高效液相色譜法測(cè)定西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明試驗(yàn)

曹寧陽(yáng)++董嬌++吳迪++王爍++岑琴

摘要：為建立高效液相色譜同時(shí)測(cè)定減肥類(lèi)保健品中非法添加藥物西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的方法，樣品經(jīng)液相色譜分離后采用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間和紫外特征吸收光譜圖作為定性依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明：西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL濃度范圍，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5；樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；西布曲明；麻黃堿；芬氟拉明；標(biāo)準(zhǔn)曲線

中圖分類(lèi)號(hào)：TS218 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2017）05-0052-03

目前，市場(chǎng)上的減肥類(lèi)保健品品種繁多，有些不法商家通過(guò)非法添加酚酞、咖啡因、西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明等化學(xué)藥品來(lái)提高產(chǎn)品功效，對(duì)人體造成極大傷害。針對(duì)減肥類(lèi)功能產(chǎn)品可能添加的化學(xué)藥物，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2006004，2012005以及國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局辦公室文件食藥監(jiān)辦許[2010]114號(hào)附件，上述3個(gè)文件中均規(guī)定采用液質(zhì)法定性檢測(cè)，高相液相色譜法定量檢測(cè)，但批準(zhǔn)件200604中只提到用高效液相法定量檢測(cè)，卻沒(méi)有給出測(cè)定方法。為此，建立高效液相定量分析非法添加藥物西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的方法，且方法驗(yàn)證良好、簡(jiǎn)潔準(zhǔn)確，可作為減肥類(lèi)保健食品中非法添加藥物的定量分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

麻黃堿（批號(hào)171241-201508）、西布曲明（批號(hào)100624-200401）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；芬氟拉明（批號(hào)106265AL）由Dr.Ehrenstorfer提供。乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。減肥保健品由沈陽(yáng)食品檢驗(yàn)所購(gòu)買(mǎi)。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters 2695高效液相色譜儀，配有2998二極管陣列檢測(cè)器；HZF-A500電子天平（福州華志科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250DB超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；H2050R離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 HPLC色譜條件 色譜柱：Thermo Syncronis C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；

柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。梯度條件見(jiàn)表1。

1.3.2 對(duì)照品溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明對(duì)照品5 mg（精確至0.1 mg），置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，并定容至刻度，配置成100 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。分別吸取西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液200.0 μL，400.0 μL，800.0 μL，2.0 mL，4.0 mL，8.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成質(zhì)量濃度分別為2，4，8，20，40，80 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3.3 樣品前處理 取適量樣品（約1 g），置于10 mL容量瓶中，加入約8 mL甲醇超聲提取10 min，放冷至室溫，加入甲醇定容至刻度，混合均勻，經(jīng)過(guò)夜沉淀后取上層溶液適量，高速離心（不小于4 000 r/min），取上清液用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，用高效液相色譜儀分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相的選擇

分別以甲醇-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液，以及乙腈-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液作為流動(dòng)相，用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液優(yōu)化最佳分離條件。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液作為洗脫液，采用表1中的梯度洗脫條件，可使麻黃堿、芬氟拉明和西布曲明保持足夠分離度和良好峰形。同時(shí)，根據(jù)不同化合物的紫外響應(yīng)值，西布曲明采集225 nm的色譜圖，麻黃堿和芬氟拉明采集265 nm的色譜圖，分別見(jiàn)圖1及圖2。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將1.3.2中得到的西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按1.3.1色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，以對(duì)應(yīng)的色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)（y，響應(yīng)值）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，μg/mL）進(jìn)行回歸分析。結(jié)果表明，西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明在各自濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999 5，詳見(jiàn)表2。

2.2.1 檢出限 西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg（信噪比S/N≈3）。

2.2.2 回收率和精密度 取空白樣品6份，每份300 mg，加入各組分標(biāo)樣，按1.3.3進(jìn)行樣品前處理，進(jìn)樣10 μl，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3中的數(shù)據(jù)可知：樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。

2.3 陽(yáng)性樣品驗(yàn)證

對(duì)市售某減肥藥品按照1.3.3進(jìn)行樣品前處理，按照1.3.1色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。在225 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)下，24.016 min出現(xiàn)色譜峰，和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照確定為西布曲明。

3 結(jié)論

樣品經(jīng)液相色譜分離后采用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間和紫外特征吸收光譜圖作為定性的依據(jù)，確定西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢出限分別為20，40，15 μg/mg；在4～80 μg/mL濃度范圍，線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999 5；樣品加標(biāo)回收率大于95%，RSD小于3.4%。陽(yáng)性樣品驗(yàn)證試驗(yàn)表明，方法學(xué)驗(yàn)證良好。

該方法樣品前處理簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可作為減肥類(lèi)保健食品中非法添加藥物的定量分析方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃諾嘉，楊文紅 從減肥類(lèi)保健食品的混亂看保健食品標(biāo)準(zhǔn)化的迫切性與必要性[J].海峽藥學(xué)，2010，22（10）：236-238.

[2] 劉宏喜.減肥類(lèi)保健食品現(xiàn)狀分析[J].科技資訊，2011（11）：246.

[3] 楊路平，王國(guó)玲，焦燕妮.液質(zhì)聯(lián)用快速鑒定減肥類(lèi)保健食品中4種違禁添加藥物[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，23（4）：320-321.

[4] 張翠英，李振國(guó)，劉乃強(qiáng).UPLC-MS/MS法檢測(cè)減肥制劑中非法添加麻黃堿、西布曲明和芬氟拉明[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（8）：1 890-1 891.

[5] 林芳，李濤.UPLC-DAD法快速測(cè)定減肥類(lèi)保健食品中違法添加的8種化學(xué)藥物[J].食品科技，2014，39（7）：318-323.