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    小桐子類固醇還原酶基因Jc5β-StR的克隆和表達(dá)分析

    2017-07-12 18:05:57黃堯瑤文錦芬鄧明華龔明陳浩維
    生物技術(shù)通報(bào) 2017年7期
    關(guān)鍵詞:桐子還原酶結(jié)構(gòu)域

    黃堯瑤文錦芬鄧明華龔明陳浩維

    (1. 昆明理工大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學(xué)院,昆明 650500;2. 昆明理工大學(xué)建筑與城市規(guī)劃學(xué)院,昆明 650500;3. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院,昆明 650201;4. 云南師范大學(xué)生命科學(xué)院,昆明 650500)

    小桐子類固醇還原酶基因Jc5β-StR的克隆和表達(dá)分析

    黃堯瑤1文錦芬2鄧明華3龔明4陳浩維1

    (1. 昆明理工大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學(xué)院,昆明 650500;2. 昆明理工大學(xué)建筑與城市規(guī)劃學(xué)院,昆明 650500;3. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院,昆明 650201;4. 云南師范大學(xué)生命科學(xué)院,昆明 650500)

    以小桐子(Jatropha curcas L.)cDNA為模版,克隆了Jc5β-StR基因的CDS序列,并對(duì)其序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。序列分析表明該基因包含1 173 bp開放閱讀框(ORF),編碼390個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)其編碼蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量為44.23 kD,理論等電點(diǎn)為5.22。Blast搜索結(jié)果及進(jìn)化分析結(jié)果表明,Jc5β-StR與蓖麻5β-StR蛋白序列一致性最高(87%)且親緣關(guān)系最近。Jc5β-StR是一個(gè)短鏈還原酶,該蛋白編碼有一個(gè)短鏈還原酶家族(SDRs)的黃體酮5β還原酶(5β-POR),還含有SDRs的6個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。組織表達(dá)結(jié)果顯示Jc5β-StR在小桐子根、莖、葉、花、果皮和種子中都有表達(dá),在種子中表達(dá)量最高,且隨種子發(fā)育過程表達(dá)量逐漸上升,在種子生長發(fā)育的后期(50 d)達(dá)到最高值后下降。非生物脅迫(PEG、NaCl、低溫和機(jī)械損傷)誘導(dǎo)下,Jc5β-StR的表達(dá)量都不同程度上調(diào),推測(cè)其參與小桐子非生物脅迫響應(yīng)。

    小桐子;Jc5β-StR;克??;生物信息學(xué)分析;表達(dá)分析

    短鏈還原酶家族(Short-chain dehydrogenases/ reductases,SDRs)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最古老、最大的蛋白質(zhì)超家族之一,存在各種生物形式中,如古細(xì)菌,原核生物,真核生物和病毒等[1-2]。SDR家族成員在脂類、氨基酸、碳水化合物、激素類、異生物質(zhì)代謝和氧化還原反應(yīng)傳感機(jī)制中發(fā)揮重要作用。它們通常催化NADP(H)依賴的反應(yīng),其底物包括多元醇、類維生素A、類固醇、脂肪酸的衍生物和異源物質(zhì)等[3-4]。已報(bào)到的SDRs具有廣泛的生物學(xué)功能,不僅通過參與許多重要內(nèi)固醇化合物的合成來調(diào)控植物生長發(fā)育,如油菜素內(nèi)酯和強(qiáng)心苷等,還參與植物的脅迫應(yīng)答。半定量RT-PCR分析證實(shí),在草莓果實(shí)發(fā)育過程中,草莓短鏈還原酶基因FaSDR的表達(dá)量隨著果實(shí)的著色快速升高,揭示該基因可能參與草莓果實(shí)成熟調(diào)控[5]。擬南芥的一個(gè)短鏈還原酶基因AtHSD1通過調(diào)節(jié)油菜素內(nèi)酯生物合成,來調(diào)控植物的生長和發(fā)育[6,7]。類固醇5α-還原酶(DET2)也屬于SDR家族一員,是油菜素類固醇物質(zhì)生物合成途徑的限速酶,GbDET2基因在棉花纖維的起始和快速伸長過程中發(fā)揮著重要的作用[8]。從甘藍(lán)型油菜中克隆的β-酮脂酰輔酶A還原酶基因BnKCR1和BnKCR2在植株中普遍表達(dá),并在種子與根系中的表達(dá)最豐富,在酵母中異源表達(dá)這兩個(gè)基因恢復(fù)了酵母脂肪酸延長酶的活性[9]。胡椒(CaMNR1)和擬南芥(AtSDR1)中的薄荷酮新薄荷醇還原酶(MNR)基因增強(qiáng)了植物對(duì)多種病原菌的抗性[10]。

    類固醇5β還原酶5β-StR(3-o-Δ4,5steroid 5β-reductase)也是SDR家族的一員,能夠催化多種類固醇基質(zhì),在內(nèi)固醇化合物生物合成途徑上發(fā)揮作用。目前對(duì)于植物5β-StR的研究報(bào)道較少,Herl等[11]在2009年報(bào)道了一個(gè)擬南芥內(nèi)固醇5β還原酶基因At5β-StR,其蛋白序列和三維模型都與毛花洋地黃(Digitalis lanata)黃體酮5β還原酶(Dl5β-POR)相似度較高,5β-POR是一種類固醇化合物—強(qiáng)心苷生物合成途徑上的重要催化酶。半定量RTPCR發(fā)現(xiàn)擬南芥At5β-StR在莖和根中表達(dá)量最高,并且在甘露醇誘導(dǎo)20 h后的表達(dá)明顯增強(qiáng),推測(cè)At5β-StR還參與植物滲透脅迫調(diào)控。同年,Edyta等[12]研究報(bào)道5β-StR因?yàn)槠涮继茧p鍵活性,所以催化能力要強(qiáng)于5β-POR。

    小桐子(Jatropha curcas L.)又叫做膏桐、小油桐、老胖果、油蘆子、麻瘋樹等。原產(chǎn)熱帶美洲,分布于我國廣東、云南、四川、貴州、廣西等省區(qū)[13]。小桐子果實(shí)含油率高達(dá)60%,可以提練出不含硫、無污染、符合歐四排放標(biāo)準(zhǔn)的生物柴油,是中國重點(diǎn)開發(fā)的綠色能源樹種[14]。小桐子不擇土壤,耐干旱瘠薄,又是干熱河谷地區(qū)荒山造林的優(yōu)良樹種,具有廣泛的開發(fā)利用前景[15-16]。本研究從小桐子中克隆得到一個(gè)類固醇5β還原酶基因Jc5β-StR,進(jìn)行蛋白質(zhì)序列和功能結(jié)構(gòu)上的探討,并分析其在不同組織和非生物脅迫下的表達(dá)變化,以期為進(jìn)一步研究5β-StR基因的作用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試材料小桐子(Jatropha curcas L.)取自于云南省昆明市昆明理工大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地。取小桐子根、莖、葉、花、果皮和授粉后不同發(fā)育階段(10、20、30、40、50和60 d)的種子,立即液氮速凍后保存在-80℃的環(huán)境中備用。每種組織從10株小桐子樹上取樣,來源于3株樹上的組織混合作為1個(gè)組織樣品,4次重復(fù)。

    實(shí)驗(yàn)處理材料為穩(wěn)定成熟期的小桐子幼苗,取長勢(shì)基本一致的小桐子幼苗分別放置于NaCl(250 mmol/L)培養(yǎng)液、30% PEG 6000培養(yǎng)液和4℃培養(yǎng)箱中,機(jī)械損傷用消過毒的剪刀在每個(gè)小桐子葉片上各剪5下,注意不要剪斷葉片主脈。4種處理后的0(對(duì)照)、3、6、12和24 h取幼嫩的葉片。各處理3次重復(fù),材料用錫箔紙包好,立即液氮速凍后保存在-80℃的環(huán)境中備用。

    1.2 方法

    1.2.1 RNA的提取和cDNA第一鏈的合成 小桐子RNA用TianGen公司植物總RNA提取試劑盒(RNAprep pure Kit,DP432)提取,cDNA鏈合成用大連寶生物公司(TaKaRa PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit)試劑盒,操作過程參考說明。產(chǎn)物放置于-20℃?zhèn)溆谩?.2.2 基因克隆 Jc5β-StR基因克隆特異引物設(shè)計(jì)為Jc5β-StR-F(5'-CCTCAGCCACCAACTACTA-3')和Jc5β-StR-R(5'-GTTCAAATCAAGGCACAAT-3'),PCR擴(kuò)增用大連寶生物公司的Taq酶(TaKaRa Ex Taq Hot Start Version)和5×PCR buffer,cDNA模板加入量為2 μL,操作過程均參考說明。PCR反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性5 min,94℃變性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸40 s,35個(gè)循環(huán),72℃延伸5 min。將PCR產(chǎn)物連接到pMD18-T并雙向測(cè)序,每個(gè)基因至少5個(gè)克隆。

    1.2.3 cDNA序列及其編碼氨基酸分析 用NCBI網(wǎng)站中的ORF finder找出基因的開放讀碼框(open reading frame,ORF)和其BLASTp程序進(jìn)行同源性分析;用DNAMAN軟件進(jìn)行核酸翻譯和多序列對(duì)比,采用MEGA7.0 Neighbor-joining方法構(gòu)建進(jìn)化樹進(jìn)行親緣關(guān)系分析。利用ProtParam在線軟件分析氨基酸殘基數(shù)目、組成和蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)等參數(shù)。利用ExPASy在線分析蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)和預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)功能位點(diǎn)。通過在線軟件SOPMA預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)。用Modeling程序(http://swissmodel.expasy. org/)對(duì)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)??缒そY(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)用TMHMM-2.0 server,信號(hào)肽預(yù)測(cè)用SignalP。

    1.2.4 基因的表達(dá)分析 用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行基因表達(dá)分析。根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)特異引物序列為Jc5β-StR-qF(5'-GATTTGCCCAGATTAGACGCT-3')和Jc5β-StR-qR(5'-CAATCCCTCCTTCTTCGCTAC-3')。內(nèi)參基因序列設(shè)計(jì)為β-actin-F(5'-GCAGGCATCCACGAGACTACT-3')和β-actin-R(5'-GTCAGCAATACCAGGGAACATAG-3')。分別對(duì)反轉(zhuǎn)錄后不同組織和不同處理材料葉片cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析。反應(yīng)體系為:2 μL cDNA模板、12.5 μL Premix TaqTM、0.5 μL Jc5β-StR-qF、0.5 μL Jc5β-StR-qR、加dd H2O至25 μL。PCR反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性3 min,94℃預(yù)變性30 s,59℃退火1 min,72℃延伸30 s,72℃延伸5 min,35個(gè)循環(huán)。根據(jù)廠商推薦,在羅氏LightCycler 480系統(tǒng)上進(jìn)行。每個(gè)材料做3次獨(dú)立重復(fù),采用2-ΔΔCT方法分析處理數(shù)據(jù),在組織表達(dá)分析中用表達(dá)量最低的組織作為校正子,在種子發(fā)育過程中的時(shí)序表達(dá)分析用第一發(fā)育階段(10 d)的樣品做校正子[17]。用SPSS軟件進(jìn)行顯著性分析,Excel 2013作圖。

    2 結(jié)果

    2.1 Jc5β-StR基因的克隆

    用RT-PCR方法對(duì)Jc5β-StR進(jìn)行克隆,瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像儀上觀察得到一條大約1 200 bp的產(chǎn)物(圖1),對(duì)其測(cè)序后,用ORF finder軟件分析Jc5β-StR基因編碼氨基酸序列,完整的ORF框編碼區(qū)為1 173 bp,編碼蛋白包含390個(gè)氨基酸(圖2)。

    2.2 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析

    通過ProtParam軟件分析表明,Jc5β-StR蛋白相對(duì)分子量為44.23 kD,理論等電點(diǎn)為5.22,酸性氨基酸殘基總數(shù)(Asp+Glu)為49個(gè),堿性氨基酸殘基總數(shù)(Arg+Lys)為34個(gè),不穩(wěn)定系數(shù)為41.40,為不穩(wěn)定蛋白。原子總數(shù)是6 160個(gè),分子式為C2017H3032N520O578S13。脂肪系數(shù)為84.31,疏水系數(shù)為-0.299,為親水蛋白。

    2.3 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)分析

    通過在線軟件SOPMA對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè),結(jié)果表明Jc5β-StR蛋白含有豐富的α螺旋(Alpha he1ix)占氨基酸殘基總數(shù)的40.77%,其次是無規(guī)則卷曲(Random coil)占氨基酸殘基總數(shù)的33.08%,延伸鏈(Extended strand)占氨基酸殘基總數(shù)的17.18%,β-轉(zhuǎn)角(Beta turn)占氨基酸殘基總數(shù)的8.97%(圖3)。

    通過Prosite在線數(shù)據(jù)庫分析,發(fā)現(xiàn)Jc5β-StR蛋白序列含有3類功能位點(diǎn)包括2個(gè)N-糖基化位點(diǎn)(N-glycosylation site),7個(gè)豆蔻酰化位點(diǎn)(N-myristoylation site)和7個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)(Casein kinase II phosphorylation site)。登錄http://swissmodel.expasy.org/中的MODELING,對(duì)小桐子Jc5β-StR蛋白三級(jí)建模,結(jié)果顯示Jc5β-StR蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)模型以黃體酮5β還原酶(5β-POR)為模板,序列相似度為74.86%,建模結(jié)果如圖4所示。2.4 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位、跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)

    圖1 Jc5β-StR基因電泳檢測(cè)圖

    蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)Jc5β-StR最有可能定位在細(xì)胞質(zhì)??缒そY(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明Jc5β-StR不具有跨膜結(jié)構(gòu)域。信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果表明Jc5β-StR不具有信號(hào)肽,說明它不是一個(gè)分泌蛋白。

    2.5 Jc5β-StR序列一致性分析

    通過NCBI Blast序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)5β-StR基因在多種植物中均存在,Jc5β-StR與大戟科蓖麻(Ricinus communis)序列一致性最高,為87%;其次與胡桃科核桃(Juglans regia)序列一致性為83%,與梧桐科可可樹(Theobroma cacao)序列一致性為82%;與薔薇科白梨(Pyrus bretschneideri)序列一致性為81%;與蕓香科甜橙(Citrus sinensis)、錦葵科陸地棉(Gossypium hirsutum)、薔薇科蘋果(Malus domestica)和梅(Prunus mume)等序列一致性為80%;與大豆(Glycine max)、辣椒(Capsicum annuum)、油菜(Brassica napus)等其他幾十種植物序列一致性為75%-79%。Jc5β-StR與不同種類植物序列一致性較高,說明該基因在植物進(jìn)化過程中較保守。

    圖2 Jc5β-StR全長序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列

    圖3 Jc5β-StR蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)

    圖4 Jc5β-StR蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)

    Jc5β-StR屬于NADB Rossmann超家族(圖5)。該蛋白編碼一個(gè)短鏈還原酶家族(SDRs)的黃體酮5β還原酶(5β-POR),Jc5β-StR也有含有SDRs的6個(gè)保守結(jié)構(gòu)域(圖6),表明Jc5β-StR是一個(gè)短鏈還原酶。結(jié)構(gòu)域Ⅰ-Ⅲ在所有NADP依賴的SDRs中都存在,是典型的SDRs結(jié)構(gòu)域,余下的3種Ⅳ-Ⅵ結(jié)構(gòu)域,不是所有的SDRs都存在,特別是Ⅴ結(jié)構(gòu)域(NFYYxxED),是5β-POR類的典型結(jié)構(gòu)域[11]。

    2.6 Jc5β-StR進(jìn)化分析

    用MEAG7.0軟件對(duì)Jc5β-StR蛋白氨基酸序列和其他植物的5β-StR蛋白進(jìn)行進(jìn)化分析,結(jié)果表明,Jc5β-StR的進(jìn)化基本符合植物分類學(xué)分類,并具有明顯的種屬特性,如屬薔薇科的蘋果和梨組成一個(gè)分支,Jc5β-StR與大戟科蓖麻聚在一枝(圖7),說明其與蓖麻親緣關(guān)系最近。

    2.7 Jc5β-StR表達(dá)分析

    圖5 Jc5β-StR保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

    圖6 Jc5β-StR與不同物種5β-StR氨基酸序列對(duì)比

    以β-actin作為內(nèi)參,對(duì)小桐子Jc5β-StR在不同組織和種子不同發(fā)育階段的表達(dá)情況進(jìn)行qRT-PCR分析,分析結(jié)果表明,Jc5β-StR在小桐子根、莖、葉、花、果皮和種子中都有表達(dá),在種子和葉片中的表達(dá)量顯著高于其他組織。Jc5β-StR在種子發(fā)育過程中的定量分析(圖8)表明,該基因在種子整個(gè)生長發(fā)育期都有表達(dá),在種子生長發(fā)育前期其表達(dá)水平不斷增加,在種子生長發(fā)育的后期(50 d)達(dá)到最高值,然后下降。

    Jc5β-StR在PEG、NaCl、機(jī)械損傷和低溫4℃處理下表達(dá)都不同程度提高,PEG處理下表達(dá)水平變化顯著,在第12 h達(dá)到最高值,為對(duì)照樣品表達(dá)量的6倍左右。NaCl處理下12 h達(dá)到最高值,為對(duì)照樣品的1.8倍左右。機(jī)械損傷處理下第6 h達(dá)到最高值,為對(duì)照樣品的3.7倍左右。4℃處理下Jc5β-StR在第3小時(shí)表達(dá)水平就達(dá)到最高值,為對(duì)照樣品的2.5倍左右,之后緩慢下降(圖9)。

    圖7 不同植物5β-StR氨基酸序列進(jìn)化樹分析

    3 討論

    本研究通過RT-PCR方法從小桐子中克隆了一個(gè)小桐子類固醇5β還原酶基因(Jc5β-StR),分析其ORF大小為1 173 bp,編碼蛋白包含390個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)其相對(duì)分子量為44.23 kD,理論等電點(diǎn)為5.22。蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)其定位在細(xì)胞質(zhì),沒有跨膜結(jié)構(gòu)域,也不具有信號(hào)肽。Blast結(jié)果表明Jc5β-StR屬于NADB Rossmann超家族。其序列與同屬于大戟科的蓖麻5β-StR序列一致性最高,為87%,進(jìn)化樹分析表明其與蓖麻5β-StR親緣關(guān)系最近。該蛋白編碼一個(gè)短鏈還原酶家族(SDRs)的黃體酮5β還原酶(5β-POR),也含有SDRs的6個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,證明Jc5β-StR是一個(gè)短鏈還原酶。

    圖8 Jc5β-StR基因在不同組織(A)和種子不同發(fā)育時(shí)期(B)的表達(dá)

    圖9 小桐子Jc5β-StR基因在不同非生物脅迫處理下的表達(dá)

    類固醇化合物對(duì)植物生長發(fā)育過程具有調(diào)節(jié)作用,Mandava報(bào)道了甾和皂苷對(duì)某些植物的生長過程均有調(diào)節(jié)作用,特別是甾醇和性激素對(duì)一些植物的生長具有促進(jìn)作用[18]。種子作為小桐子的生殖器官,在發(fā)育過程中大量合成和累積類固醇化合物,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)定量分析結(jié)果,Jc5β-StR在小桐子種子中高表達(dá),并且在種子生長發(fā)育期表達(dá)量上升,種子成熟期(50 d)表達(dá)量達(dá)到最高值后下降,表達(dá)量變化過程與種子生長發(fā)育趨勢(shì)一致,進(jìn)一步驗(yàn)證了5β-StR在類固醇化合物生物合成途徑上的重要作用。保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)還表明Jc5β-StR也屬于SDRs家族一員,已報(bào)到的SDRs廣泛參與植物的初級(jí)代謝和次級(jí)代謝,在植物生長發(fā)育和抗逆機(jī)制中發(fā)揮重要作用[5-11]。本研究小桐子幼苗在PEG、NaCl、機(jī)械損傷和低溫這4種非生物脅迫處理下Jc5β-StR基因表達(dá)量都不同程度上調(diào),由此推測(cè)Jc5β-StR也參與小桐子非生物脅迫應(yīng)答。本研究為深入了解5β-StR基因的功能和小桐子的抗逆機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

    4 結(jié)論

    本研究報(bào)道了小桐子的一個(gè)內(nèi)固醇5β還原酶基因 Jc5β-StR。序列全長1 173 bp,編碼390個(gè)氨基酸。該基因編碼的蛋白含有SDRs的6個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。Jc5β-StR具有組織表達(dá)特異性,在種子中表達(dá)量最高,還受多種非生物脅迫誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)。

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    (責(zé)任編輯 狄艷紅)

    Cloning and Expression Analysis of Jc5β-StR Gene in Jatropha curcas

    HUANG Yao-yao1WEN Jin-fen2DENG Ming-hua3GONG Ming4CHEN Hao-wei11. Faculty of Modern Agricultural Engineering,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500;2. Faculty of Architecture and City Planning,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500;3. Faculty of Landscape and Horticulture,Yunnan
    Agricultural University,Kunming 650201;4. School of Life Sciences,Yunnan Normal University,Kunming 650500)

    The CDS sequence of Jc5β-StR gene was cloned with Jatropha curcas cDNA as template,and analyzed by bioinformatics analysis. The opening reading frame(ORF)of Jc5β-StR was 1 173 bp encoded 390 amino acids. The predicted molecular weight was 44.23 kD,and theoretical isoelectric point(pI)was 5.22. Blast searching and phylogenetic analysis showed that Jc5β-StR had highest identity(87%)and closest relationships with the 5β-StR of Ricinus communis. Jc5β-StR was a short-chain reductase,containing a progesterone 5β reductase(5β-POR)in a family of short chain reductase(SDRs),and also 6 conserved domains of SDRs. Jc5β-StR expressed in different tissues of root,stem,leave,flower,seed capsule,and seed,the 1highest in seed;moreover,the expression gradually rose with the development of seed,and declined after peak in the later stage of seed development(50 d). The abiotic stress such as NaCl,PEG,4℃,and mechanical damage resulted in the up-regulation of Jc5β-StR expression in varied level,indicating that Jc5β-StR involved in the response to abiotic stress.

    Jatropha curcas L.;Jc5β-StR;clone;bioinformatics analysis;expression analysis

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1114

    2016-12-08

    國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31460355)

    黃堯瑤,女,碩士研究生,研究方向:分子生物學(xué);E-mail:358680047@qq.com

    文錦芬,博士,副教授,研究方向:植物次生代謝產(chǎn)物;E-mail:wenjf888@163.com

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