T-SPOT.TB與TB-IgG檢測在結(jié)核病診斷中的價值研究

周德生，李婭

(1.廣南縣婦幼保健院檢驗科，云南文山州663300；2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，云南昆明650032)

T-SPOT.TB與TB-IgG檢測在結(jié)核病診斷中的價值研究

周德生1，李婭2

(1.廣南縣婦幼保健院檢驗科，云南文山州663300；2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，云南昆明650032)

目的探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗（TB-SPOT.TB）與血清結(jié)核分支桿菌抗體檢測試驗（TB-IgG）在結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用價值。方法回顧性調(diào)查2014年6月～2014年12月收治的273例臨床疑似結(jié)核病病例或待排病例（確診活動性結(jié)核患者41例為結(jié)核組，非結(jié)核患者232例為非結(jié)核組）進(jìn)行感染T細(xì)胞斑點試驗（T-SPOT.TB）和血清結(jié)核分支桿菌抗體（TB-IgG）平行檢測，比較兩種方法診斷結(jié)核病的敏感性、特異性，繪制ROC曲線(受試者工作特征曲線)比較兩種診斷試驗對肺結(jié)核的診斷效果。結(jié)果T-SPOT.TB檢測結(jié)核臨床診斷的敏感性為90.24%（37/41），特異性為80.17%（186/232）；TB-IgG檢測結(jié)核的敏感性為17.07%（7/41），特異性為95.69%(222/232)。結(jié)核組T-SPOT. TB檢測法陽性檢出率明顯高于TB-IgG檢測陽性率（P＜0.05）,非結(jié)核組T-SPOT.TB檢測法陽性檢出率也明顯高于TB-IgG檢測陽性率（P＜0.05）。T-SPOT.TB曲線下面積為0.852，TB-IgG檢測曲線下面積為0.564，均超過診斷有效標(biāo)準(zhǔn)0.5，且T-SPOT.TB曲線下面積＞0.7，診斷準(zhǔn)確性更好。結(jié)論T-SPOT.TB技術(shù)檢測結(jié)核病操作簡便且具有較好的敏感性，值得臨床推廣，但TB-IgG技術(shù)對排除結(jié)核病具有較好的特異性，可彌補T-SPOT.TB特異性上的不足，是防止誤診的有效補充，臨床篩查結(jié)核病可聯(lián)合使用兩種診斷方法，進(jìn)一步提高診斷價值。

結(jié)核；結(jié)核桿菌抗體；T淋巴細(xì)胞；免疫學(xué)；酶聯(lián)免疫斑點法；細(xì)胞斑點試驗

結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的主要傳染病，是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題和社會問題之一。全球有1/3人口（約20億人）曾受到結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis, MTB）感染,每年新發(fā)病例890萬，死亡達(dá)160萬［1］，我國是結(jié)核病高發(fā)國家，發(fā)病率排列世界第二位，每年新增結(jié)核病患者約145萬，死亡20萬余，是其他傳染病死亡人數(shù)總和的2倍［2］，該病已成為長期危害群眾健康的慢性傳染病。早發(fā)現(xiàn)、早隔離并及時治療活動性肺結(jié)核是預(yù)防控制該病的關(guān)鍵，而有效提高結(jié)核病檢出率是結(jié)核病防治工作的重要一環(huán)[3]。既往長期使用的結(jié)核菌素試驗（PDD）由于受卡介苗接種、非結(jié)核分枝桿菌感染、機體免疫應(yīng)答狀態(tài)等因素影響，試驗假陽性率往往比較高，臨床診斷價值受到嚴(yán)重制約[4]。隨著分子生物學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展，熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用較好的提升了結(jié)核分枝桿菌檢測的陽性率，為結(jié)核病臨床診斷、治療、療效評估提供了新的途徑，但該項檢測方法對試驗環(huán)境和操作技術(shù)都有很高要求，僅適用于有較好實驗室條件的醫(yī)院，服務(wù)可及性不高［5］。而作為結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)菌學(xué)檢查由于培養(yǎng)檢測周期長達(dá)2～6周，且檢測陽性率較低，很難實現(xiàn)結(jié)核病的早期確診[6]。因此，尋求一個簡便、快速、敏感度及特異度均較高的檢測方法已成為臨床有效診治結(jié)核病的迫切需求[7]。本研究回顧性調(diào)查273例臨床疑似結(jié)核病病例或待排病例進(jìn)行感染T細(xì)胞斑點試驗（T-SPOT. TB）和血清結(jié)核分支桿菌抗體（TB-IgG）平行檢測，以期探索兩種方法在結(jié)核病診斷上的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料回顧性調(diào)查2014年6月～2014年12月在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院治療期間同時結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗（T-SPOT.TB）、血清結(jié)核分支桿菌抗體檢測（TB-IgG）的273例患者臨床資料，其中：確診活動性結(jié)核患者41例（肺結(jié)核29例，肺外結(jié)核12例），非結(jié)核患者232例（肺炎126例，支氣管擴張48例，胸膜炎42例，肺癌16例）。將確診結(jié)核患者41例設(shè)為結(jié)核組，其中男28例，女13例，年齡12～75歲，平均（50.7±17.2）歲，所有患者符合《臨床診療指南：結(jié)核病分冊》[8]標(biāo)準(zhǔn)，痰涂片檢查顯示抗酸桿菌陽性至少1次，或支氣管鏡肺泡灌洗內(nèi)查到抗酸桿菌，或病理檢查證實具有肺結(jié)核改變；具有長期低熱、咳嗽、咳痰、咯血、消瘦、乏力等典型癥狀，胸部CT提示明顯肺結(jié)核征象，抗結(jié)核治療明顯有效，抗炎治療無效；胸腔積液患者穿刺檢查，穿刺液為滲出液，穿刺液標(biāo)本檢查可見大量淋巴細(xì)胞，腺苷脫氨酶大于45 U/L。將所有非結(jié)核病患者設(shè)為非結(jié)核組，其中：男144例，女88例，年齡3～92歲，平均（51.25±14.50）歲。兩組患者性別、年齡臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 檢測方法兩組患者均同時行T-SPOT.TB與TB-IgG檢測，具體方法如下。

1.2.1 T-SPOT.TB檢測使用上海復(fù)星科技有限公司提供的試劑盒，采集被檢者外周靜脈血，按照試劑盒操作說明書，取肝素抗凝靜脈血5 mL以上，加入Ficoll淋巴細(xì)胞分離液后離心分離外周血單個核細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。在培養(yǎng)板上每組條孔分別加入50μL細(xì)胞培養(yǎng)基作為空白對照，50μL植物血凝素作為陽性對照，50μL結(jié)核分枝桿菌特異性ESAT-6、50μLCFP-10抗原作為刺激原，之后每孔加入100μLPBMC懸液。將培養(yǎng)板放入37℃孵箱培養(yǎng)16～20 h后，取出培養(yǎng)板并用PBS洗滌4次，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗，2℃～8℃孵育1 h。洗滌培養(yǎng)板并加入顯色液50μL，室溫靜置7 min后再次洗滌培養(yǎng)板終止反應(yīng)，室溫2 h干燥計數(shù)斑點。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)陰性對照孔斑點數(shù)0～5個時（抗原A孔或抗原B孔的斑點數(shù)）減去（陰性對照孔斑點數(shù)）≥6個時為陽性；當(dāng)陰性對照孔斑點數(shù)為6～10個時（抗原A或抗原B孔斑點數(shù)≥2×空白對照孔斑點數(shù)時為陽性；如不符合上述標(biāo)準(zhǔn)，且陽性對照孔正常時檢測結(jié)果為陰性。

1.2.2 TB-IgG檢測使用法國VEDALAB出品的試劑盒，測試前將樣本與TB-IgG板塊放于室溫,使其恢復(fù)至室溫順袋沿缺口撕開包裝袋,取出試劑板。用滴管吸取樣本(血清或血漿),垂直加一滴(10 μL)至孔1中,加3滴(100 μL)稀釋液至孔2中。10～15 min觀察結(jié)果。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：檢測區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū)（C）中都出現(xiàn)一條紅線為陽性；僅質(zhì)控區(qū)（C）中出現(xiàn)一條紅線為陰性；如果質(zhì)控區(qū)（C）無紅線出現(xiàn)為無效，應(yīng)更換新的檢測卡重新檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法本研究數(shù)據(jù)均用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，比較兩種試驗方法的靈敏度、特異度，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，同時繪制ROC曲線(受試者工作特征曲線)比較兩種診斷試驗對肺結(jié)核的識別能力。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者檢驗結(jié)果比較41例結(jié)核組患者T-SPOT.TB陽性檢測率為90.24%，232例非肺結(jié)核組患者T-SPOT.TB陽性檢測率為19.82%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），T-SPOT.TB檢測結(jié)核臨床診斷的敏感性為90.24%（37/41），特異性為80.17%（186/232）。結(jié)核組TB-IgG檢測陽性率為17.07%，非結(jié)核組TB-IgG檢測陽性率為4.31%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），TB-IgG檢測結(jié)核臨床診斷的敏感性為17.07%（7/41），特異性為95.69%(222/ 232)。結(jié)核組T-SPOT.TB檢測法陽性檢出率明顯高于TBIgG檢測陽性率（P＜0.05）,非結(jié)核組T-SPOT.TB檢測法陽性檢出率也明顯高于TB-IgG檢測陽性率（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩種檢測方法效能指標(biāo)比較T-SPOT.TB陽性預(yù)測值44.6%,陰性預(yù)測值97.9%,TB-IgG陽性預(yù)測值41.23%,陰性預(yù)測值86.3%。見表2。

2.3 T-SPOT.TB與TB-IgG檢測對結(jié)核病診斷價值的ROC曲線結(jié)果根據(jù)兩種方法檢測標(biāo)本在選擇的各點上的靈敏度和特異度,繪成ROC曲線，其中，T-SPOT.TB曲線下面積為0.852，TB-IgG檢測曲線下面積為0.564，均超過診斷有效標(biāo)準(zhǔn)0.5[9]，且T-SPOT.TB曲線下面積＞0.7，診斷準(zhǔn)確性更好。見圖1。

表1 兩組患者血T-SPOT.TB法和TB-CHECK-1法檢測結(jié)果[n(%)]

表2 兩種方法約登指數(shù)、＋PV、－PV、LR(＋)、LR(－)的比較

圖12 種方法檢測的ROC曲線分析及AUC比較

3 討論

目前，對臨床疑似結(jié)核患者的及時準(zhǔn)確診斷仍然是臨床工作的難點與重點，特別是肺外結(jié)核患者，由于其臨床癥狀及體征普遍不典型，缺乏有效的診斷措施極容易造成漏診或誤診[10]，影響患者的早日康復(fù)，并給結(jié)核病防控帶來重大挑戰(zhàn)。

T-SPOT.TB與TB-IgG檢測是目前輔助診斷結(jié)核病的重要實驗室方法，T-SPOT.TB診斷是建立在酶聯(lián)免疫斑點試驗基礎(chǔ)上的結(jié)核診斷方法，其本質(zhì)是以T細(xì)胞免疫應(yīng)答作為基礎(chǔ)的γ-干擾素釋放試驗，通過檢測結(jié)核分支桿菌特異性抗原ESAT-6和CFP-10特異性效應(yīng)T細(xì)胞從而判斷患者是否感染結(jié)核桿菌，其反映的是機體對結(jié)核菌的細(xì)胞免疫情況［11］。而TB-IgG檢測則是利用免疫層析法檢測結(jié)核桿菌抗體的一種方法，是快速的定性過篩試驗，能特異性地檢測出活動性結(jié)核患者血清中的抗結(jié)核桿菌抗體，反映機體對結(jié)核菌的體液免疫的情況[12]。

本研究對273例臨床疑似結(jié)核病病例或待排病例進(jìn)行了T-SPOT.TB和TB-IgG檢測平行檢測，結(jié)果顯示T-SPOT.TB檢測敏感性為90.24%，特異性為80.17%，約登指數(shù)及陽性似然比均高于TB-IgG檢測，這可能與T-SPOT.TB檢測在結(jié)核感染的早期或者既往感染的患者均能檢測出效應(yīng)T細(xì)胞，靈敏度高有關(guān)[13]，提示該方法檢測結(jié)核感染、輔助結(jié)核診斷治療方面有較高的敏感性和特異度。而TB-IgG檢測敏感性僅為17.07%，可能TB-IgG多出現(xiàn)在結(jié)核病的中晚期，同時由于人群受外環(huán)境結(jié)核分枝桿菌感染較為常見，以及普遍接種卡介苗、個體免疫功能差異性等因素影響，使血清結(jié)核抗體測定存在較高的交叉反應(yīng)，不可避免的假陽性和假陰性，從而降低檢測敏感性[14]。T-SPOT.TB檢測ROC曲線下面積達(dá)0.852，遠(yuǎn)高于TB-IgG的0.564，也證實TB-IgG檢測具有更好的檢測準(zhǔn)確性，可應(yīng)用于臨床診斷的判斷標(biāo)準(zhǔn)[15]。值得注意的是TB-IgG檢測特異性為95.69%，陰性似然比為0.866，遠(yuǎn)高于T-SPOT.TB檢測的0.122，提示TB-IgG檢測具有較好的排除性診斷效果，臨床應(yīng)加強兩種方法的聯(lián)合檢測，已切實提高診斷的準(zhǔn)確性[16]。

綜上所述，T-SPOT.TB技術(shù)檢測結(jié)核病操作簡便且具有較好的敏感性，值得臨床推廣，但TB-IgG技術(shù)對排除結(jié)核病具有較好的特異性，可彌補T-SPOT.TB特異性上的不足，是防止誤診的有效補充，臨床篩查結(jié)核病可聯(lián)合使用兩種診斷方法，進(jìn)一步提高診斷價值。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.18.067

李婭，E-mail：13708710060@139.com