趨化因子受體4和基質(zhì)衍生因子1的表達(dá)與卵巢癌發(fā)生的相關(guān)性分析

郭玲??李蓮娣??尹國華??崔虎軍

[摘要] 目的 分析趨化因子受體4（CXCR4）和基質(zhì)衍生因子1（SDF-1）在不同卵巢組織中的表達(dá)，探究二者在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中的作用。 方法 選擇我院收治的35例卵巢上皮癌患者、卵巢上皮性良性腫瘤的患者27例以及正常的卵巢組織患者32例，采用免疫組化法進(jìn)行檢測，分析卵巢組織中的CXCR4、SDF-1的蛋白表達(dá)情況和臨床病理因素的相關(guān)性。 結(jié)果 SDF-1、CXCR4在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤腫瘤和卵巢惡性腫瘤中分別表達(dá)陰性、低表達(dá)以及高表達(dá)（P<0.05）；SDF-1、CXCR4 蛋白表達(dá)與FIGO分期、組織學(xué)分化均無顯著差別（P>0.05），而和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），SDF-1表達(dá)情況與患者具有腹水呈正相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 SDF-1、CXCR4的蛋白表達(dá)和卵巢癌有著一定的相關(guān)性，其可能參與了卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程，但是與卵巢癌的組織學(xué)分化情況無關(guān)，同時SDF-1、CXCR4的蛋白表達(dá)情況可以作為卵巢的重要致病因子。

[關(guān)鍵詞] 趨化因子受體4；基質(zhì)衍生因子1；卵巢癌；淋巴結(jié)；相關(guān)性

[中圖分類號] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）11-22-04

Correlation analysis between expression of chemokine receptor 4 and matrix derived factor 1 and ovarian cancer

GUO Ling1 LI Liandi2 YIN Guohua3 CUI Hujun4

1.Personnel Section， the Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University， Heilongjiang， Mudanjiang 157000， China； 2. Department of Anesthesiology， The Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University， Heilongjiang， Mudanjiang 157000， China； 3. Department of Nursing， the Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University， Heilongjiang， Mudanjiang 157000， China； 4. Department of Oncology， Affiliated Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College， Heilongjiang， Mudanjiang 157000， China

[Abstract] Objective To analyze the expression of chemokine receptor 4 and matrix derived factor 1 in different ovarian tissues. And to explore the the role of the two in the process of ovarian cancer occurrence， development and metastasis. Methods 32 patients with epithelial ovarian cancer， 27 cases of ovarian epithelial benign tumors and 35 cases of normal ovarian tissues cured in our hospital were selected. Immunohistochemical method was used to detect the expression of CXCR4 and SDF-1 proteins in ovarian tissue and the correlation between clinical and pathological factors. Results SDF-1 and CXCR4 expressed negative， low expression and high expression （P<0.05） in normal ovarian tissue， ovarian benign tumor and ovarian malignant tumor respectively. There was no significant difference between the expression of SDF-1 and CXCR4 protein and FIGO staging and histological differentiation （P>0.05）. There was positively related to lymph node metastasis （P<0.05）， and the expression of SDF-1 was positively correlated with ascites in patients （P<0.05）. Conclusion The protein expression of SDF-1 and CXCR4 is related to ovarian cancer. It may be involved in the metastasis of ovarian cancer， but it is not related to the histological differentiation of ovarian cancer. At the same time， the expression of SDF-1 and CXCR4 protein can be an important pathogenic factor of ovary.

[Key words] Chemokine receptor 4； Matrix derived factor 1； Ovarian cancer； Lymph node； Correlation

卵巢癌屬于女性生殖器中較為嚴(yán)重的惡性疾病，目前，臨床上未找到有效的方法診斷，仍有約

71%的卵巢癌患者等到確診時病情已經(jīng)到晚期[1]。相關(guān)資料顯示[2]，卵巢癌在我國的發(fā)病呈現(xiàn)上升趨勢，發(fā)病年齡逐漸趨向于年輕化。趨化因子受體4是腫瘤細(xì)胞表達(dá)較為普遍的趨化腫瘤組織因子受

體，其可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移侵犯，在腫瘤的生理及病理過程中發(fā)揮著極為重要的作用[3]?；|(zhì)衍生因子1是骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的CXC類趨化蛋白，CXCR4是其主要的受體[4-5]。研究選擇我院收治的35例卵巢上皮癌患者、卵巢上皮性良性腫瘤的患者27例以及正常的卵巢組織患者32例，采用免疫組化法進(jìn)行檢測，分析卵巢組織中的CXCR4、SDF-1的蛋白表達(dá)情況和臨床病理因素的相關(guān)性。現(xiàn)進(jìn)行報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究收集2010年2月～2014年4月在我院接受手術(shù)治療且臨床病理資料完整的卵巢上皮癌患者35例患者，其中18例患者為漿液性囊腺癌，10例患者為粘液性腺癌，7例患者為子宮內(nèi)膜樣癌；高分化共21例，中分化及低分化共14例，根據(jù)FIGO進(jìn)行分期：I～I(xiàn)I期共13例，III～I(xiàn)V期共19例；其中伴有腹水的患者共24例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者共23例。將35例卵巢上皮癌患者作為卵巢惡性腫瘤組，研究另選取同期在我院收治卵巢上皮性良性腫瘤的患者27例作為卵巢良性腫瘤組，同時選擇因?qū)m頸癌或者子宮內(nèi)膜癌行手術(shù)治療，術(shù)后病理正常的患者32例作為正常卵巢組織組。

1.2 患者入組標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

入組標(biāo)準(zhǔn)：入組患者術(shù)前均未經(jīng)過化療及放療等治療；入組患者均經(jīng)臨床病理確診[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除入組患者標(biāo)本出現(xiàn)感染及壞死者。

1.3 方法

1.3.1 試劑 研究應(yīng)用的鼠抗人單克隆抗體SDF-1以及兔抗人多克隆抗體 CXCR4（廣州市格瑞林生物科技有限公司）；通用型SP試劑盒、DAB試劑盒（上海麥約爾生物技術(shù)有限公司）。

1.3.2 研究方法 將患者的標(biāo)本切成厚5μm切片，采取二甲苯和梯度酒精對其脫蠟，隨后進(jìn)行抗原修復(fù)，然后向其中添加3%的H2O2并且在室溫下的條件下孵育30min，隨后進(jìn)行PBS液沖洗，山羊血清封閉后溫室孵育30min，加入一抗，4℃孵育過夜，采用PBS進(jìn)行對其沖洗，向其中加入二抗，室溫下孵育30min，滴加PBS沖洗，然后將SP復(fù)合物加入，孵育30min，使用PBS沖洗，并向其中加入DAB（1∶1）進(jìn)行顯色，最后進(jìn)行復(fù)染、分化、脫水、透明和封片等步驟。標(biāo)本均在同一條件下進(jìn)行顯色，光學(xué)倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.4 觀察指標(biāo)和結(jié)果判定

觀察標(biāo)準(zhǔn)：觀察三組患者卵巢組織中的SDF-1、CXCR4表達(dá)情況；觀察SDF-1、CXCR4 蛋白表達(dá)和臨床特征的相關(guān)性[7]。

結(jié)果判定[8]：標(biāo)本顯色黃褐色，結(jié)果判定為SDF-1或者CXCR4陽性表達(dá)。若是陽性細(xì)胞<10%評為0分，在10%～25%之間評為1分，在25%～50%之間評為2分，若>50%評為3分；無染色評為0分，弱染色（偏強(qiáng)黃色）評為1分，中等染色（呈現(xiàn)偏棕黃色）判定為2分，強(qiáng)染色（呈現(xiàn)偏黃褐色）判定為3分。以上兩種結(jié)果的和，最終得分0分為陰性（-），1～2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，SDF-1、CXCR4的蛋白在卵巢組織中的表達(dá)情況計數(shù)資料采用卡方檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，SDF-1、CXCR4 蛋白表達(dá)與卵巢癌病理特征的相關(guān)性，采用Spearman進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。

2 結(jié)果

2.1 蛋白定位

結(jié)果顯示在卵巢癌、卵巢良性腫瘤細(xì)胞的包漿中可以看出SDF-1、CXCR4蛋白有所表達(dá)，并且兩者表達(dá)強(qiáng)度基本一致，主要是黃褐色、淡黃色和黃棕色，而在胞膜、胞核中則未見染色。

2.2 卵巢組織中的SDF-1、CXCR4的蛋白表達(dá)情況

卵巢癌組織中的SDF-1、CXCR4呈現(xiàn)高度表達(dá)，在卵巢良性腫瘤組織中則為低表達(dá)，在正常的卵巢組織不顯色，SDF-1、CXCR4的蛋白在三組卵巢組織中的表達(dá)結(jié)果差別顯著（χ2=26.561、35.329，P=0.000、0.000），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.3 SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)與卵巢癌病理特征的相關(guān)性

兩種因子的表達(dá)和組織學(xué)分化、FIGO分期不具有相關(guān)性（P>0.05），而和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)高度正相關(guān)（r=0.782、0.792，P<0.05），SDF-1表達(dá)與患者有腹水也呈現(xiàn)高度正相關(guān)（r=0.723，P<0.05）。見表2。

3 討論

相關(guān)資料表示[9]，微環(huán)境的組成因素主要是趨化因子。近幾年來，趨化因子的研究逐漸進(jìn)入到腫瘤的研究領(lǐng)域，腫瘤最為普遍表達(dá)的是CXCR4和SDF-1，其在腫瘤的發(fā)育過程中有著一定的作用，同時和HIV的感染、血管聲場、腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切[10-11]。SDF-A可以和乳腺癌細(xì)胞的CXCR4受體結(jié)合，其可以轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)肌蛋白的聚合[12]，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和趨化。另一方面也會出現(xiàn)在乳腺癌最常見的轉(zhuǎn)移部位，如：骨髓、淋巴結(jié)、肝臟等，均存在著高水平的配體SDF-A和CCL21[13]。薛寶瑤等[14]研究表示，子宮內(nèi)膜癌組織中有著CXCR4的表達(dá)，CXCR4和SDF1在低分化子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)程度高于中、低分化程度者。喬玉環(huán)等[15]表示：CXCR4和SDF-1的表達(dá)和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且在卵巢癌中的表達(dá)水平顯著高于卵巢良性腫瘤的表達(dá)水平。

本研究結(jié)果顯示SDF-1、CXCR4在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤和卵巢惡性腫瘤中分別表達(dá)陰性、低表達(dá)以及高表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明了SDF-1/CXCR4水平較正常人明顯升高，并且伴有血清的相關(guān)蛋白升高，同時提示了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展和SDF-1/CXCR4的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系，另一方面也說明了SDF-1/CXCR4的蛋白表達(dá)參與了卵巢癌的機(jī)制，同時促進(jìn)了腫瘤組織的新血管生成相關(guān)。SDF-1、CXCR4 蛋白表達(dá)與FIGO分期、組織學(xué)分化均無相關(guān)性，而和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性，SDF-1表達(dá)與患者腹水具有相關(guān)性，一方面提示了SDF-1/CXCR4 蛋白表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且SDF-1的表達(dá)和腹水的存在相關(guān)，SDF-1可以趨化表達(dá)CXCR4受體的卵巢癌發(fā)生腹腔轉(zhuǎn)移，另一方面證實了趨化因子及受體結(jié)合可以誘導(dǎo)新血管生成，為腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散提供了有利的條件，其還能夠誘導(dǎo)蛋白水解酶的釋放，加強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞侵襲其他組織的能力。

綜上所述，SDF-1、CXCR4的蛋白表達(dá)和卵巢癌有著一定的相關(guān)性，其可能可參與了卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程，但是與卵巢癌的組織學(xué)分化情況無關(guān)，同時SDF-1、CXCR4的蛋白表達(dá)情況可以作為卵巢的重要致病因子。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李雅麗，辛維政，王軼英.SDF-1/CXCR4在老年卵巢癌組織中的表達(dá)及意義[J].老年醫(yī)學(xué)與保健，2011， 17（6）：349-350.

[2] 單慶蓮，宋華，王瑾.CXC趨化因子受體4/基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1反應(yīng)軸及血管內(nèi)皮生長因子與卵巢癌發(fā)病的相關(guān)性[J].中國婦幼保健，2013， 28（31）：5192-5193.

[3] 喬玉環(huán)，王會軍，郭瑞霞，等.SDF-1對卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲能力作用的相關(guān)通路研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2014， 23（4）：261-265.

[4] 裘玉勤.CXCR4在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義[J].中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)， 2011， 13（18）：988-988.

[5] 陳燕燕，吳麗霞.卵巢良性、交界性和惡性組織的SDF-1和CXCR4的表達(dá)及臨床意義[J].中國婦幼保健，2016， 31（10）：2186-2188.

[6] 薛寶瑤，謝婷婷，姜霞，等.趨化因子SD-1及其受體CXCR4在卵巢癌中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014， 14（31）：6168-6170.

[7] 湯凱雯.腹腔微環(huán)境與卵巢上皮性癌腹腔轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2014，15（14）：1880-1881.

[8] 馬秀云. SDF-1、CXCR4及ERK1/2在病理性瘢痕中的表達(dá)和意義[J].鄭州大學(xué)學(xué)報，2010，6（10）：201-202.

[9] 楊志峰，楊清玲，陳昌杰.趨化因子SDF-1與受體CXCR4的研究進(jìn)展[J].分子診斷與治療雜志，2011，3（1）：58-61.

[10] 冀雅銘，崔曼，趙天源，等.間質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）及其受體CXCR4的研究與應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)信息，2014，14（25）：159.

[11] 李強(qiáng)，張林霞，張愛君，等. SDF-1-CXCR4/CXCR7信號對脂肪干細(xì)胞促血管新生能力的影響[J].組織工程與重建外科雜志，2016， 12（1）：6-10.

[12] 莫日根蘇都.SDF-1/CXCR4與胃癌相關(guān)性研究進(jìn)展[J].疾病監(jiān)測與控制，2015， 9（1）：35-36

[13] 徐楗熒，朱偉杰.SDF-1/CXCR4在女性生殖系統(tǒng)腫瘤及胚胎著床中的作用[J].生殖與避孕，2010， 30（1）：46-49.

[14] 薛寶瑤.SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制研究[D].第四軍醫(yī)大學(xué)，2015，2（12）：98-99.

[15] 喬玉環(huán)，王會軍，郭瑞霞，等.卵巢癌組織中SDF-1/CXCR4的表達(dá)與臨床病理因素相關(guān)性分析[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2014， 23（3）：175-178.

（收稿日期：2017-04-10）