• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    腺苷A2A受體顯像劑11C-KW6002的合成與初步生物學(xué)評(píng)價(jià)

    2017-08-16 09:30:25閆賦琴周衛(wèi)華孫小萌劉曉軍
    同位素 2017年3期
    關(guān)鍵詞:顯像劑紋狀體腺苷

    閆賦琴,周衛(wèi)華,孫小萌,劉曉軍

    (中國(guó)武警總醫(yī)院,北京 100039 )

    腺苷A2A受體顯像劑11C-KW6002的合成與初步生物學(xué)評(píng)價(jià)

    閆賦琴,周衛(wèi)華,孫小萌,劉曉軍

    (中國(guó)武警總醫(yī)院,北京 100039 )

    腺苷A2A受體與中樞神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān),正電子核素標(biāo)記的腺苷A2A受體顯像劑可用于帕金森病(PD)的診斷與療效評(píng)價(jià)。本研究采用碳-11標(biāo)記[(E)-1,3-二乙基-8-(3,4-二甲氧基苯乙烯)-7-甲基-3,7-雙氫-1H-嘌呤-2,6-二酮](KW6002)制備11C-KW6002,并進(jìn)行正常鼠與PD模型鼠microPET顯像。結(jié)果顯示,以去甲基KW6002為標(biāo)記前體,在NaOH條件下與三氟甲基磺酰基碳-11甲烷(11CH3-Trifcate)反應(yīng),標(biāo)記率達(dá)56%(衰變校正,n=3)。經(jīng)制備HPLC分離和固相萃取,產(chǎn)品放化純度>99.5%,比活度為1.5×1014Bq/g。11C-KW6002的microPET顯像結(jié)果顯示,正常大鼠雙側(cè)紋狀體呈對(duì)稱顯像,PD模型鼠中毀損側(cè)紋狀體放射性較對(duì)側(cè)明顯增加,而同一模型的11C-CFT顯像為毀損側(cè)紋狀體放射性缺失。表明11C-KW6002為具有臨床應(yīng)用的潛在腺苷A2A受體顯像劑。

    腺苷A2A受體;11C-KW6002;合成;microPET;顯像劑

    帕金森病(PD)是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元缺失,導(dǎo)致黑質(zhì)紋狀體通路功能異常的一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。目前,PD的藥物治療只能緩解癥狀,不能從根本上減輕多巴胺能神經(jīng)元的惡化。腺苷A2A受體拮抗劑可以阻斷紋狀體內(nèi)A2A的高表達(dá),同時(shí)能抑制單胺氧化酶,達(dá)到治療PD的效果,為治療PD的新型靶點(diǎn)和藥物[1]。腺苷A2A靶點(diǎn)PD的診斷與療效監(jiān)測(cè),如123I-MNI-420,18F-MRS5425 和18F-MNI-444等,均顯示了良好的效果[2-4]。Kyowa Hakko Kirin公司已將腺苷A2A的拮抗劑伊曲茶堿([(E)-1,3-二乙基-8-(3,4-二甲氧基苯乙烯)-7-甲基-3,7-雙氫-1H-嘌呤-2,6-二酮],KW6002)進(jìn)行臨床三期試驗(yàn)以證實(shí)治療PD的效果。KW6002與腺苷A2A高特異性結(jié)合(抑制常數(shù)Ki=12 nmol/L),而與多巴受體亞型、去甲腎上腺素受體、5-HT受體及乙酰膽堿(acetylcholine, ACH)受體幾乎沒有親和力,正電子核素標(biāo)記的KW6002可用于PD的診斷與療效監(jiān)測(cè)[5]。本研究擬采用碳-11標(biāo)記KW6002制備11C-KW6002,考察11C-KW6002在正常鼠及PD模型鼠上的生物分布及顯像,評(píng)價(jià)11C-KW6002作為腺苷A2A受體顯像劑的潛在價(jià)值。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 主要儀器

    HM-20 回旋加速器:日本住友重機(jī)械株式會(huì)社;PET-CM-3H-IT-Ⅰ型碳-11多功能合成模塊:配備液相碘代甲烷合成儀、Triflate在線轉(zhuǎn)換、半制備HPLC系統(tǒng)(配紫外和放射檢測(cè)器),派特(北京)科技有限公司;分析型HPLC儀、Waters2487紫外檢測(cè)器和BioScan Flowcount放射檢測(cè)器:美國(guó)BioScan公司;eXPlore

    Vista 小動(dòng)物PET/CT成像系統(tǒng):美國(guó)GE公司;Sep-Pak C-18柱:美國(guó)Waters公司。

    1.2 主要試劑

    1 mol/L氫化鋁鋰/四氫呋喃溶液、丙酮:美國(guó)Aldrich公司;57%氫碘酸:百靈威J&K公司;去甲基KW6002和KW6002標(biāo)準(zhǔn)品:美國(guó)NIH的郎立新博士惠贈(zèng);氫氧化鈉(AR):北京試劑廠。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    正常Sprqgue-Dawley大鼠10只,均為雄性,體重180~200 g;PD模型鼠3只,雄性,體重210~230 g。SCXK(京)2016-0011,北京維通華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司提供。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.111C-CH3I合成與在線轉(zhuǎn)換[6]

    HM-20回旋加速器質(zhì)子轟擊含0.5%氧氣的氮靶,經(jīng)14N(p,α)11C核反應(yīng)在靶內(nèi)生成11CO2,將11CO2轉(zhuǎn)輸至PET-CM-3H-IT碳-11多功能合成模塊,通過(guò)模塊上的不銹鋼LOOP環(huán)(浸于液氮)捕獲。捕獲完畢,移走液氮,空氣加熱LOOP環(huán),環(huán)中11CO2釋放到0.3 mL 1 mol/L的氫化鋁鋰/四氫呋喃溶液反應(yīng)管中。通入氮?dú)獠⒓訜岱磻?yīng)管,除四氫呋喃至干。冷卻后加入0.25 mL 57%氫碘酸。加熱反應(yīng)管并通入氮?dú)?,生成?1CH3I被氮?dú)廨d出。11CH3I流經(jīng)加熱至200 ℃的Triflate-Ag粉/石墨柱,轉(zhuǎn)化為11CH3-Triflate。

    2.211C-KW6002的合成與純化

    11C-KW6002合成路線示于圖1。稱取0.5 mg去甲基KW6002溶解于0.2 mL丙酮中,加入5 μL 2mol/L NaOH溶液[7],冷卻條件下通入11CH3-Triflate,待反應(yīng)管的放射性讀數(shù)達(dá)到最大并開始下降時(shí),停止通入氣體。密封反應(yīng)管,加熱至80 ℃,反應(yīng)2 min。

    圖1 11C-KW6002合成線路圖Fig.1 The scheme of synthesis of 11C-KW6002

    產(chǎn)物經(jīng)半制備HPLC分離,分離柱為Alltech C-18(250 mm×10 mm),流動(dòng)相V(乙腈)∶V(0.1 mol/L甲酸銨水溶液)∶V(乙酸)=35∶64.5∶0.5,流速6 mL/min,收集8~10 min的含放射性峰流動(dòng)相。將收集的溶液用水稀釋,經(jīng)固相萃取柱(Sep Pak C-18)萃取后,用1 mL乙醇洗脫產(chǎn)品。

    2.3 標(biāo)記條件

    分別采用丙酮、乙腈和DMSO為溶劑,以及不同的堿NaOH、Na2CO3調(diào)節(jié)pH,研究不同溶劑以及不同的堿對(duì)11C-KW6002標(biāo)記率的影響。

    2.4 質(zhì)量控制

    采用HPLC測(cè)量放化純度和比活度。Waters的HPLC,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,分析色譜柱為ODS柱(Gemini C-18 5 μ 4.6 mm×150 mm),流動(dòng)與半制備HPLC相同,流速1 mL/min,分別對(duì)制備樣品進(jìn)樣、KW6002標(biāo)準(zhǔn)品單獨(dú)進(jìn)樣和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品混和物進(jìn)樣,測(cè)量樣品的相對(duì)保留時(shí)間及色譜峰面積,計(jì)算放化純度與比活度。

    2.5 動(dòng)物模型

    按文獻(xiàn)方法制備帕金森病模型[8],選用健康成年Sprqgue-Dawley大鼠,在麻醉狀態(tài)下,利用大鼠腦立體定位儀將10 μL 2 g/L的6羥多巴(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)注射到中腦腹側(cè)背蓋區(qū)和黑質(zhì)致密部,術(shù)后2周采用腹腔注射阿撲嗎啡加旋轉(zhuǎn)的方式評(píng)估模型,連續(xù)測(cè)量4周,向健側(cè)旋轉(zhuǎn)大于7 圈/min即為模型成功。

    2.6 microPET/CT顯像

    取正常大鼠和PD模型鼠各3只,尾靜脈注射11C-KW6002(74 MBq),注射后20 min將其置于microPET/CT掃描床上,持續(xù)用異氟烷氣體麻醉,行常規(guī)microPET/CT掃描。為了驗(yàn)證和對(duì)比,選同一只模型鼠,間隔1 d注射多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白顯像劑11C-CFT,注射后40 min行microPET/CT掃描。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 產(chǎn)品鑒別

    去甲基KW6002有三個(gè)叔胺,但受雙鍵影響,這三個(gè)氮基本沒有活性,苯酚在堿性條件下成為酚氧基離子,作為親核試劑進(jìn)攻11CH3-Triflate,Triflate離去,發(fā)生SN親核反應(yīng)。

    收集主產(chǎn)品放射性峰,并經(jīng)固相萃取,在分析型HPLC上僅一個(gè)放射性峰(圖2b,保留時(shí)間tR=6.65 min),該峰與標(biāo)準(zhǔn)品的紫外吸收峰(圖2a)在保留時(shí)間上一致(加上兩個(gè)檢測(cè)器之間的死體積)。同時(shí),如果采用該流動(dòng)相和分析柱,單獨(dú)進(jìn)放射性原料11CH3-Triflate時(shí),僅有一個(gè)放射性峰(tR=2.5 min),說(shuō)明tR=6.65 min為前體甲基化產(chǎn)品11C-KW6002。產(chǎn)品的放化純度>99.5%,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算,比活度為1.5×1014Bq/g。

    a——標(biāo)準(zhǔn)品的紫外圖譜;b——11C-KW6002放射性圖譜圖2 HPLC圖譜a——UV HPLC chromatogram of 12C-KW6002;b——Radioactivity HPLC chromatogram of 11C-KW6002Fig.2 HPLC chromatogram

    3.211C-KW6002標(biāo)記條件

    采用丙酮、乙腈和DMSO為溶劑時(shí)標(biāo)記效率(衰變校正,n=3)分別為56%、42%、48%,丙酮的標(biāo)記效率最高;采用10 μmol/L的NaOH和10 μmol/L的Na2CO3時(shí)標(biāo)記效率(衰變校正,n=3)分別為56%、12%,Na2CO3的標(biāo)記效率低于NaOH,可能是酚的酸性較弱,需要強(qiáng)堿才能生成酚氧根負(fù)離子,以便進(jìn)行親核反應(yīng)。

    將0.5 mg去甲基KW6002,用0.2 mL丙酮溶解,并加入5 μL 2 mol/L NaOH溶液,標(biāo)記效率可達(dá)到56%(衰變校正,n=3)。與多巴胺D2受體顯像劑11C-Racloprdie比較,11C-KW6002的標(biāo)記主產(chǎn)品更容易分離,且標(biāo)記率高于11C-Racloprdie[9]。

    3.3 正常大鼠microPET/CT顯像

    正常大鼠注射11C-KW6002后行microPET/CT腦顯像,顯像結(jié)果示于圖3。由圖3結(jié)果可見,大鼠淚腺、唾液腺等腺體顯像清晰且有放射性濃聚,橫斷面、冠狀面大鼠紋狀體顯像對(duì)稱分布,左右雙側(cè)放射性濃聚程度一致。

    3.4 PD模型大鼠microPET/CT顯像

    相同條件下,PD模型大鼠腦的橫斷面、冠狀面大鼠紋狀體顯像呈不對(duì)稱分布,右側(cè)(6-OHDA毀損側(cè))放射性濃聚程度高于左側(cè)(圖4a),經(jīng)SUV計(jì)算,右側(cè)/左側(cè)紋狀體放射性攝取比為2.4。為了驗(yàn)證該模型,對(duì)同一模型鼠間隔1 d,采用多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11C-CFT顯像(圖4b),左右顯像不對(duì)稱,其中右側(cè)幾乎缺失,僅見左側(cè)紋狀體顯像,表明該模型成功[7]。同時(shí)證明PD模型鼠上毀損側(cè)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白受體明顯下降,而腺苷A2A受體上調(diào)。

    圖3 正常大鼠11C-KW6002 microPET/CT顯像Fig.3 The microPET/CT imaging of 11C-KW6002 in normal rat

    a——11C-KW6002;b——11C-CFT圖4 PD模型鼠腦microPET/CT顯像a——11C-KW6002;b——11C-CFTFig.4 The microPET/CT imaging in the same one PD module rat

    4 小結(jié)

    強(qiáng)堿性條件下,11CH3-Triflat與去甲基KW6002在丙酮溶液中反應(yīng),得到11C-KW6002 標(biāo)記率為56%(衰變校正,n=3),經(jīng)半制備HPLC純化及固相萃取,產(chǎn)品的放化純度大于99.5%。經(jīng)正常鼠及PD模型鼠microPET顯像,腺苷A2A受體顯像劑11C-KW6002在正常鼠上雙側(cè)紋狀體顯像對(duì)稱,而模型鼠的毀損側(cè)放射性攝取增高。11C-KW6002具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值,可用于以腺苷A2A受體為靶點(diǎn)的PD診斷與療效評(píng)價(jià)顯像劑。

    [1] 李煥敏,邵明. 腺苷A2A受體與帕金森病[J]. 廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,34(6):64-68.

    Li Huanmin, Shao Ming. Adenosine 2A receptor with PD[J]. Academic Journal of Guangzhou Medical College, 2006, 34(6): 64-68(in Chinese).

    [2] Tavares A A S, Batis J C, Papin C, et al. Kinetic modeling, test-retest, and dosimetry of123I-MNI-420 in humans[J]. J Nucl Med, 2013, 54: 1 760-1 767.

    [3] Barret O, Hannestad J, Vala C, et al. Characterization in humans of18F-MNI-444, a PET radiotracer for brain adenosine 2A aeceptors[J]. J Nucl Med, 2015, 56: 586-591.

    [4] Kumar B A, Lixin L, Orit J, et al. Striated adenosine A(2A) receptor positron emission tomographic imaging in 6-hydroxydopamine-lesioned rats using18F-MRS5425[J]. Nucl Med Biol, 2011,38(6): 897-906.

    [5] Hiranie E, Gillies J, Karasawa A, et al. Evaluationo of [4-O-methyl-11C]KW-6002 as a potential PET ligand for mapping central Adenosine A2Areceptors in rats[J]. Synapse, 2001, 42: 164-176.

    [6] 張錦明,田嘉禾,王武尚,等. 在線制備11C-CH3-Triflate-CH3[J]. 同位素,2006,19(2):124-128.

    Zhang Jinming, Tian Jiahe, Wang Wushang, et al. Parparation of11C-CH3-Triflate-CH3on-line[J]. Journal of Isotopes, 2006, 19(2): 124-128(in Chinese).

    [7] 張錦明,張曉軍,李云鋼,等. 自動(dòng)化合成11C-Raclopride及質(zhì)量控制[J]. 同位素,2014,27(4):230-235.

    Zhang Jinming, Zhang Xiaojun, Li Yungang, et al. Automatic synthesis and quality control of11C-raclopride for clinical use[J]. Journal of Isotopes, 2014, 27(4): 230-235(in Chinese).

    [8] 王瑞民,王慶勝,郭喆,等. 多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PET成像在建立帕金森病大鼠模型中的作用[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)影像雜志,2008,16(1):1-4.

    Wang Ruimin,Wang Qingsheng,Guo Zhe, et al. Dopamine transporter PET imaging in the evaluation of parkinson’ disease rat model[J]. Chinese Journal of Medical Imaging, 2008,16(1): 1-4(in Chinese).

    [9] 張錦明,張曉軍,李云鋼,等. 自動(dòng)化合成11C-Raclopride及質(zhì)量控制[J]. 同位素,2014,27(4):230-235.

    Zhang Jinming, Zhang Xiaojun, Li Yungang, et al. Automatic synthesis and quality control of11C-raclopride for clinical use[J]. Journal of Isotopes, 2014, 27(4): 230-235(in Chinese).

    The Synthesis and Evaluation of11C-KW6002 as the PET Adenosine 2A Receptor Imaging Agent

    YAN Fu-qin, ZHOU Wei-hua, SUN Xiao-meng, LIU Xiao-jun

    (GeneralHospitalofChinesePeople’sArmedPoliceForces,Beijing100039,China)

    PET with selective adenosine 2A receptor (A2A) radiotracers can be used to study a neurodegenerative disorders in vivo and to diagnose of PD. The PET radiotracer11C-KW6002 for imaging A2Awas synthesized and evaluated, in normal and PD module rats. The results showed that the labeling yield was 56% (decay corrected yield,n=3) when11CH3-Triflate reacted with nor-KW6002 under NaOH. The radiochemical purity of product was 99.5% with specific activity of 1.5×1014Bq/g. The balance of radioactivity in striatum was observed in normal rats with microPET. A significant raised radioactivity on the striatum of lesion compared with the normal side. The radioactivity was found absence on the striatum of lesion with11C-CFT.11C-KW6002 is a potential PET radiotracer for imaging A2A.

    A2Areceptors;11C-KW6002; synthesis; microPET; imaging agent

    2017-01-11;

    2017-02-23

    閆賦琴(1968—),女,河北人,副主任藥師,主要從事臨床藥學(xué)研究

    劉曉軍,主任醫(yī)師,E-mail: m13911735771@163.com

    TL92+3;R817.9+2

    A

    1000-7512(2017)03-0204-05

    10.7538/tws.2017.youxian.003

    猜你喜歡
    顯像劑紋狀體腺苷
    做PET/CT檢查時(shí)喝的幾瓶水有何作用
    為什么越喝咖啡越困
    二成份硒鼓Auger Mark問題淺析
    中樞神經(jīng)系統(tǒng)臨床用PET顯像劑的研究進(jìn)展
    同位素(2020年4期)2020-08-22 02:30:22
    一種實(shí)用顯像劑的研發(fā)實(shí)驗(yàn)
    環(huán)磷腺苷葡胺治療慢性充血性心力衰竭臨床研究
    紋狀體A2AR和D2DR對(duì)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)過(guò)程中蒼白球GABA和Glu釋放的調(diào)控研究
    紋狀體內(nèi)移植胚胎干細(xì)胞來(lái)源的神經(jīng)前體細(xì)胞可升高帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)多巴胺含量
    α-硫辛酸聯(lián)合腺苷鈷胺治療糖尿病周圍神經(jīng)病變效果觀察
    1H-MRS檢測(cè)早期帕金森病紋狀體、黑質(zhì)的功能代謝
    磁共振成像(2015年7期)2015-12-23 08:53:04
    欧美日韩一级在线毛片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲第一av免费看| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产 一区精品| 国产精品三级大全| 国产精品免费视频内射| 国产av一区二区精品久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲av成人精品一二三区| xxx大片免费视频| 午夜91福利影院| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产xxxxx性猛交| 国产av码专区亚洲av| 视频区图区小说| 成人国语在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 91成人精品电影| 国产免费又黄又爽又色| 久久毛片免费看一区二区三区| 大香蕉久久网| 国产精品.久久久| 亚洲av日韩在线播放| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲国产精品999| 成人免费观看视频高清| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 黄片无遮挡物在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 青青草视频在线视频观看| 国产av国产精品国产| 久久99热这里只频精品6学生| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 久久精品国产综合久久久| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产在视频线精品| 曰老女人黄片| 韩国av在线不卡| 中文字幕制服av| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久精品免费免费高清| 黄色视频不卡| 久久狼人影院| 国产免费又黄又爽又色| 麻豆精品久久久久久蜜桃| a 毛片基地| 一级黄片播放器| 一边摸一边做爽爽视频免费| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲国产日韩一区二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美精品一区二区大全| 欧美日韩成人在线一区二区| 日韩精品有码人妻一区| 日韩精品有码人妻一区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本vs欧美在线观看视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 黑人猛操日本美女一级片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 国产高清国产精品国产三级| 一二三四中文在线观看免费高清| 日本欧美国产在线视频| 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品国产av在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 欧美精品人与动牲交sv欧美| av福利片在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 人人澡人人妻人| 无限看片的www在线观看| 男女午夜视频在线观看| 免费观看av网站的网址| 久久久久精品国产欧美久久久 | 成人影院久久| 中文字幕制服av| 亚洲成色77777| 少妇人妻久久综合中文| 黄色视频在线播放观看不卡| 99国产精品免费福利视频| 波多野结衣一区麻豆| 校园人妻丝袜中文字幕| www.自偷自拍.com| 人体艺术视频欧美日本| 午夜久久久在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 捣出白浆h1v1| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲五月色婷婷综合| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av免费观看日本| 黄色毛片三级朝国网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| svipshipincom国产片| 亚洲五月色婷婷综合| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲综合精品二区| 久久久欧美国产精品| 国产精品偷伦视频观看了| 日本爱情动作片www.在线观看| 中文字幕制服av| 国产av精品麻豆| xxx大片免费视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 人人妻人人澡人人看| 一级毛片我不卡| 欧美97在线视频| 老司机影院毛片| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲国产最新在线播放| 曰老女人黄片| 国产野战对白在线观看| 免费看不卡的av| 下体分泌物呈黄色| 午夜91福利影院| 亚洲精品在线美女| 国产精品久久久av美女十八| 九草在线视频观看| 男女下面插进去视频免费观看| 最黄视频免费看| 多毛熟女@视频| 丰满少妇做爰视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 母亲3免费完整高清在线观看| 少妇人妻 视频| 最近手机中文字幕大全| 成人午夜精彩视频在线观看| 少妇人妻 视频| 不卡av一区二区三区| 考比视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 又大又黄又爽视频免费| 97人妻天天添夜夜摸| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久热爱精品视频在线9| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲第一青青草原| 香蕉国产在线看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 最近中文字幕高清免费大全6| 97在线人人人人妻| 老鸭窝网址在线观看| 综合色丁香网| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产精品成人在线| 午夜日韩欧美国产| av线在线观看网站| 人成视频在线观看免费观看| 男女国产视频网站| 成年人午夜在线观看视频| 18禁国产床啪视频网站| 中文字幕色久视频| 国产亚洲av高清不卡| 大香蕉久久网| 黑人猛操日本美女一级片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲国产欧美一区二区综合| 9191精品国产免费久久| 国产不卡av网站在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品一二三| 精品国产一区二区久久| 亚洲三区欧美一区| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久久免费视频了| 国产xxxxx性猛交| 成人手机av| 精品久久久精品久久久| 国产探花极品一区二区| 午夜久久久在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| a级毛片在线看网站| 亚洲色图综合在线观看| 两个人免费观看高清视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲,欧美精品.| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久久久免费高清国产稀缺| 香蕉丝袜av| 久久ye,这里只有精品| 韩国精品一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 毛片一级片免费看久久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 精品久久久久久电影网| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 黄色毛片三级朝国网站| 黄片小视频在线播放| 日韩大片免费观看网站| 国产精品一二三区在线看| 大陆偷拍与自拍| 中国国产av一级| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日本一区二区免费在线视频| 日韩一区二区三区影片| 人成视频在线观看免费观看| 日韩免费高清中文字幕av| 久久亚洲国产成人精品v| 成人国语在线视频| 黄色 视频免费看| 51午夜福利影视在线观看| 黄片播放在线免费| 欧美av亚洲av综合av国产av | 一二三四在线观看免费中文在| 国产成人精品在线电影| 校园人妻丝袜中文字幕| h视频一区二区三区| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 满18在线观看网站| 精品国产国语对白av| 亚洲,欧美精品.| 爱豆传媒免费全集在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 好男人视频免费观看在线| 另类亚洲欧美激情| av网站在线播放免费| 亚洲美女搞黄在线观看| 香蕉国产在线看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久久久久久久久久免费av| 观看美女的网站| 一区福利在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品久久久久久精品古装| 久久精品国产亚洲av高清一级| 丁香六月欧美| 深夜精品福利| 国产精品三级大全| 国产色婷婷99| 中文字幕色久视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 街头女战士在线观看网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 美女高潮到喷水免费观看| 丰满乱子伦码专区| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲国产最新在线播放| 看十八女毛片水多多多| av国产精品久久久久影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩制服骚丝袜av| 三上悠亚av全集在线观看| 1024视频免费在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 国产av码专区亚洲av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 在线观看免费视频网站a站| 免费不卡黄色视频| 国产在线一区二区三区精| 久久精品亚洲av国产电影网| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产免费一区二区三区四区乱码| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 十分钟在线观看高清视频www| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品一国产av| 亚洲精品在线美女| 久久性视频一级片| 水蜜桃什么品种好| 人体艺术视频欧美日本| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美人与善性xxx| 国产精品免费大片| 日韩视频在线欧美| 桃花免费在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 操出白浆在线播放| 999久久久国产精品视频| 中文欧美无线码| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美激情高清一区二区三区 | 国产成人精品久久二区二区91 | 美女高潮到喷水免费观看| 久久综合国产亚洲精品| 国产成人一区二区在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 另类亚洲欧美激情| 国产视频首页在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 中国三级夫妇交换| 少妇精品久久久久久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 悠悠久久av| 十八禁人妻一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 男的添女的下面高潮视频| av电影中文网址| 老司机影院毛片| 天堂8中文在线网| 国产av一区二区精品久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日本91视频免费播放| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 最黄视频免费看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品第二区| 中文天堂在线官网| 在现免费观看毛片| 亚洲第一区二区三区不卡| 咕卡用的链子| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲成色77777| av天堂久久9| 免费黄网站久久成人精品| 91国产中文字幕| 久久久久网色| 国产一区二区激情短视频 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产在线一区二区三区精| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲伊人色综图| 午夜老司机福利片| 亚洲伊人色综图| 精品国产一区二区久久| 男女午夜视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 少妇人妻 视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 一区二区av电影网| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 中文字幕最新亚洲高清| 人妻一区二区av| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产国语露脸激情在线看| 18禁动态无遮挡网站| 日本色播在线视频| 最近的中文字幕免费完整| 叶爱在线成人免费视频播放| 人人澡人人妻人| 国产色婷婷99| 国产 一区精品| 男男h啪啪无遮挡| 日韩视频在线欧美| 高清av免费在线| 亚洲精品国产区一区二| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲欧洲日产国产| 18禁观看日本| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久久久久免费视频了| av在线app专区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 美女福利国产在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 久久人人爽人人片av| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 制服人妻中文乱码| 一个人免费看片子| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av有码第一页| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美在线一区亚洲| 国产精品 欧美亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产又爽黄色视频| 免费av中文字幕在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 日日爽夜夜爽网站| 国产男女超爽视频在线观看| 老司机亚洲免费影院| av网站免费在线观看视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产 一区精品| 三上悠亚av全集在线观看| 久久这里只有精品19| 丁香六月天网| 国产精品三级大全| 欧美激情 高清一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 深夜精品福利| 嫩草影院入口| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲精品第二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 99热国产这里只有精品6| 十八禁高潮呻吟视频| 精品久久蜜臀av无| 国产不卡av网站在线观看| 国产成人av激情在线播放| 成年人免费黄色播放视频| 丁香六月欧美| 免费观看av网站的网址| 97人妻天天添夜夜摸| 国产黄色免费在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲欧洲日产国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人a∨麻豆精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 不卡av一区二区三区| 色精品久久人妻99蜜桃| 飞空精品影院首页| 一级毛片 在线播放| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产av国产精品国产| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品嫩草影院av在线观看| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩精品网址| 晚上一个人看的免费电影| 国产 一区精品| 乱人伦中国视频| 在线观看三级黄色| 亚洲国产精品999| 午夜福利视频精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲熟女精品中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 黄色怎么调成土黄色| 国产免费现黄频在线看| 成年人午夜在线观看视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 丝瓜视频免费看黄片| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 青春草国产在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 国产成人系列免费观看| 国产亚洲最大av| 黄色视频不卡| 在现免费观看毛片| 国产精品成人在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 高清视频免费观看一区二区| 午夜91福利影院| 一级片免费观看大全| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲成国产人片在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产av国产精品国产| 黄频高清免费视频| 一区二区三区激情视频| 99热网站在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲成人手机| 久久免费观看电影| 亚洲专区中文字幕在线 | 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲综合精品二区| 超色免费av| 乱人伦中国视频| 欧美中文综合在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲精品乱久久久久久| 国产毛片在线视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 美女大奶头黄色视频| 黄色 视频免费看| 国产成人欧美在线观看 | av免费观看日本| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美最新免费一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 91aial.com中文字幕在线观看| videos熟女内射| 丰满乱子伦码专区| 午夜福利在线免费观看网站| 国产精品免费视频内射| 日韩制服骚丝袜av| 久久久欧美国产精品| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| www.自偷自拍.com| 精品一区在线观看国产| 国产毛片在线视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产成人精品福利久久| 久久 成人 亚洲| 黑丝袜美女国产一区| 日韩免费高清中文字幕av| 国产成人精品久久久久久| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久精品国产亚洲av高清一级| a级毛片黄视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产乱人偷精品视频| 中文字幕最新亚洲高清| 精品国产露脸久久av麻豆| 少妇 在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 午夜免费观看性视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久久久久久久久久大奶| 韩国精品一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产在线免费精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 美女福利国产在线| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产视频首页在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 天堂俺去俺来也www色官网| av片东京热男人的天堂| 欧美激情 高清一区二区三区| 婷婷色综合www| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 美女午夜性视频免费| av国产精品久久久久影院| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产深夜福利视频在线观看| av天堂久久9| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品蜜桃在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲成人av在线免费| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产成人欧美在线观看 | 少妇人妻 视频| 国产一卡二卡三卡精品 | 国产成人精品在线电影| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲天堂av无毛| 久久狼人影院| 9191精品国产免费久久| 欧美精品一区二区免费开放| 男女无遮挡免费网站观看| 嫩草影院入口| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲国产看品久久| 色播在线永久视频| 大香蕉久久成人网| 青春草视频在线免费观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 9191精品国产免费久久| 制服诱惑二区| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品国产av成人精品| 中文字幕人妻熟女乱码| 另类亚洲欧美激情| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产不卡av网站在线观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产极品粉嫩免费观看在线| a级片在线免费高清观看视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲av成人精品一二三区| 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩av久久| 日韩大片免费观看网站| 国产一区二区激情短视频 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产97色在线日韩免费|