成人av| 香蕉精品网在线| 青春草视频在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品成人在线| 各种免费的搞黄视频| 精品少妇久久久久久888优播| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩一区二区三区影片| videos熟女内射| 不卡视频在线观看欧美| 国产高潮美女av| 精品国产乱码久久久久久小说| 日日撸夜夜添| 天堂8中文在线网| 国产av国产精品国产| 久久久久精品性色| 超碰97精品在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩欧美一区视频在线观看 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| av免费在线看不卡| 精品一区二区三区视频在线| 少妇的逼水好多| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲国产欧美人成| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 青春草视频在线免费观看| 身体一侧抽搐| 少妇的逼好多水| 在现免费观看毛片| 另类亚洲欧美激情| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 大片电影免费在线观看免费| 免费在线观看成人毛片| 日韩国内少妇激情av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美成人a在线观看| 内地一区二区视频在线| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产美女午夜福利| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99热国产这里只有精品6| 一区二区av电影网| 91精品伊人久久大香线蕉| 高清毛片免费看| 国产黄片美女视频| 黑人高潮一二区| 美女cb高潮喷水在线观看| av在线app专区| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av福利一区| 毛片女人毛片| 18+在线观看网站| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 日日啪夜夜爽| 在线天堂最新版资源| 国产精品一及| a 毛片基地| 久久久精品免费免费高清| 午夜日本视频在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 超碰97精品在线观看| 日韩国内少妇激情av| 99热国产这里只有精品6| 欧美成人a在线观看| 伊人久久国产一区二区| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久国产一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 少妇的逼水好多| 在线观看免费日韩欧美大片 | 97超视频在线观看视频| 久久精品夜色国产| 九草在线视频观看| 一本色道久久久久久精品综合| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 大话2 男鬼变身卡| 成人漫画全彩无遮挡| 免费看av在线观看网站| 老司机影院毛片| 一级毛片 在线播放| 亚洲四区av| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费大片18禁| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费观看在线日韩| 搡老乐熟女国产| 欧美3d第一页| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久久色成人| 国产成人午夜福利电影在线观看| 美女主播在线视频| 亚洲四区av| 久久久精品免费免费高清| 国产黄频视频在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 在线观看人妻少妇| 男人舔奶头视频| 观看美女的网站| 国产91av在线免费观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产男女内射视频| 妹子高潮喷水视频| 国产精品一区二区在线观看99| av国产免费在线观看| 美女内射精品一级片tv| 成人一区二区视频在线观看| av播播在线观看一区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 欧美一区二区亚洲| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美区成人在线视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品一区www在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产一区二区在线观看日韩| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 青春草视频在线免费观看| 日本与韩国留学比较| 久久97久久精品| 成年av动漫网址| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 乱系列少妇在线播放| 麻豆成人av视频| 少妇人妻 视频| 免费观看的影片在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲天堂av无毛| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲三级黄色毛片| 美女主播在线视频| 欧美精品亚洲一区二区| 黄色日韩在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 一级av片app| 波野结衣二区三区在线| 中国国产av一级| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产高潮美女av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 18禁动态无遮挡网站| 免费观看av网站的网址| 久久97久久精品| 国产日韩欧美在线精品| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲国产色片| 亚洲经典国产精华液单| 久久ye,这里只有精品| 九九爱精品视频在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 中文字幕免费在线视频6| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久6这里有精品| 精品亚洲成国产av| 亚洲天堂av无毛| 日本欧美国产在线视频| 国产毛片在线视频| www.色视频.com| 最近2019中文字幕mv第一页| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一级片'在线观看视频| 少妇熟女欧美另类| 永久网站在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日本av手机在线免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 这个男人来自地球电影免费观看 | 成年人午夜在线观看视频| a级毛色黄片| 国产精品国产av在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲欧洲日产国产| 国产v大片淫在线免费观看| 九九在线视频观看精品| 久久97久久精品| 精品视频人人做人人爽| 久久久成人免费电影| 少妇人妻精品综合一区二区| 高清午夜精品一区二区三区| 一二三四中文在线观看免费高清| 日韩一区二区视频免费看| 五月伊人婷婷丁香| 午夜激情福利司机影院| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品久久久久久久久免| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久影院123| 又爽又黄a免费视频| 午夜日本视频在线| 男人爽女人下面视频在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美国产精品一级二级三级 | 黄色一级大片看看| 激情 狠狠 欧美| 国产 一区 欧美 日韩| 日本与韩国留学比较| 国内精品宾馆在线| 黑丝袜美女国产一区| 欧美性感艳星| 国产在线男女| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品亚洲成a人片在线观看 | 中文字幕免费在线视频6| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91精品国产国语对白视频| 久久这里有精品视频免费| 久久99热这里只有精品18| 免费在线观看成人毛片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲最大成人中文| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费少妇av软件| 一区在线观看完整版| 精品一区二区三区视频在线| 免费av不卡在线播放| 久久综合国产亚洲精品| 国产午夜精品一二区理论片| 国产亚洲欧美精品永久| 伊人久久国产一区二区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 51国产日韩欧美| 久久国产精品大桥未久av | 久久精品国产亚洲网站| av网站免费在线观看视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久久久久久久成人| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品亚洲成国产av| 国产成人91sexporn| 色视频www国产| 国产免费一级a男人的天堂| 91精品国产国语对白视频| 日韩成人伦理影院| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产色爽女视频免费观看| 五月伊人婷婷丁香| 免费看日本二区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 午夜福利视频精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 我要看日韩黄色一级片| 午夜视频国产福利| 免费观看的影片在线观看| 日韩成人伦理影院| 成人特级av手机在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲欧美日韩无卡精品| 99热全是精品| 91久久精品电影网| 久久久久网色| 日本-黄色视频高清免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产日韩欧美在线精品| 各种免费的搞黄视频| 亚洲不卡免费看| 国产黄频视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 国产免费一级a男人的天堂| 能在线免费看毛片的网站| 国产成人精品福利久久| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产精品免费大片| 成年女人在线观看亚洲视频| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产成人精品婷婷| 国产色婷婷99| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 免费高清在线观看视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| www.av在线官网国产| 国产精品女同一区二区软件| 国产伦理片在线播放av一区| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 精品久久国产蜜桃| 成年女人在线观看亚洲视频| 精品久久国产蜜桃| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av.av天堂| 下体分泌物呈黄色| 免费少妇av软件| 51国产日韩欧美| 亚洲三级黄色毛片| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久人人爽人人片av| 亚洲国产精品999| 中文天堂在线官网| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品蜜桃在线观看| 全区人妻精品视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产黄片视频在线免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 久久女婷五月综合色啪小说| 在线观看三级黄色| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 中文字幕久久专区| 男女边摸边吃奶| 中国国产av一级| 欧美日韩亚洲高清精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日本vs欧美在线观看视频 | 日本一二三区视频观看| 免费看日本二区| 97热精品久久久久久| 日日啪夜夜爽| 亚洲精品,欧美精品| 一区二区三区免费毛片| 精品亚洲成a人片在线观看 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 在线观看国产h片| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产毛片在线视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品,欧美精品| 日本一二三区视频观看| 尾随美女入室| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 观看美女的网站| 精品亚洲成a人片在线观看 | 伦理电影免费视频| 亚洲图色成人| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产免费一区二区三区四区乱码| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| av国产精品久久久久影院| av专区在线播放| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲美女视频黄频| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久成人免费电影| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲欧美日韩东京热| 高清日韩中文字幕在线| 免费黄色在线免费观看| 久久久精品免费免费高清| 制服丝袜香蕉在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 97超碰精品成人国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 观看美女的网站| 久久久久久久国产电影| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产在线免费精品| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| av不卡在线播放| 另类亚洲欧美激情| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 免费黄频网站在线观看国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久性生活片| 亚洲电影在线观看av| av国产精品久久久久影院| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久99热这里只有精品18| 久久精品国产亚洲网站| 色网站视频免费| 丰满乱子伦码专区| 国产精品久久久久久精品古装| 色5月婷婷丁香| 欧美日韩视频精品一区| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲经典国产精华液单| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久色成人| 久久女婷五月综合色啪小说| 超碰av人人做人人爽久久| 日本欧美视频一区| 日韩伦理黄色片| 秋霞在线观看毛片| 高清黄色对白视频在线免费看 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品不卡视频一区二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产深夜福利视频在线观看| 一区在线观看完整版| 国产乱来视频区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲成人手机| 国产精品一区二区性色av| 最近2019中文字幕mv第一页| 一区在线观看完整版| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 亚洲三级黄色毛片| 深爱激情五月婷婷| 国产精品一区二区在线观看99| 97热精品久久久久久| 观看av在线不卡| 免费看日本二区| 视频区图区小说| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲内射少妇av| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品久久久久久av不卡| 免费观看在线日韩| 99热全是精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美高清性xxxxhd video| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲第一av免费看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久久久久久久免费av| 女性被躁到高潮视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久性生活片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 舔av片在线| 大香蕉久久网| 99久久精品国产国产毛片| 男的添女的下面高潮视频| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产av新网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人影院久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲精品国产成人久久av| av视频免费观看在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 九九爱精品视频在线观看| 少妇丰满av| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美xxⅹ黑人| 在线观看免费高清a一片| 亚洲国产精品999| 日韩av免费高清视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本黄大片高清| 18禁在线播放成人免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲精品色激情综合| 国产大屁股一区二区在线视频| av国产免费在线观看| 亚洲av综合色区一区| 久久99精品国语久久久| 国产 精品1| av网站免费在线观看视频| av女优亚洲男人天堂| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩亚洲欧美综合| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 97热精品久久久久久| 久久国产精品大桥未久av | 最后的刺客免费高清国语| 久久久久久久久久人人人人人人| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 内射极品少妇av片p| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产精品国产av在线观看| 久久 成人 亚洲| 成人毛片60女人毛片免费| 国产精品伦人一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲久久久国产精品| videossex国产| 男人舔奶头视频| 九九爱精品视频在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 日本-黄色视频高清免费观看| 乱系列少妇在线播放| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品视频人人做人人爽| 免费观看无遮挡的男女| av网站免费在线观看视频| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品免费大片| 色综合色国产| 国产精品嫩草影院av在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产精品一区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| av播播在线观看一区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 精品久久国产蜜桃| 久久久久久久久久久免费av| 久久精品夜色国产| 亚洲综合色惰| 尾随美女入室| 大香蕉97超碰在线| 久久99精品国语久久久| 老熟女久久久| 九色成人免费人妻av| 欧美高清成人免费视频www| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲第一区二区三区不卡| 99热全是精品| 日本wwww免费看| 日韩一区二区视频免费看| 久久久久久久精品精品| 日本免费在线观看一区| 在线免费观看不下载黄p国产| av播播在线观看一区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 国产精品99久久久久久久久| 大片免费播放器 马上看| 日韩欧美 国产精品| 美女高潮的动态| 久久久久久伊人网av| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲av二区三区四区| 国产精品熟女久久久久浪| 只有这里有精品99| 久久精品国产亚洲av天美| 高清av免费在线| 国产成人freesex在线| 久久国内精品自在自线图片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久久久久人妻| 亚洲精品色激情综合| 日韩成人伦理影院| 午夜老司机福利剧场| 日韩一本色道免费dvd| 中文字幕免费在线视频6| 大片电影免费在线观看免费| 国产探花极品一区二区| 国产精品久久久久成人av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 直男gayav资源| 一级a做视频免费观看| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲天堂av无毛| 精品久久久噜噜| 色视频在线一区二区三区| 精品酒店卫生间| av国产久精品久网站免费入址| 久久久久久久久久久免费av| 国产黄片视频在线免费观看| 久热这里只有精品99| 在线观看三级黄色| 国产日韩欧美在线精品| 黑人猛操日本美女一级片| 国产日韩欧美亚洲二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久国产乱子免费精品| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 老熟女久久久| 国产精品人妻久久久影院| 在线播放无遮挡| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费av不卡在线播放| 毛片女人毛片| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产亚洲一区二区精品| 日韩中字成人| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲图色成人| 2018国产大陆天天弄谢| 内射极品少妇av片p| 一级毛片我不卡| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲不卡免费看|