花葉艷山姜組織培養(yǎng)技術(shù)研究

吳華青++周波濤++駱雪蓮++柯沛強(qiáng)

摘 要 以花葉艷山姜吸芽為外植體，對(duì)叢生芽誘導(dǎo)及增殖、生根培養(yǎng)及移栽等環(huán)節(jié)開(kāi)展研究。結(jié)果表明：最佳叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.5 mg/L；叢生芽增殖培養(yǎng)基3/2 MS+6-BA 1.5 mg/L，室溫度23-25 ℃最有利于增殖苗生長(zhǎng)，自然光增殖苗生長(zhǎng)良好； MS+NAA 1.0 mg/L可使生根苗生長(zhǎng)健壯；泥炭土：珍珠巖（V：V）=8：2有利于生根苗移栽。

關(guān)鍵詞 花葉艷山姜 ；組織培養(yǎng) ；增殖 ；育苗

中圖分類(lèi)號(hào) R284.2

Technical Study on Tissue Culture of Alpinia zerumbet cv. Variegata

WU Huaqing1） ZHOU Botao2） LUO Xuelian1） KE Peiqiang1）

（1 Maoming Forestry Science Research Institute， Maoming， Guangdong 525000；

2 Forestry Bureau of Jianghua County， Jianghua， Hunan 425500）

Abstract This paper studied the induction and proliferation of tubules， roots culture and transplanting. The results show that the best bud induction medium was MS+6-BA 3.5 mg/L； buds medium 3/2 MS+6-BA 1.5 mg/L， room temperature of 23-25 ℃ is most conducive to the proliferation of seedling growth， seedling growth and proliferation of natural light and good； MS+NAA 1.0 mg/L can make the rooting seedling robust growth； peat soil： perlite （V：V） =8：2 for rooting plantlets.

Key words Alpinia zerumbet cv. Variegata ； tissue culture ； proliferation ； seedling

花葉艷山姜（Alpinia zerumbet cv. variegata）為姜科植物艷山姜的園藝栽培種，適應(yīng)性廣泛，在華南及西南均可栽培?；ㄈ~艷山姜株型挺拔、花葉俱美，具備較高的觀賞價(jià)值，被廣泛應(yīng)用于小區(qū)綠化、景觀配置，亦可作為室內(nèi)觀葉盆栽，其種苗市場(chǎng)容量大且價(jià)格穩(wěn)定。花葉艷山姜常規(guī)繁殖方法為播種及分株，其種子出苗率低且植株生長(zhǎng)整齊度差；分株繁殖需建立大規(guī)模增殖圃且種苗可控性差。有關(guān)花葉艷山姜組培技術(shù)研究近年來(lái)多見(jiàn)報(bào)道，筆者在前人研究基礎(chǔ)上，開(kāi)展花葉艷山姜穩(wěn)定、高效組培苗的生產(chǎn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

供試花葉艷山姜外植體采自茂名市林業(yè)科學(xué)研究所苗圃，供試肥料普羅丹、殺菌劑多菌靈來(lái)自市面農(nóng)資店，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑愛(ài)多收和組培藥劑購(gòu)自廣州化學(xué)試劑廠。

1.2 方法

1.2.1 外植體的預(yù)處理

外植體采集前25 d，對(duì)植株使用普羅丹（20-20-20）水溶性肥500倍液，外植體采集前15 d使用40 %多菌靈WP800倍液+0.14 %愛(ài)多收SL 1 500倍液澆透植株及基質(zhì)1次，在采集外植體前，植株不再進(jìn)行澆水、噴霧等操作。

1.2.2 外植體采集與處理

使用鋒利刀具將露出地面吸芽沿母株切下，要求吸芽基部帶有1 cm以上塊莖。將吸芽外層葉鞘剝離，并將塊莖修整為規(guī)則的圓柱形，直徑與葉鞘基部一致，高度1 cm左右。在超凈工作臺(tái)內(nèi)使用0.5 %高錳酸鉀溶液浸泡30 min，無(wú)菌水清洗2-3次，再用0.1 %升汞浸泡20 min，用無(wú)菌水清洗外植體3次以上，在消毒和清洗過(guò)程中需持續(xù)搖晃。將消毒完成的外植體縱切，剝離外層葉鞘，并將高錳酸鉀染色部分塊莖全部切除，置于無(wú)激素MS培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)10 d，待剔除污染后，接入單芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基為MS+6-BA 5.0 mg/L，溫度（25±2）℃，自然光培養(yǎng)。

1.2.3 叢生芽誘導(dǎo)

將單芽接入?yún)采空T導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基激素組合：MS+6-BA 1.5、3.5、5.5 mg/L+NAA0、0.2 mg/L，交叉處理，每處理30瓶，重復(fù)3次。觀察培養(yǎng)性狀，培養(yǎng)30 d后每處理隨機(jī)挑選30瓶未污染瓶苗，統(tǒng)計(jì)叢生芽誘導(dǎo)情況。

1.2.4 增殖培養(yǎng)

基本培養(yǎng)基1/2 MS、MS、3/2 MS，分別添加6-A 0.5、1.5、2.5 mg/L。以均勻一致的叢生芽，每瓶接種5個(gè)叢生芽，每處理30瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)30 d后使用同一配方培養(yǎng)基繼代，繼代第3次后，統(tǒng)計(jì)各處理叢生芽增殖情況。以增殖最佳培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，使用光照恒溫培養(yǎng)箱，將溫度調(diào)整至21、23、25、29 ℃。每處理30瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)各處理叢生芽增殖情況。同時(shí)，研究光照對(duì)花葉艷山姜增殖苗形態(tài)及增殖情況，3個(gè)處理組合，以自然光培養(yǎng)、日光燈在8：00-18：00補(bǔ)償光培養(yǎng)、使用單層報(bào)紙遮光培養(yǎng)。

1.2.5 壯苗培養(yǎng)

將增殖苗移至3/2 MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.2 mg/L壯苗培養(yǎng)基，壯苗培養(yǎng)30 d后，切取高度2 cm以上健壯的植株轉(zhuǎn)接生根，剩余回接至壯苗培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)溫度23 ℃，自然光培養(yǎng)。

1.2.6 生根培養(yǎng)

以1/2MS、MS培養(yǎng)基分別添加NAA 0.5、1.0 mg/L，移苗完成后即置于煉苗棚，觀察性狀，培養(yǎng)30 d后測(cè)量根系長(zhǎng)度，統(tǒng)計(jì)根數(shù)，測(cè)量生根苗莖粗及株高。

1.2.7 生根苗移栽

將生根苗洗凈，使用0.1 %高錳酸鉀溶液浸泡10 min，移栽穴盤(pán)內(nèi)，移栽后使用45 %敵克松WP 600倍，澆透基質(zhì)，基質(zhì)配比設(shè)置3個(gè)處理，分別為100 %泥炭土、泥炭土80 %+珍珠巖20 %（V：V）、泥炭土60 %+珍珠巖40 %；以最佳基質(zhì)配比為基礎(chǔ)，分別使用128孔穴盤(pán)、105孔穴盤(pán)、72孔穴盤(pán)、50孔穴盤(pán)，觀察其生長(zhǎng)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)叢生芽誘導(dǎo)的影響

花葉艷山姜叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中，不同培養(yǎng)基在誘導(dǎo)率、叢生芽數(shù)量及質(zhì)量存在一定的差別，以MS+6-BA 3.5 mg/L組合最佳，具體見(jiàn)表1。

由表1可知，加入NAA 0.2 mg/L可誘發(fā)叢生芽生根，但根系的存在不利于轉(zhuǎn)接操作。6-BA濃度在3.5 mg/L時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率最高，且單芽整齊健壯、形態(tài)和顏色均正常；6-BA濃度為5.5 mg/L時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率較高，但叢生芽形態(tài)不正常，說(shuō)明在6-BA水平下，不利于叢生芽生長(zhǎng)；6-BA濃度在1.5 mg/L時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率最低。綜上所述，MS+6-BA 3.5 mg/L適于花葉艷山姜叢生芽誘導(dǎo)。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)叢生芽增殖的影響

花葉艷山姜叢生芽增殖過(guò)程中，不同的培養(yǎng)基在增殖倍數(shù)、叢生芽及芽形態(tài)及長(zhǎng)勢(shì)存在一定的差別，以3/2 MS+6-BA 1.5 mg/L組合最佳，具體見(jiàn)表2。

由表2可知，同一培養(yǎng)基中培養(yǎng)3次后，培養(yǎng)基大量元素水平對(duì)叢生芽形態(tài)建成產(chǎn)生了決定性影響，大量元素為3/2時(shí)，增殖苗單芽生長(zhǎng)健壯，葉片濃綠，且單芽葉柄抱莖形成假莖，莖基部明顯膨大；大量元素為MS水平時(shí)，增殖苗可正常生長(zhǎng)，但健壯程度和形態(tài)均不及3/2MS，而大量元素水平為1/2MS時(shí)，出現(xiàn)了養(yǎng)分虧缺癥狀。激素水平隨著6-BA濃度提高，叢生芽增殖倍數(shù)提高，但6-BA濃度為2.5 mg/L時(shí)，叢生芽增殖倍數(shù)最高但叢生芽形態(tài)不正常，說(shuō)明在該6-BA水平下，不利于花葉艷山姜叢生芽生長(zhǎng)。綜合評(píng)價(jià)，3/2MS+6-BA 1.5 mg/L最有利于花葉艷山姜叢生芽繼代增殖。

2.3 培養(yǎng)溫度對(duì)叢生芽增殖的影響

花葉艷山姜叢生芽增殖過(guò)程中，隨著培養(yǎng)溫度增加，叢生芽增殖率出現(xiàn)了先升后降的趨勢(shì)，在23 ℃達(dá)到頂點(diǎn)，次之是25 ℃（圖1）；當(dāng)溫度超過(guò)27 ℃時(shí)，增殖苗出現(xiàn)了生長(zhǎng)障礙，植株葉柄變長(zhǎng)、葉片不發(fā)育且叢生芽顏色變?yōu)榘档狞S綠色。

2.4 不同光照條件對(duì)叢生芽增殖的影響

不同光照條件對(duì)叢生芽增殖倍數(shù)及增殖苗長(zhǎng)勢(shì)均存在影響，自然光條件下，叢生芽生長(zhǎng)良好，適宜增殖，具體見(jiàn)表3。

由表3可知，隨著光照強(qiáng)度減弱，叢生芽增殖倍數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。在補(bǔ)光情況下，部分叢生芽出現(xiàn)了早衰，且葉柄伸長(zhǎng)、葉片尖細(xì)；在培養(yǎng)室補(bǔ)光情況下，燈管所產(chǎn)生的熱量讓培養(yǎng)室溫度難以下降至23-25 ℃；自然光條件下，叢生芽生長(zhǎng)良好，適宜增殖；遮光條件下，叢生芽纖細(xì)且以葉片生長(zhǎng)為主，難以形成健壯假莖。

2.5 不同培養(yǎng)基對(duì)生根培養(yǎng)的影響

花葉艷山姜為易生根物種，所有培養(yǎng)基均可正常發(fā)根，1/2MS基本培養(yǎng)基處理在8-10 d即可生根，MS基本培養(yǎng)基處理12-15 d開(kāi)始生根。生根時(shí)間、根系條數(shù)及長(zhǎng)度、生根苗生長(zhǎng)情況見(jiàn)表4。

由表4可知，以1/2MS基本培養(yǎng)基處理，植株長(zhǎng)勢(shì)偏弱，但根系條數(shù)和根長(zhǎng)均優(yōu)于MS基本培養(yǎng)基處理。以MS基本培養(yǎng)基處理，植株生長(zhǎng)健壯；添加NAA 0.5 mg/L 時(shí)，植株生根困難；添加NAA 1.0 mg/L時(shí)，植株可正常生根，根系短，利于移栽。

2.6 不同基質(zhì)和育苗容器對(duì)生根苗移栽的影響

100 %泥炭土處理，在植株移栽后20-30 d，出現(xiàn)植株腐爛高峰，且后期生長(zhǎng)偏弱，90 d后植株成活率為67.5 %，第一批出圃合格率為39.2 %。泥炭土80 %+珍珠巖20 %（V：V）、泥炭土60 %+珍珠巖40 %處理植株成活率分別為95.6 %和91.3 %，出圃合格率分別為81.4 %和79.8 %。泥炭土60 %+珍珠巖40 %處理植株出圃定植時(shí)出現(xiàn)了基質(zhì)松散的現(xiàn)象。

花葉艷山姜植株株型較大，以128和105孔穴盤(pán)移栽，植株封行快，但后期生長(zhǎng)纖細(xì)，不便于補(bǔ)苗和出圃分級(jí)；72孔穴盤(pán)和孔徑大于該規(guī)格穴盤(pán)，可保證植株正常生長(zhǎng)。

3 討論

通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，花葉艷山姜叢生芽誘導(dǎo)和增殖階段，NAA為非必要激素，NAA存在情況下，對(duì)叢生芽形態(tài)建成無(wú)促進(jìn)作用；適宜于花葉艷山姜叢生芽增殖的基本培養(yǎng)基為3/2MS，增殖苗單芽生長(zhǎng)健壯，葉片濃綠，且單芽葉柄抱莖，形成假莖，莖基部明顯膨大，優(yōu)于MS基本培養(yǎng)基處理。與倪艷妹[1]、趙秀芳[2]等研究結(jié)果不一致，原因可能是種苗差異導(dǎo)致。

花葉艷山姜生根基本培養(yǎng)基，呂德任[3]、潘梅[4]、秦麗鳳[5]研究使用1/2MS基本生根培養(yǎng)基可獲得良好的生根效果，本研究采用MS生根基本培養(yǎng)基，該大量元素水平下對(duì)花葉姜生根出現(xiàn)抑制，其發(fā)根時(shí)間延遲，在NAA水平相同情況下，根系條數(shù)及長(zhǎng)度均不及1/2MS基本培養(yǎng)基處理；但以MS為基本培養(yǎng)基處理，植株生長(zhǎng)健壯，延緩出根，抑制根系長(zhǎng)度，同時(shí)為煉苗提供了足夠時(shí)間，植株及根系協(xié)調(diào)性良好，能滿足花葉艷山姜組培工廠化生產(chǎn)的需求，值得應(yīng)用推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 倪艷妹，張 能，黃明超，等.花葉良姜組織培養(yǎng)工廠化育苗技術(shù)研究[J]. 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)，2016，（4）：53-56.

[2] 趙秀芳. 花葉艷山姜組培快繁技術(shù)的研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2004，20（6）：34.

[3] 呂德任，任 勇，潘 梅，等. 花葉艷山姜組培苗不定根誘導(dǎo)研究[J]. 中國(guó)園藝文摘，2015（12）：11-12.

[4] 潘 梅，符瑞侃，土景飛，等. 花葉艷山姜莖尖離體快繁技術(shù)[J]. 熱帶生物學(xué)報(bào)，2012，3（3）：267-269.

[5] 秦麗鳳，文清嵐，宋西娟. 花葉良姜組培生產(chǎn)與栽培管理技術(shù)[J]. 南方園藝，2013，24（5）：51.