膿腫分枝桿菌經(jīng)Toll樣受體2介導的JNK/ERK信號通路誘導巨噬細胞表達腫瘤壞死因子α和白細胞介素8

桂靜，王峰，李青，李金莉

深圳市慢性病防治中心病原檢驗科，深圳 518020

·論著·

膿腫分枝桿菌經(jīng)Toll樣受體2介導的JNK/ERK信號通路誘導巨噬細胞表達腫瘤壞死因子α和白細胞介素8

桂靜，王峰，李青，李金莉

深圳市慢性病防治中心病原檢驗科，深圳 518020

為探討膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種經(jīng)Toll樣受體2(Toll-like receptor 2，TLR2)介導的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)誘導THP-1巨噬細胞內(nèi)腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)和白細胞介素8(interleukin 8，IL-8)表達的相關(guān)分子機制，本研究將膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種感染THP-1巨噬細胞，細菌與巨噬細胞最佳感染之比為感染復數(shù)(multiplicity of infection，MOI)=3，用熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)檢測THP-1巨噬細胞感染兩細菌亞種6 h后的胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平，以及分別阻斷TLR2、JNK 和ERK信號蛋白后TNF-α和IL-8 mRNA水平的變化。結(jié)果顯示，膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種作用于THP-1巨噬細胞6 h后，均可誘導細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；分別阻斷TLR2、JNK和ERK信號蛋白，膿腫亞種感染THP-1巨噬細胞后胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA上調(diào)水平出現(xiàn)明顯抑制，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；分別阻斷TLR2和JNK信號蛋白，馬賽亞種感染THP-1巨噬細胞后胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA上調(diào)水平均出現(xiàn)明顯抑制，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而阻斷ERK信號蛋白后，馬賽亞種組僅見IL-8 mRNA水平明顯抑制，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而TNF-α mRNA水平未見明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究提示，膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種均可作用于TLR2，誘導THP-1細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平上調(diào)，膿腫亞種可經(jīng)JNK和ERK信號蛋白誘導TNF-α mRNA上調(diào)，馬賽亞種可經(jīng)JNK信號蛋白誘導TNF-α mRNA上調(diào)；膿腫亞種和馬賽亞種誘導IL-8 mRNA上調(diào)可能與JNK和ERK信號蛋白相關(guān)。

分枝桿菌；Toll樣受體；c-Jun氨基末端激酶；細胞外信號調(diào)節(jié)激酶

膿腫分枝桿菌是快速生長分枝桿菌中毒力最強的病原體。在快速生長分枝桿菌所致肺部疾病中，膿腫分枝桿菌肺部感染占65%～80%，在部分沿海地區(qū)占70%～80%，且感染率呈上升趨勢[1-3]。目前，膿腫分枝桿菌劃分為3個亞種：膿腫亞種(Mycobacteriumabscessussubsp.abscessus, Mabs)、馬賽亞種(Mycobacteriumabscessussubsp.massiliense, Mmass)和bolletii亞種[4]。膿腫亞種和馬賽亞種是近年來從深圳市膿腫分枝桿菌肺部感染病例中分離出的最主要亞種[5]，由于對絕大多數(shù)臨床使用的抗生素耐藥，有效抗生素對其所致肺部感染主要起抑菌作用，導致感染往往遷延多年，成難治之癥[2，6]。機體的免疫力狀況在膿腫分枝桿菌感染的治療和轉(zhuǎn)歸中起關(guān)鍵作用[7]，但膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種對人體所致免疫反應與臨床癥狀及轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系目前仍不清楚。

研究顯示[7-9]，膿腫分枝桿菌可誘導巨噬細胞內(nèi)不同信號轉(zhuǎn)導途徑激活，從而在不同水平影響免疫細胞的激活，阻止膿腫分枝桿菌的體內(nèi)擴散。Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)可經(jīng)絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)途徑激活核因子κB(nuclear factor κB，NF-κB)基因，促進多種炎癥細胞因子〔如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)和白細胞介素8(interleukin 8，IL-8)〕基因表達，調(diào)節(jié)巨噬細胞吞噬體-溶酶體融合反應，致炎性肉芽腫形成[10]。但TLR下游調(diào)節(jié)過程和機制還不清楚。巨噬細胞TLR2被認為與膿腫分枝桿菌誘導的巨噬細胞激活反應相關(guān)[7-10]，本研究將探討膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種誘導THP-1巨噬細胞表達TNF-α和IL-8的作用，分析TLR2和胞質(zhì)MAPK中兩種主要信號蛋白c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)對TNF-α和IL-8表達的調(diào)控作用，了解膿腫亞種與馬賽亞種誘發(fā)的宿主天然免疫反應是否存在差異，為臨床針對不同亞種開發(fā)有效治療方案提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細胞株和菌種

THP-1細胞株購自中國科學院干細胞庫，膿腫分枝桿菌標準菌株ATCC 19977購自美國ATCC菌種保藏中心，膿腫亞種和馬賽亞種由本實驗室分離鑒定及保存[5]。

1.2 主要儀器和試劑

Roche Cobas Z480型實時熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)儀購自羅氏公司，Eppendorf高速低溫離心機購自德國Eppendorf公司，7H9液體培養(yǎng)基干粉、7H10瓊脂干粉和OADC購自美國BD公司，PRMI 1640培養(yǎng)液和胎牛血清購自美國Gibco公司，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)粉劑購自美國Life Technologies公司，佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)粉劑和anti-TLR2 mAb購自英國Abcam公司，RNAiso Plus、PrimeScript?Ⅱ 1st Strand cDNA 合成試劑盒和SYBR Premix Ex TaqTMⅡ購自TaKaRa公司。

1.3 菌株選擇和培養(yǎng)

共11株菌株，包括參考標準菌株ATCC 19977 1株、膿腫亞種臨床株和馬賽亞種臨床株各5株，均接種于7H9 液體培養(yǎng)基(含10% OADC)，37 ℃培養(yǎng)增菌3 d。收集菌株，參照文獻[11]，80 ℃熱滅活30 min，接種于7H10瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)4～5 d，進行菌落計數(shù)，要求99%以上細菌為死菌。

1.4 THP-1巨噬細胞培養(yǎng)、誘導轉(zhuǎn)化和實驗分組

用PRMI 1640+10%胎牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)THP-1細胞，每3 d傳代1次，以密度(2～4)×105個/mL接種，取5×106個/mL進行實驗與傳代。用終濃度100 ng/mL的PMA作用于THP-1細胞48 h后，換無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)2 d，約85% THP-1細胞轉(zhuǎn)化為THP-1巨噬細胞，用于后續(xù)實驗。調(diào)整細菌密度約1×108cfu/mL，細菌與THP-1巨噬細胞之比為感染復數(shù)(multiplicity of infection，MOI)=3，每株菌均單獨感染THP-1巨噬細胞，并分為膿腫亞種組、馬賽亞種組和ATCC 19977組，設LPS(作用濃度為100 ng/mL)組為陽性對照，設生理鹽水(normal saline，NS)組為陰性對照。

1.5 熒光定量PCR檢測THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA的表達

收集細菌感染6 h后的THP-1巨噬細胞，按RNAiso Plus說明書提取總RNA，檢測總RNA濃度，純度要求A260/280為1.8～2.0；反轉(zhuǎn)錄及PCR反應條件分別按PrimeScript?Ⅱ 1st Strand cDNA 合成試劑盒和SYBR Premix Ex TaqTMⅡ說明書進行。用2-△△Ct方法計算RNA相對表達量[12]。TNF-α、IL-8和內(nèi)參基因β-actin mRNA引物參照文獻[13-14]設計，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。引物序列如下：TNF-α-F：5′-AAGCC-TGTAGCCCATGTTGT-3′；TNF-α-R：5′-CAGAT-AGATGGGCTCATACC-3′；IL-8-F：5′-AGACA-TACTCCAAACCTT-3′；IL-8-R：5′-CTCTTCCA-TCAGAAAGCT-3′；β-actin-F：5′-CCAGAGCAA-GAGAGGCATCC-3′；β-actin-R：5′-GTGGTGG-TGAAGCT GTAGCC-3′。

1.6 TLR2、JNK和ERK信號蛋白阻斷實驗

分別選用TLR2阻斷劑anti-TLR2 mAb(終濃度4 μg/mL)阻斷TLR2 1 h，以及JNK阻斷劑SP600125和ERK阻斷劑U0126(終濃度20 μmol/L)預處理巨噬細胞45 min，加入細菌，熒光定量PCR檢測THP-1巨噬細胞在感染細菌6 h后TNF-α和IL-8 mRNA水平，未加阻斷劑組TNF-α和IL-8 mRNA水平參照1.5。

1.7 統(tǒng)計學分析

實驗至少重復3次，采用SPSS 13.0軟件進行t檢驗和單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。用Graphpad Prism 6.0軟件進行統(tǒng)計并作圖。

2 結(jié)果

2.1 不同細菌感染6 h對THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA水平的影響

膿腫亞種、馬賽亞種、ATCC 19977、LPS和NS作用于THP-1巨噬細胞6 h后(圖1)，膿腫亞腫組TNF-α和IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(11.27±2.03)倍和(9.37±0.86)倍，兩細胞因子之間表達差異無統(tǒng)計學意義；馬賽亞種組TNF-α和IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(13.3±2.4)倍和(8.43±2.07)倍，兩細胞因子之間表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；ATCC 19977組TNF-α和IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(11.93±1.86)倍和(8.23±0.59)倍，兩細胞因子之間表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；LPS組TNF-α和IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(16.33±0.87)倍和(10.43±0.61)倍，兩細胞因子之間表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。馬賽亞種組TNF-α mRNA水平上調(diào)略高于膿腫亞種組和ATCC 19977組，但差異無統(tǒng)計學意義；膿腫亞種組、馬賽亞種組和ATCC 19977組IL-8 mRNA上調(diào)水平相似。

圖1 不同細菌對THP-1巨噬細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平的影響

Fig.1 The levels of TNF-α and IL-8 mRNA in THP-1 cells

2.2 阻斷TLR2對THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA水平的影響

阻斷TLR2后，THP-1巨噬細胞中加入膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977，6 h后巨噬細胞內(nèi)TNF-α mRNA水平分別上調(diào)(3.67±1.23)、(5.44±1.52)和(4.39±1.86)倍，明顯低于未加TLR2阻斷劑的各細菌處理組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(2.76±1.37)、(3.06±1.04)和(3.13±0.43)倍，明顯低于未加TLR2阻斷劑的各細菌處理組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(圖2)。

圖2 TLR2阻斷后THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA水平的變化

Fig.2 The levels of TNF-α and IL-8 mRNA in THP-1 cells after administration of anti-TLR2 mAb

2.3 阻斷JNK和ERK信號通路對THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA水平的影響

應用JNK阻斷劑SP600125阻斷JNK蛋白，膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977作用于THP-1巨噬細胞6 h后，膿腫亞種和馬賽亞種組TNF-α mRNA水平分別上調(diào)(6.24±1.07)倍和(6.91±1.09)倍，均低于未加阻斷劑的細菌處理組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；ATCC 19977組TNF-α mRNA水平上調(diào)(4.67±0.66)倍，低于未加阻斷劑的ATCC 19977組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977組IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(2.31±1.22)、(1.38±0.37)和(1.90±0.61)倍，均低于未加阻斷劑的各細菌處理組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(圖3A)。

A：TNF-α mRNA level in THP-1 cells after administration of JNK inhibitor. B：IL-8 mRNA level in THP-1 cells after administration of ERK inhibitor.

圖3 阻斷JNK和ERK信號通路后THP-1巨噬細胞中TNF-α和IL-8 mRNA水平的變化

Fig.3 The levels of TNF-α and IL-8 mRNA in THP-1 cells after administration of JNK and ERK inhibitors

應用ERK阻斷劑U0126，膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977作用于巨噬細胞6 h后，TNF-α mRNA水平分別上調(diào)(6.06±0.48)、(11.17±0.65)和(7.30±2.00)倍；膿腫亞種組和ATCC 19977組TNF-α mRNA水平上調(diào)較未加阻斷劑組顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；馬賽亞種組TNF-α mRNA水平與未加阻斷劑組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。膿腫亞種和ATCC 19977組IL-8 mRNA水平分別上調(diào)(3.69±1.29)和(3.43±1.13)倍，均低于未加阻斷劑組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；馬賽亞種組IL-8 mRNA水平上調(diào)(3.49±1.59)倍，低于未加阻斷劑組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(圖3B)。

3 討論

分枝桿菌與宿主相互作用中被研究最多的病原菌為結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌的不同成分可作用于不同的TLR通路，而TLR可調(diào)節(jié)巨噬細胞吞噬體與溶酶體的融合，其中TLR2具有廣譜配體識別功能，包括分枝桿菌細胞壁組分。TLR下游MAPK通路中不同信號分子可調(diào)節(jié)巨噬細胞的吞噬作用，誘導NF-κB活化，上調(diào)多種免疫反應基因表達，參與T細胞等的激活和增殖[15-16]。針對膿腫分枝桿菌膿腫亞種和馬賽亞種誘導巨噬細胞產(chǎn)生促炎癥細胞因子的精細調(diào)節(jié)研究仍處于探索階段。

鳥分枝桿菌感染健康人的外周血單核細胞，可誘導單核細胞分泌的TNF-α和IL-6升高[11]。從龜分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌細胞壁提取的脂甘露糖可誘導THP-1細胞分泌的TNF-α和IL-8升高[9-10]。本研究表明，膿腫亞種和馬賽亞種感染巨噬細胞6 h后，均可誘導巨噬細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平上調(diào)，以TNF-α mRNA水平上調(diào)最明顯，提示TNF-α是機體抗膿腫亞種和馬賽亞種細胞免疫中的主要效應細胞因子之一；其次為IL-8 mRNA水平上調(diào)，提示兩細菌亞種可誘導機體非特異性免疫產(chǎn)生一定量的IL-8，擴大免疫炎癥反應，與相關(guān)文獻報道相符[9-11]。馬賽亞種組TNF-α mRNA水平上調(diào)作用高于膿腫亞種組和標準菌株ATCC 19977組，但差異無統(tǒng)計學意義，與Kim等[17]報道基本相符。馬賽亞種組IL-8 mRNA水平上調(diào)與膿腫亞種組和ATCC 19977組差異無統(tǒng)計學意義。本研究初步表明，膿腫亞種、馬賽亞種與標準菌株ATCC 19977誘導TNF-α和IL-8 mRNA水平上調(diào)的作用相當。

阻斷TLR2后，膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977組巨噬細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平呈明顯下降趨勢，表明分枝桿菌可經(jīng)TLR2誘導THP-1細胞內(nèi)TNF-α和IL-8的分泌[7-10]。阻斷JNK信號蛋白后，膿腫亞種和馬賽亞種組TNF-α mRNA水平均明顯下降；阻斷ERK信號蛋白后，膿腫亞種組TNF-α mRNA水平明顯下降，而馬賽亞種誘導的TNF-α mRNA水平未見明顯抑制。表明膿腫亞種誘導的TNF-α表達與JNK和ERK信號蛋白相關(guān)，而馬賽亞種誘導的TNF-α表達與JNK信號蛋白相關(guān)，與既往研究報道[11,17]相符。以上結(jié)果顯示，膿腫分枝桿菌膿腫亞種與馬賽亞種在經(jīng)胞質(zhì)MAPK途徑誘導TNF-α表達時有不同的致炎機制。阻斷JNK和ERK信號蛋白后，膿腫亞種、馬賽亞種和ATCC 19977誘導的IL-8 mRNA水平上調(diào)的作用出現(xiàn)明顯抑制，而針對膿腫亞種和馬賽亞種作用于巨噬細胞致IL-8表達的分子信號途徑未見相關(guān)報道，因此仍需進一步檢測細胞因子分泌量和相應信號蛋白磷酸化水平來重復驗證，膿腫亞種和馬賽亞種誘導THP-1細胞內(nèi)IL-8 mRNA水平上調(diào)可能與JNK和ERK信號蛋白相關(guān)。采用3種信號通路阻斷劑后，膿腫亞種和馬賽亞種組THP-1巨噬細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 mRNA水平仍表現(xiàn)為上調(diào)，不排除其經(jīng)其他信號通路影響此兩種細胞因子表達上調(diào)的可能。

綜上所述，膿腫亞種和馬賽亞種均可作用于TLR2，誘導THP-1細胞內(nèi)TNF-α和IL-8 表達上調(diào)，膿腫亞種可經(jīng)JNK和ERK信號蛋白誘導TNF-α表達上調(diào)，馬賽亞種可經(jīng)JNK信號蛋白誘導TNF-α表達上調(diào)，膿腫亞種和馬賽亞種誘導IL-8表達上調(diào)可能與JNK和ERK信號蛋白相關(guān)。

[1] Harris KA, Kenna DT, Blauwendraat C, Hartley JC, Turton JF, Aurora P, Dixon GL. Molecular fingerprinting of Mycobacterium abscessus strains in a cohort of pediatric cystic fibrosis patients [J]. J Clin Microbiol, 2012, 50(5): 1758-1761.

[2] Choi WS, Kim MJ, Park DW, Son SW, Yoon YK, Song T, Bae SM, Sohn JW, Cheong HJ, Kim MJ. Clarithromycin and amikacin vs. clarithromycin and moxifloxacin for the treatment of post-acupuncture cutaneous infections due to Mycobacterium abscessus: a prospective observational study [J]. Clin Microbiol Infect, 2011, 17(7): 1084-1090.

[3] Howard ST, Rhoades E, Recht J, Pang X, Alsup A, Kolter R, Lyons CR, Byrd TF. Spontaneous reversion of Mycobacterium abscessus from a smooth to a rough morphotype is associated with reduced expression of glycopeptidolipid and reacquisition of an invasive phenotype [J]. Microbiology, 2006, 152(Pt 6): 1581-1590.

[4] Macheras E, Roux AL, Bastian S, Le?o SC, Palaci M, Sivadon-Tardy V, Gutierrez C, Richter E, Rüsch-Gerdes S, Pfyffer G, Bodmer T, Cambau E, Gaillard JL, Heym B. Multilocus sequence analysis and rpoB sequencing of Mycobacterium abscessus (sensu lato) strains [J]. J Clin Microbiol, 2011, 49(2): 491-499.

[5] 桂靜，李金莉，洪創(chuàng)躍，王峰.膿腫分枝桿菌復合群亞種鑒定的方法學研究 [J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2014，37(7)：512-516.

[6] 桂靜，王峰，洪創(chuàng)躍，李金莉，梁靜.龜分枝桿菌和膿腫分枝桿菌藥物敏感性分析及E試驗法應用評價 [J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013，36(8)：567-571.

[7] Shin DM, Yang CS, Yuk JM, Lee JY, Kim KH, Shin SJ, Takahara K, Lee SJ, Jo EK. Mycobacterium abscessus activates the macrophage innate immune response via a physical and functional interaction between TLR2 and dectin-1 [J]. Cell Microbiol, 2008, 10(8): 1608-1621.

[8] Sim YS, Kim SY, Kim JE, Shin SJ, Koh WJ. Impaired expression of MAPK is associated with the downregulation of TNF-α, IL-6, and IL-10 in Mycobacterium abscessus lung disease [J]. Tuberc Respir Dis, 2012, 72(3): 275-283.

[9] J?nsson B, Ridell M, Wold AE. Phagocytosis and cytokine response to rough and smooth colony variants of Mycobacterium abscessus by human peripheral blood mononuclear cells [J]. APMIS, 2013, 121(1): 45-55.

[10] Vignal C, Guérardel Y, Kremer L, Masson M, Legrand D, Mazurier J, Lipomannans E. Lipomannans, but not lipoarabinomannans, purified from Mycobacterium chelonae and Mycobacterium kansasii induce TNF-alpha and IL-8 secretion by a CD14-Toll-like receptor 2-dependent mechanism [J]. J Immunol, 2003, 171(4): 2014-2023.

[11] Sampaio EP, Elloumi HZ, Zelazny A, Paulson ML, Sher A, Bafica AL, Shea YR, Holland SM. Mycobacterium abscessus and M.avium trigger Toll-like receptor 2 and distinct cytokine response in human cells [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2008, 39(4): 431-439.

[12] Schmittgen TD, Livak KJ. Analyzing real time PCR data by the comparative CTmethods [J]. Nat Protoc, 2008, 3(6): 1101-1108.

[13] Wang M, Wang F, Yang J, Zhao D, Wang H, Shao F, Wang W, Sun R, Ling M, Zhai J, Song S. Mannan-binding lectin inhibits Candida albicans-induced cellular responses in PMA-activated THP-1 cells through Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 [J]. PLoS One, 2013, 8(12): e83517.

[14] So MY, Tian Z, Phoon YS, Sha S, Antoniou MN, Zhang J, Wu RS, Tan-Un KC. Gene expression profile and toxic effects in human bronchial epithelial cells exposed to zearalenone [J]. PLoS One, 2014, 9(5): e96404.

[15] Zhang H, Ouyang H, Wang D, Shi J, Ouyang C, Chen H, Xiao S, Fang L. Mycobacterium tuberculosis Rv2185c contributes to nuclear factor-κB activation [J]. Mol Immunol, 2015, 66(2): 147-153.

[16] 吳雪瓊，張宗德，樂軍.分枝桿菌分子生物學 [M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2010：111-115.

[17] Kim TS, Kim YS, Yoo H, Park YK, Jo EK. Mycobacterium massiliense induces inflammatory responses in macrophages through Toll-like receptor 2 and c-Jun N-terminal kinase [J]. J Clin Immunol, 2014, 34(2): 212-223.

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《微生物與感染》編委會

. WANG Feng, E-mail: biowangfeng@163.com

Stimulated expressions of tumor necrosis factor α and interleukin 8 in macrophages challenged byMycobacteriumabscessusthrough TLR2, JNK and ERK pathways

GUI Jing, WANG Feng, LI Qing, LI Jinli

DepartmentofPathogenicLaboratory,ShenzhenCenterforChronicDiseaseControl,Shenzhen518020,China

The purpose of the current study is to investigate the molecular mechanisms of tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin 8 (IL-8) mRNA expressions in THP-1 macrophages challenged byMycobacteriumabscessussubsp.abscessus(Mabs) andMycobacteriumabscessussubsp.massiliense(Mmass). The role of Toll-like receptor 2 (TLR2)-mediated c-Jun N-terminal kinase (JNK) and extracellular signal-regulated kinase (ERK) signaling pathways were investigated. First, THP-1 macrophages were cultured in the presence of Mabs and Mmass to stimulate cytokine expression . The mRNA expression levels of TNF-α and IL-8 were analyzed using quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (qRT-PCR) after 6 h. The levels of TNF-α and IL-8 mRNA after administration of anti-TLR2 mAb, JNK signaling inhibitor SP600125 and ERK signaling inhibitor U0126 were also detected. The results demonstrated that the levels of TNF-α and IL-8 mRNA in THP-1 cells were significantly upregulated by Mabs and Mmass for 6 h (P<0.05). The stimulated expressions of both TNF-α and IL-8 were significantly downregulated by anti-TLR2 mAb, JNK inhibitor or ERK inhibitor, respectively. It was thus concluded that both Mabs and Mmass could upregulate TNF-α and IL-8 mRNA expressions through TLR2-mediated JNK and ERK pathways.

Mycobacterium; Toll-like receptor; c-Jun N-terminal kinase; Extracellular signal-regulated kinase

王峰

2016-08-22)