血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中的表達(dá)及臨床意義

徐 健，劉金龍，丁麗萍，江 嬌

（濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

·基礎(chǔ)研究·

血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中的表達(dá)及臨床意義

徐 健，劉金龍，丁麗萍，江 嬌

（濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

目的 探討血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中患者中的臨床意義。方法 收集缺血性腦卒中患者60例，選取同期在醫(yī)院健康體檢者40例為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）技術(shù)檢測血清miRNA-499-5p的表達(dá)。結(jié)果 腦卒中患者血清miRNA-499-5p表達(dá)與對(duì)照組比較表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 缺血性腦卒中患者血清中miRNA-499-5p表達(dá)顯著上升，可預(yù)測缺血性腦卒中疾病的發(fā)生及判斷其危險(xiǎn)程度，估計(jì)病情的發(fā)展?fàn)顩r，是其可能的生物學(xué)標(biāo)記物之一。

缺血性腦卒中；miRNA-499-5p；生物學(xué)標(biāo)記物

缺血性腦卒中是一種急性起病的局灶性腦供血障礙性疾病。對(duì)缺血性腦卒中的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。文獻(xiàn)表明，microRNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)方式識(shí)別靶基因，調(diào)控多種基因的表達(dá)。腦組織中的miRNA的表達(dá)和分布與腦卒中有著密切的聯(lián)系[1]。許多miRNA與腦組織的發(fā)育、分化、生理功能及病變等密切相關(guān)，與靶基因共同參與炎癥、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)血管再生[2]。miRNA-499-5p在大腦細(xì)胞中都有表達(dá)。本研究利用熒光定量PCR的方法檢測缺血性腦卒中患者血清中miRNA-499-5p的表達(dá)，探討其在缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

搜集2016年4月～2017年4月濰坊市人民醫(yī)院接收的缺血性腦卒中患者60例，并收集同期在濰坊人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢患者40例。實(shí)驗(yàn)分為缺血性腦卒中組和和健康體檢組。缺血性腦卒中組和和健康體檢組一般資料相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 血液樣本收集

收集缺血性腦卒中組和和健康體檢組靜脈血，3000 rpm/min，離心10 min，取上清凍存于-80℃，準(zhǔn)備后續(xù)RT-PCR檢測，其操作方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 熒光定量PCR檢測

PCR反應(yīng)體系如下所示：cDNA1ul；2×SYBR Green Mix 9 ul；上游primer0.5 ul；下游primer（10uM）0.5ul；水9 ul；總體積20 ul。PCR擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)：預(yù)變性95℃、3 min，94℃、30 s，60℃退火30 s，72℃延伸15 s，35個(gè)循環(huán)。以cel-miR-39為內(nèi)參，上游引物5’CTC CAGCTG TCA AGA G CAA TAA CGA A3’，下游引物5’TCCAGT GCA GGG TCC GAG GT3’。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 臨床資料結(jié)果

腦卒中組患者與健康對(duì)照組在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在高血壓史、糖尿病史方面明顯高于健康對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 缺血性腦卒中組和健康對(duì)照組一般資料比較

2.2 血清miR-499-5p表達(dá)檢測

運(yùn)用定量PCR方法檢測腦卒中組和健康對(duì)照組血清中miR-499-5p的表達(dá)水平，結(jié)果示腦卒中組血清miR-499-5p相對(duì)表達(dá)量明顯高于健康對(duì)照組，差異有顯著性（P＜0.01），見表2。

表2 缺血性腦卒中組與健康對(duì)照組血清miR-499-5p表達(dá)水平

3 討 論

本研究通過研究發(fā)現(xiàn)卒中性患者血清miR-499-5p表達(dá)水平顯著升高，疾病組與健康組在性別、年齡方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而疾病組在高血壓史、糖尿病史方面明顯高于健康對(duì)照組[3]（P＜0.05）。許多研究表明miRNA參與了神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生、發(fā)育、病理損傷和修復(fù)過程[4]。本研究結(jié)果提示，miR-499-5p在腦卒中組表達(dá)顯著上調(diào)，其可能作為腦卒中的生物學(xué)標(biāo)志物之一被更廣泛用于臨床診斷和治療腦卒中，具體的作用機(jī)制目前還了解甚少，需要進(jìn)一步研究。

[1] 王 麗,王媛媛,劉海莉,等.MicroRNA與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的研究進(jìn)展[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版,2013,38(3):323-328.

[2] 鈕 超,孫麗華.microRNA在高血壓誘發(fā)腦卒中疾病發(fā)展中的作用[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2013,29(7):551-553.

[3] 保玉蓮,朱榆紅.MicroRNA與缺血性腦卒中關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2014,17(4):94-97.

本文編輯：吳 衛(wèi)

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ISSN.2095-8242.2017.22.4171.02