BC-6800血細胞分析儀精密度和正確度性能驗證

吳志成，董晶，李進，肖建萍，石孝勇

(1、北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

BC-6800血細胞分析儀精密度和正確度性能驗證

吳志成1，董晶1，李進2，肖建萍2，石孝勇2

(1、北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

目的對深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細胞分析儀精密度和正確度性能進行驗證。方法參照新發(fā)布WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，使用3個水平的BC-6D質(zhì)控品在BC-6800上進行5d 5個分析批的精密度測試，驗證廠家聲明的精密度；挑選20例健康體檢患者標(biāo)本分別在BC-6800上測試后再送至邁瑞標(biāo)準(zhǔn)化實驗室進行參考方法的盲測，對BC-6800的正確度進行驗證。結(jié)果BC-6800上三個水平質(zhì)控品室內(nèi)精密度均低于廠家宣稱值，且均低于CLIA’88指標(biāo)的1/4；BC-6800與參考方法配對t檢驗顯示各參數(shù)結(jié)果均無顯著性差異（P>0.05），且室內(nèi)偏倚值均在預(yù)期偏差零值的99%置信區(qū)間內(nèi)。結(jié)論BC-6800全自動血細胞分析儀的精密度和正確度性能均通過廠家聲明的驗證，符合實驗室高效檢驗對精密度和正確度的要求，可用于臨床血液標(biāo)本的檢測。

血細胞分析儀；精密度；正確度

為保證定量檢測項目的有效性和完整性，確保檢測結(jié)果的質(zhì)量水平，由國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心及多家大型醫(yī)院聯(lián)合起草、由國家衛(wèi)生和計劃生育委員會于2016-07-07發(fā)布了衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》，并計劃于2016-12-15正式實施[1]?，F(xiàn)本實驗室基于此行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，率先對深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC-6800全自動血液細胞分析儀進行精密度和正確度的性能驗證，檢驗其是否符合廠家的性能宣稱以及實驗室高效檢驗[2]的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細胞分析儀、其配套試劑及質(zhì)控品及校準(zhǔn)品。

1.1.2 實驗樣本精密度性能驗證使用高中低三個水平BC-6D質(zhì)控品；正確度性能驗證所用20例標(biāo)本來源于本院健康體檢者，其中男女各10例，年齡21～45歲。采集靜脈血2ml，置于含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）的BD真空采血管中。所有樣本在采血后2h內(nèi)用BC-6800全自動血細胞分析儀完成血常規(guī)檢測，6h內(nèi)完成WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)參考方法的檢測。

1.2 方法根據(jù)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》進行操作。評價參數(shù)包括：白細胞計數(shù)（WBC）、紅細胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、紅細胞平均體積（MCV）、血小板計數(shù)（PLT）。

1.2.1 精密度評價連續(xù)測定5d質(zhì)控品，每天一個分析批，每批三個濃度水平，每一個濃度水平質(zhì)控從冰箱取出后放置15～20min使其恢復(fù)至室溫，然后在BC-6800上重復(fù)測定3次；如果因為質(zhì)量控制程序或操作問題判斷一批為失控，應(yīng)剔除數(shù)據(jù)，并增加執(zhí)行一個分析批。

1.2.2 正確度評價挑選20例健康體檢者的EDTA-K2抗凝靜脈全血標(biāo)本，在4d時間內(nèi)，每天檢測5份樣品，分別使用以下方法進行檢測，試驗設(shè)計遵從盲法原則。

1.2.2.1 邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細胞分析儀檢測取標(biāo)本混勻后，嚴(yán)格按照分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作手冊和實驗室SOP文件在儀器上進行分析，所有標(biāo)本均采用手動模式進行測試；測試完畢后將樣品送至深圳邁瑞公司溯源實驗室，使用參考方法對樣品進行盲測。

1.2.2.2 邁瑞標(biāo)準(zhǔn)化實驗室參考方法檢測WBC/ RBC計數(shù)參考方法：參照ICSH 1994推薦的參考方法[3]，使用單通道、阻抗原理的半自動電子計數(shù)儀（Coulter Z2粒子計數(shù)儀）分別對WBC/RBC進行計數(shù)，通過重疊校準(zhǔn)對結(jié)果進行了校正；PLT計數(shù)參考方法：參照ICSH2001推薦的參考方法[4]，使用CD41-FITC和CD61-FITC標(biāo)記血小板，使用Bricyte E6流式細胞儀檢測PLT/RBC比值，再乘以RBC數(shù)值得到PLT計數(shù)值；HGB檢測參考方法：參照CLSI H15-A3標(biāo)準(zhǔn)[5]，使用氫化高鐵血紅蛋白法對血紅蛋白進行測量；HCT檢測參考方法：參照CLSI H7-A3標(biāo)準(zhǔn)[6]，使用微量壓積離心法測量PCV，沒有修正殘留血漿。

1.3 統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計參照行標(biāo)的要求，使用Excel 2013進行精密度和正確度數(shù)據(jù)整理和計算；使用analyse-it(v4.20)統(tǒng)計軟件進行正確度評價中配對t-檢驗的統(tǒng)計分析，并繪制Bland-Altman偏差散點圖。計量數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度結(jié)果通過三個水平質(zhì)控均值，計算其不同濃度水平處的標(biāo)準(zhǔn)差Sclaim值用于驗證值V的計算。精密度檢測結(jié)果顯示各參數(shù)實驗室內(nèi)不精密度結(jié)果（Sl）小于其計算的驗證值（V），說明實驗室內(nèi)BC-6800儀器通過廠家精密度聲明的驗證。見表1。

2.2 正確度結(jié)果將20例新鮮血樣品分別使用BC-6800及參考方法各檢測2次，計算檢測結(jié)果的平均偏差，并使用analyse-it（v4.20）統(tǒng)計軟件對兩組數(shù)據(jù)進行配對t檢驗分析，計算檢驗統(tǒng)計量t以及P值，統(tǒng)計結(jié)果表明BC-6800與參考方法在檢測外周血WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)時均表現(xiàn)為P＞0.05，故差異無統(tǒng)計學(xué)意義。廠家預(yù)期BC-6800與參考方法之間無明顯偏差，即按零值計算各參數(shù)廠家聲明驗證限（CI99%），結(jié)果表明各參數(shù)實驗室內(nèi)偏倚值均在廠家聲明的驗證限之內(nèi)，說明BC-6800檢測結(jié)果與參考方法結(jié)果一致。具體結(jié)果詳見表2。各參數(shù)Bland-Altman偏差散點圖如圖1所示。

圖1 正確度性能驗證Bland-Altman偏差散點圖

表1 精密度檢測結(jié)果

表2 正確度檢測結(jié)果

3 討論

邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血液細胞分析儀是深圳邁瑞公司2011年推出的一款中高端五分類血液細胞分析儀，可單機使用也可以連接到軌道上形成流水線，極大地提升檢驗效率。該分析儀以含二次鞘流的半導(dǎo)體激光流式細胞術(shù)、鞘流電阻抗檢測法和核酸熒光染色等先進技術(shù)并完美融合了SF-Cube三維算法分析技術(shù)[7]，可對血液中的多種組分進行定量分析，而且同系列儀器還可對體液進行定量檢測[8]，可滿足客戶的多種需求。作為新的血細胞分析儀，在投入臨床使用前對其進行性能驗證十分必要，我們也注意到有部分醫(yī)院對BC-6800有做過較為全面的驗證或研究[9-11]，但較少有比較深入的對精密度及正確度進行驗證。

臨床檢驗定量測定項目有兩項重要的性能特征，一項是精密度，以標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)表示；另一項是正確度，代表的是系統(tǒng)誤差，以偏倚表示。衛(wèi)計委新發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是制定重復(fù)性試驗和方法比對試驗或測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的試驗方案，為臨床實驗室的精密度和正確度性能驗證提供了參考依據(jù)。新的檢測系統(tǒng)在正式用來檢測病人樣品、發(fā)出檢驗報告前，實驗室要對系統(tǒng)的操作分析性能作實驗予以證實，因此當(dāng)已確認的系統(tǒng)進入臨床實驗室時，臨床實驗室首次要做的最基礎(chǔ)的工作就是進行精密度和正確度的性能驗證。通過重復(fù)性試驗方案來評價隨機誤差是否滿足廠商聲明的精密度要求；通過方法比對或測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)試驗方案來評價檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差，即正確度驗證[12]。

國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）和美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）近年來發(fā)布了很多標(biāo)準(zhǔn)或指南用于定量程序的驗證和確認[13]。關(guān)于精密度和正確度的驗證方法，分別在ICSH1994、ICSH2014中有詳細的介紹，在CLSI H26、CLSI EP15、EP05、EP09等標(biāo)準(zhǔn)/指南中也提供了可供參照的方法。本次發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)CLSI EP15-A2中精密度和正確度的評價方法[14]進行制定[15]，用于指導(dǎo)實驗室用戶對選定測量程序的驗證和認定。

該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)提供了一種精密度驗證方案，基于5d 2個以上水平樣品5個分析批的定量檢測數(shù)據(jù)，計算實驗室內(nèi)精密度結(jié)果（標(biāo)準(zhǔn)差SD和/或變異系數(shù)CV%），并將其與廠家聲明的精密度進行對比驗證。本試驗數(shù)據(jù)表明BC-6800全自動血細胞分析儀上不同水平的質(zhì)控品各檢測參數(shù)的室內(nèi)不精密度均小于各參數(shù)廠家精密度聲明及其計算的驗證值，并且三個水平質(zhì)控品的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)的室內(nèi)不精密度CV%均低于美國臨床實驗室管理法規(guī)（CLIA’88）指標(biāo)的1/4，說明本實驗室的BC-6800具備良好的精密度性能。

該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)同時提供了兩種正確度驗證方案，第一種方法為分析具有指定值的參考物質(zhì)，推薦的參考物質(zhì)包括：⑴具有互換性的有證參考物質(zhì)；⑵具有溯源性及互換性的正確度驗證物質(zhì)，并且推薦至少選擇2個濃度水平參考物質(zhì)，在3~5d時間內(nèi)每批進行2次重復(fù)測定，然后計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。由于本實驗室缺乏定值的血細胞分析參考物質(zhì)，因此參考了第二種使用患者樣品的正確度驗證方案進行正確度的性能驗證。行標(biāo)中提到“使用患者樣品的正確度驗證方案中比較方法首選是參考方法”，因此本實驗室聯(lián)合深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司的標(biāo)準(zhǔn)化實驗室，該實驗室于2009年6月獲得中國合格評定國家認可委員會CNAS認可（CNAS L4090），符合ISO/IEC 17025：2005檢測和校準(zhǔn)實驗室能力通用要求（CNAS-CL01《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的認可準(zhǔn)則》）的要求，具備承擔(dān)認可證書所列的校準(zhǔn)服務(wù)能力。由其對選定的新鮮血樣品中的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數(shù)進行參考方法定值。WBC/ RBC分別由Z2粒子計數(shù)儀法進行定值；HGB由氰化高鐵血紅蛋白法進行定值；HCT由微量壓積離心法進行定值；PLT則由流式細胞儀法進行定值[10]。此方法得到的是真正的“偏倚”，代表了深圳邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血細胞分析儀真正的系統(tǒng)誤差，本試驗數(shù)據(jù)說明BC-6800與參考方法之間具有良好的一致性。

綜上所述，BC-6800全自動血細胞分析儀精密度和正確度均通過廠家聲明的驗證，可以用來檢測臨床血液標(biāo)本并發(fā)報告。此外，行標(biāo)中要求在進行患者樣品的正確度驗證時，其濃度水平應(yīng)覆蓋檢測方法的可報告范圍，但是考慮到實際操作的可行性以及參考方法檢測的限制，如高值WBC或高值PLT會干擾HGB檢測等問題，本次試驗主要以健康體檢患者標(biāo)本進行正確度性能驗證，而對于異常計數(shù)值樣本的檢測還有待進一步的探討。

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R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0504-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.016

2016-12-27；

2017-06-01)